一株硝基还原假单胞菌及其在水稻抗旱、促生中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株硝基还原假单胞菌及其在水稻抗旱、促生中的应用，所述菌株分类命名为Pseudomonas nitroreducens LSF

【技术实现步骤摘要】
一株硝基还原假单胞菌及其在水稻抗旱、促生中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体而言，涉及一株硝基还原假单胞菌LSF
‑
6及其在水稻抗旱、促生中的应用。

技术介绍

[0002]干旱缺水是影响全球农业可持续发展的主要限制因子之一。根鞘，也称沙套，最早在沙漠等缺水地区被发现，是植物应对水分胁迫所产生的适应性结构。一些处于干旱胁迫下的大麦、小麦、玉米和高粱等禾本科植物都可以形成根鞘。根鞘是以根毛为骨架，由根表黏液将根际土壤颗粒紧紧粘附于植物根表面的一种鞘状结构，是植物根系—土壤—微生物相互作用的结果。根鞘结构的形成促进了植物根—土界面的信息交流以及水分和养分的交换。微生物是植物根鞘建成的主要影响因素之一。因此，分离和应用土壤中能促进水稻根鞘建成的微生物，是提高水 稻耐旱性的有效途径。

技术实现思路

[0003]为此，本专利技术提供一株硝基还原假单胞菌LSF
‑
6及其在水稻抗旱、促生中的应用。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：一株硝基还原假单胞菌LSF
‑
6，所述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的分类命名为硝基还原假单胞菌（Pseudomonas nitroreducens），其已于2022年5月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO：M 2022607。
[0005]进一步的，上述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6分离自水稻根鞘。
[0006]进一步的，上述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]进一步的，上述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6在LB固体培养基上的菌落为淡黄色、半透明、圆形，边界不清晰；菌体形态为球形。
[0008]一种抗旱促生菌剂，所述的菌剂包括保藏编号为CCTCC NO：M 2022607的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6。
[0009]上述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6或上述的菌剂在促进水稻生长中的应用。
[0010]上述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6或上述的菌剂在提高水稻抗旱能力中的应用。
[0011]上述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6或上述的菌剂在提高水稻抗旱能力的同时促进水稻生长中的应用。
[0012]本专利技术的显著优点在于：本专利技术的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6具有提高水稻根鞘建成的特性，回接试验发现，在干旱处理下，与对照处理相比，接种硝基还原假单胞菌LSF
‑
6可以显著提高水稻的根毛长度、总根长、单位根鞘及水分利用率。同时，接种了硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的水稻植株叶绿素含量、净光合速率、气孔导度及蒸腾速率也都显著提高。总之，本专利技术的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6是一种新的促生菌，其可以显著提高水稻耐旱性，进而促进水稻绿色生产。
附图说明
[0013]图1：硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的菌落形态。
[0014]图2：硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的菌体形态。
[0015]图3：硝基还原假单胞菌LSF
‑
6对水稻生物量的影响。
[0016]图4：硝基还原假单胞菌LSF
‑
6对水稻光合参数的影响。
[0017]图5：硝基还原假单胞菌LSF
‑
6对水稻根系发育的影响。
[0018]图6：硝基还原假单胞菌LSF
‑
6对水稻根鞘建成及水分利用率的影响。
具体实施方式
[0019]以下对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0020]下述实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。
[0021]下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0022]下述实施例中，使用的假单胞菌CFC选择性固体培养基的配置方法为：明胶蛋白胨16 g、酸水解酪蛋白10 g、K2SO
4 10 g、MgCl
2 1.4 g、琼脂15 g、甘油10 g溶解于1 L去离子水中，121℃高温灭菌15 min，冷却至50℃左右时，每200 mL培养基中加入十六烷三甲基溴化铵2 mg、梭链孢酸钠2 mg以及先锋霉素II 10 mg，混匀，倒平板，备用。
[0023]实施例1 菌株RS63的分离及筛选干燥土壤通过4 mm筛网进行筛分，然后加水至规定的含水量（每1 kg干土加220 mL水），将湿润的土壤充分混合后，用4 mm的筛网进行第二次筛分，以去除任何粗物质，再将其装入容量约为600 mL大小（下底面直径：6 cm，上底面直径：9 cm，高：15 cm）的塑料杯中（每个塑料杯中装大约480 g土）。选取长势一致的水稻幼苗移栽到土壤中，放入温室培养。温室设置24 h为一个周期，光照强度为300 μmol m
‑
2 s
‑1，相对湿度70%，光照14 h（26 ℃）/黑暗10 h（22 ℃）。幼苗移栽至土壤中后，先进行一周的缓苗处理，缓苗期间每天浇20 mL水，保证水稻的正常生长。缓苗结束后通过称重的方式将样品调控至统一的起始含水量，开始进行为期两周的干旱处理。干旱处理中，土壤含水量保持在田间最大持水量的80%。
[0024]取1g干旱处理后的水稻根鞘，置于10 mL无菌水中，充分混匀。取1 mL土壤悬浮液用无菌水进行梯度稀释，由于土壤中细菌丰度较高，因此对土壤中细菌进行筛选时取10
‑3和10
‑4浓度梯度菌悬液各100 μL分别涂布于假单胞菌CFC选择性固体培养基上，倒置于28℃恒温箱中暗培养3天，期间注意观察菌落生长状态。3 天后挑取单菌落，并进行划线纯化，得到纯培养物。
[0025]将从水稻根鞘中分离得到的菌株纯培养物进行根鞘建成能力检测：将
‑
80℃保存的菌株划线接种于LB固体培养基，置于28℃培养箱进行培养。待长出单克隆后，挑取单克隆转接于5 mL的LB液体培养基中培养，置于28℃、200 rpm的摇床上培养，震荡至菌液OD
600 = 1.0。将培养得到的菌液取500 μL，转接到50 mL LB液体培养基中，于28℃、200 rpm条件下继续培养2~3天，震荡至OD
600 = 1.5。随后，将培养得到的菌液以5000 rpm的速度离心10 min，收集菌体沉淀并用无菌水悬浮、调整OD
600
值至0.2。将水稻种子按20粒/盆种植于装有水稻土的盆钵中，选取长势一致的水稻苗，每盆移栽一株经过表面消毒的水稻苗，实验设置为接种处理和不接种处理，实验组每盆基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株硝基还原假单胞菌LSF
‑
6，其特征在于：所述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的分类命名为Pseudomonas nitroreducens LSF
‑
6，其已于2022年5月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO：M 2022607。2.根据权利要求1所述的硝基还原假单胞菌LSF
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6，其特征在于：所述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6分离自水稻根鞘。3.根据权利要求1所述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6，其特征在于：所述的硝基还原假单胞菌LSF
‑
6的16S rDNA序列如 SEQ ID NO.1所示。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：许飞云，许卫锋，袁伟，张仟，刘建平，王珂，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：