包含IL-2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白制剂制造技术

本发明专利技术涉及具有提高的融合蛋白稳定性的药物制剂，所述融合蛋白包含修饰的IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含IL
‑
2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白制剂


[0001]本专利技术涉及具有增强的融合蛋白稳定性的液体制剂，所述融合蛋白包含IL
‑
2蛋白和CD80蛋白。

技术介绍

[0002]IL
‑
2，也称为T细胞生长因子，是一种在淋巴细胞的产生、存活和稳态中起核心作用的球状糖蛋白。IL
‑
2的蛋白质大小为约15.5kDa至约16kDa，由133个氨基酸组成。IL
‑
2通过与由三个不同亚基组成的IL
‑
2受体结合来介导各种免疫作用。此外，IL
‑
2主要由活化的T细胞合成，特别是由CD4+辅助T细胞合成。IL
‑
2刺激T细胞的增殖和分化，并诱导细胞毒性T淋巴细胞的产生和外周血淋巴细胞分化为细胞毒性细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞。
[0003]此外，IL
‑
2参与B细胞的增殖和分化，并促进B细胞合成免疫球蛋白。此外，IL
‑
2刺激自然杀伤细胞的产生、增殖和活化。因此，IL
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2被用作抗癌剂，因为它可以增加淋巴细胞数量并增强体内免疫细胞的功能。目前，用IL
‑
2进行治疗已获批准用于转移性肾细胞癌和恶性黑色素瘤患者。
[0004]然而，IL
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2具有双重功能，因为它不仅对介导增加免疫细胞数量及增强其活性很重要，而且对维持免疫耐受也很重要。此外，据报道，IL
‑
2可能不是抑制肿瘤生长的最佳选择。原因是在IL
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2存在的情况下，活化诱导的细胞死亡(AICD)可能发生在所产生的细胞毒性T淋巴细胞中，并且免疫反应可能被IL
‑
2依赖性调节性T细胞(Treg细胞)抑制(Imai et al.,Cancer Sci 98,416
‑
423,2007)。
[0005]此外，接受IL
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2的患者会出现严重的心血管、肺部、肾脏、肝脏、胃肠道、神经元、皮肤、血液和全身性副作用。因此，已经研究了多种IL
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2突变体以提高IL
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2的治疗作用并使其副作用最小化(US 5,229,109 B)。然而，为了将IL
‑
2用于药理学目的，仍有许多问题需要解决。
[0006]另一方面，CD80，也称为B7
‑
1，是膜结合蛋白B7家族的成员，该B7家族通过与其配体结合，凭借传递共刺激反应和共抑制反应来参与免疫调节。CD80是一种表达于T细胞、B细胞、树突细胞和单核细胞表面上的跨膜蛋白。已知CD80与CD28、CTLA4(CD152)和PD
‑
L1结合。CD80、CD86、CTLA4和CD28参与共刺激
‑
共抑制系统。例如，已知CD80调节T细胞的活性并参与其增殖、分化和存活。
[0007]例如，当CD80和CD86与CD28相互作用时，会产生共刺激信号以活化T细胞。最终，CD80与在活化的T细胞的表面上表达的CTLA4结合，并刺激CTLA4上调。因此，CD80在由CD80/CD28相互作用引起的免疫反应操作之前抑制T细胞反应。该反馈回路允许对免疫反应进行精细调节。
[0008]此外，已知CD80与另一个B7家族成员PD
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L1结合，其亲和力类似于CD28与PD
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L1结合的亲和力。PD
‑
L1被称为程序性死亡
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1(PD
‑
1)蛋白的两种配体之一，并且已知PD
‑
L1参与T细胞调节。CD80与PD
‑
L1的结合是另一种可以阻断PD
‑
1/PD
‑
L1相互作用的机制，这可能会阻止对肿瘤中对T细胞反应的抑制。然而，CD80水平的升高会导致CD80与CD28结合，从而诱导T
细胞反应。同时，CD80可与CTLA4结合，从而抑制T细胞反应。
[0009]已证实包含CD80片段、免疫球蛋白Fc和IL
‑
2变体的融合蛋白可活化免疫细胞，同时可以控制调节性T细胞的免疫细胞调节活性，从而可以有效地治疗癌症和传染病(KR 10
‑
2201086 B1)。为了将这种蛋白有效地应用于癌症疾病和传染病的治疗，有必要开发一种提供给药和施用优势的稳定、高浓度的蛋白制剂。

技术实现思路

[0010]技术问题
[0011]本专利技术人开发了一种具有增加的新型融合蛋白二聚体稳定性的制剂，该融合蛋白二聚体在一个分子中包含IL
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2蛋白和CD80蛋白，从而完成了本专利技术。
[0012]解决方案
[0013]为了实现上述目的，在本专利技术的一个方面，提供了包含融合蛋白二聚体的药物制剂，所述融合蛋白二聚体包含IL
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2蛋白和CD80蛋白。
[0014]专利技术效果
[0015]包含IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白二聚体不仅可以通过IL
‑
2活化免疫细胞，还可以通过CD80有效调节Treg细胞。为了在临床上使用这种融合蛋白二聚体，必须确保蛋白质制剂的稳定性。当根据本专利技术的药物制剂应用于包含IL
‑
2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白二聚体时，融合蛋白二聚体的稳定性显著提高，并且该制剂可以作为液体制剂使用。因此，可以增加融合蛋白二聚体的商业适用性。
附图说明
[0016]图1示出了用SDS
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PAGE检测获得的融合蛋白(GI
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101)的结果。
[0017]图2示出了根据吸光度的融合蛋白(GI
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101)的量。
[0018]图3示出了通过尺寸排阻色谱法(SEC)分析获得的融合蛋白(GI
‑
101)的结果。
[0019]最佳具体实施方式
[0020]包括含有IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白的药物制剂
[0021]在本专利技术的一个方面，提供了一种药物制剂，该药物制剂包括：(i)浓度为3.0mg/mL至5.0mg/mL的包含IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白二聚体；(ii)浓度为10mM至30mM的缓冲剂；和(iii)浓度为0.155w/w％至0.185w/w％的表面活性剂；其中，制剂的pH为6.5至7.5。
[0022]这里，药物制剂可以是液体制剂。
[0023]包含IL
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2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白
[0024]如本文所用，除非另有说明，否则术语“IL
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2”或“白细胞介素
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2”是指从任何脊椎动物来源获得的任何野生型IL
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2，脊椎动物包括哺乳动物，例如灵长类动物(如人类)和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种药物制剂，包含：(i)浓度为3.0mg/mL至5.0mg/mL的包含IL
‑
2蛋白和CD80蛋白的融合蛋白二聚体；(ii)浓度为10mM至30mM的缓冲剂；和(iii)浓度为0.155w/w％至0.185w/w％的表面活性剂；其中，制剂的pH为6.5至7.5。2.根据权利要求1所述的药物制剂，其中，所述融合蛋白二聚体的浓度为3.6mg/mL至4.4mg/mL。3.根据权利要求1所述的药物制剂，其中，所述缓冲剂是组氨酸。4.根据权利要求3所述的药物制剂，其中，所述组氨酸的浓度为20mM。5.根据权利要求1所述的药物制剂，其中，所述制剂的pH为6.8至7.2。6.根据权利要求5所述的药物制剂，其中，所述制剂的pH为7.0。7.根据权利要求1所述的药物制剂，其中，所述表面活性剂是选自由以下组成的组中的两种：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85、泊洛沙姆181、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407和聚乙二醇(PEG)。8.根据权利要求7所述的药物制剂，其中，所述表面活性剂是泊洛沙姆188和聚山梨醇酯80。9.根据权利要求8所述的药物制剂，其中，所述泊洛沙姆188的浓度为0.065w/w％至0.075w/w％，以及所述聚山梨醇酯80的浓度为0.09w/w％至0.11w/w％。10.根据权利要求1所述的药物制剂，其中，所述药物制剂还包含氨基酸。11.根据权利要求10所述的药物制剂，其中，所述氨基酸是选自由以下组成的组中的任一种：精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明浩，吴永珉，林宪昶，
申请(专利权)人：GI医诺微新，
类型：发明
国别省市：