包含抗LAG-3抗体和IL-2的融合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及包含抗LAG

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含抗LAG
‑
3抗体和IL
‑
2的融合蛋白及其用途


[0001]本专利技术涉及包含抗LAG
‑
3抗体和IL
‑
2的融合蛋白及其用途。具体地，本专利技术涉及一种具有治疗或预防癌症功效的新型融合蛋白。

技术介绍

[0002]癌症免疫疗法是一种利用体内免疫反应来治疗癌症的方法。癌症免疫疗法可以通过靶向抗原(如癌细胞的表面蛋白)来诱导免疫系统攻击癌细胞。特别是，据报道，可以通过阻断免疫检查点途径来激活抗癌免疫。免疫检查点是肿瘤细胞引起免疫规避的主要机制之一。因此，抑制或阻断免疫检查点可以增加T细胞的活化，从而增强抗肿瘤免疫。
[0003]同时，IL
‑
2主要由活化的T细胞合成，特别是CD4+辅助T细胞。IL
‑
2刺激T细胞的增殖和分化，并诱导产生细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)和外周血淋巴细胞分化为细胞毒性细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)。
[0004]然而，IL
‑
2在免疫应答中具有双重功能，因为它不仅对介导免疫细胞数量的增加及其活性很重要，而且对维持免疫耐受也很重要。此外，据报道，IL
‑
2可能不是抑制肿瘤生长的最佳选择。原因是在IL
‑
2的存在下，所产生的细胞毒性T淋巴细胞中可能发生活化诱导的细胞死亡(AICD)，并且IL
‑
2依赖的调节性T细胞(Treg)可能抑制免疫应答(Imai et al.,Cancer Sci 98,416 to 423,2007)。
[0005]同时，已知LAG
‑
3具有与PD
‑
1相似的机制。LAG
‑
3是一种在T细胞和NK细胞中表达的免疫检查点抑制剂，具有与CD4相似的结构。然而，LAG
‑
3在D1结构域中有30个附加的氨基酸，因此已知它与MHC II类(MHCII)具有高亲和力。

技术实现思路

[0006]技术问题
[0007]因此，本专利技术人研究开发了一种具有新组合的融合蛋白，它能增强免疫细胞的活性。结果，本专利技术人证实了包含抗LAG
‑
3抗体和IL
‑
2变体的融合蛋白能有效地调节免疫细胞。基于该结果，本专利技术人确认了所述融合蛋白作为抗癌剂是有效的，从而完成了本专利技术。
[0008]问题的解决方案
[0009]为了实现上述目的，在本专利技术的一个方面，提供了一种融合蛋白，其包含特异性结合LAG
‑
3的抗体和IL
‑
2蛋白或其变体。
[0010]在本专利技术的另一个方面，提供了编码所述融合蛋白的多核苷酸、包括所述多核苷酸的表达载体，以及已导入所述表达载体的转化细胞。
[0011]在本专利技术的另一个方面，提供了一种制备融合蛋白的方法，所述方法包括培养所转化的细胞和收集融合蛋白。
[0012]在本专利技术的另一个方面，提供了所述融合蛋白及其医学用途。
[0013]在本专利技术的又一个方面，提供了所述融合蛋白用于治疗或预防癌症的用途。
[0014]在本专利技术的又一个方面，提供了一种用于治疗或预防癌症的方法，所述方法包括
向受试者施用所述融合蛋白。
[0015]在本专利技术的又一个方面，提供了所述融合蛋白在制造治疗或预防癌症的药物中的用途。
[0016]专利技术的效果
[0017]本专利技术所述的包含抗LAG
‑
3抗体和IL
‑
2变体的融合蛋白，不仅可以调节与LAG
‑
3相关的机制，而且还具有与IL
‑
2相同或相似的功能。也就是说，所述融合蛋白不仅能调节LAG
‑
3和MHCII的结合，还能激活免疫细胞。因此，所述融合蛋白可以作为一种抗癌剂使用。
附图说明
[0018]图1示出了作为一个实施方案的抗hLAG
‑
3抗体
‑
hIgG4 Fc
‑
hIL
‑
2v2融合蛋白(GI
‑
104E1)的结构。
[0019]图2示出了作为一个实施方案的抗hLAG
‑
3抗体
‑
hIgG4 Fc
‑
hIL
‑
2v3融合蛋白(GI
‑
104E2)的结构。
[0020]图3为产生GI
‑
104E1并随后通过SDS
‑
PAGE确认的图。
[0021]图4为产生GI
‑
104E2并随后通过SDS
‑
PAGE确认的图。
[0022]图5为产生GI
‑
104E1并随后通过western blot确认的图。
[0023]图6为产生GI
‑
104E2并随后通过western blot确认的图。
[0024]图7示出了融合蛋白GI
‑
104E1或GI
‑
104E2的作用机制和实验方法。
[0025]图8为用LAG
‑
3阻断实验验证GI
‑
104E1是否与LAG
‑
3结合并抑制LAG
‑3‑
MHCII介导的信号传递的图。
[0026]图9为用LAG
‑
3阻断实验验证GI
‑
104E2是否与LAG
‑
3结合并抑制LAG
‑3‑
MHCII介导的信号传递的图。
[0027]图10为示出对皮下移植CT26癌细胞的小鼠分别施用载体(PBS)、抗LAG
‑
3抗体、Fc
‑
IL
‑
2v2、抗LAG
‑
3抗体和Fc
‑
IL
‑
2v2的组合以及包含抗LAG
‑
3抗体和IL
‑
2v2的融合蛋白(GI
‑
104E1)，每周一次，持续三周后观察到的肿瘤体积的图。
[0028]图11为示出对皮下移植CT26癌细胞的小鼠分别施用载体(PBS)、抗LAG
‑
3抗体、Fc
‑
IL
‑
2v2、抗LAG
‑
3抗体和Fc
‑
IL
‑
2v2的组合以及包含抗LAG
‑
3和IL
‑
2v2的融合蛋白(GI
‑
104E1)后受试者的肿瘤体积的图。
[0029]图12为示出对皮下移植CT26癌细胞的小鼠施用载体(PBS)组的受试者的肿瘤体积的图。
[0030]图13为示出对皮下移植CT26癌细胞的小鼠施用抗LAG
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白，其包含特异性结合LAG
‑
3的抗体；和IL
‑
2蛋白。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述特异性结合LAG
‑
3的抗体包括含有如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:2所示的HCDR2和如SEQ ID NO:3所示的HCDR3的重链可变区；和含有如SEQ ID NO:5所示的LCDR1、如SEQ ID NO:6所示的LCDR2和如SEQ ID NO:7所示的LCDR3的轻链可变区。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述特异性结合LAG
‑
3的抗体包括含有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链可变区和如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的轻链可变区。4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含两个IL
‑
2蛋白。5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述IL
‑
2蛋白为IL
‑
2变体。6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述IL
‑
2变体在选自由R38A、F42A、Y45A、E61R、L72G及其组合组成的组中的位置被替换。7.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述IL

【专利技术属性】
技术研发人员：张明浩，曹英圭，吴永珉，沈艺仁，
申请(专利权)人：GI医诺微新，
类型：发明
国别省市：