靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKRR或WKHWYK。本发明专利技术通过分子对接虚拟筛选技术，以TAstV

【技术实现步骤摘要】
靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用


[0001]本专利技术涉及靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用，属于生物


技术介绍

[0002]鹅星状病毒(Goose astrovirus，GAstV)作为一种新发病原，可导致雏鹅全身性内脏痛风，表现为高感染率和高死亡率。2016年暴发以来，给中国养鹅业带来了严重损失。刺突蛋白(Spike)位于鹅星状病毒表面，是重要的抗原蛋白，可诱导宿主的免疫反应，并介导病毒粒子与细胞表面受体的结合，因此Spike蛋白是诊断试剂开发和药物筛选的重要靶标。
[0003]在治疗病毒性疾病的策略中，除病毒复制酶之外，干扰病毒入胞也是一种有效的途径，并且相较于胞内靶点其作用更直接有效。通常有两种方式阻止病毒入胞：其一，靶向病毒结合的细胞受体来阻止病毒进入宿主细胞；其二，靶向病毒的表面蛋白来阻止病毒的吸附过程。然而，作为与病毒入胞相关的受体蛋白往往担负着较为复杂的生理功能，一旦封闭，很可能会引起机体相关的副作用；因此，靶向病毒表面蛋白的药物设计策略是一种较为理想的抗病毒药物开发思路。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供3条鹅星状病毒Spike蛋白亲和肽及其应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]一种靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKRR或WKHWYK。
[0007]所述的亲和肽在制备抑制鹅星状病毒感染药物方面的应用。
[0008]本专利技术有益效果：
[0009]本专利技术通过分子对接虚拟筛选技术，期望获得靶向GAstV Spike蛋白的亲和性多肽配基。首先以TAstV
‑
2Spike蛋白的晶体结构为模板，运用SWISS
‑
MODEL软件进行同源建模，获得GAstV Spike蛋白的三维结构。接下来利用SYBYL软件选定Spike蛋白结构的C端部分区域为活性口袋，再运用Surflex
‑
Dock/SYBYL功能将库中的多肽配基与选定口袋进行分子对接，最后根据Cscore综合评估对接结果，筛选出30条特异识别GAstV Spike蛋白的亲和肽，为后续抗病毒多肽药物的研究奠定了基础。
[0010]本专利技术将30条人工合成的亲和肽与GAstV共孵育后接种到LMH细胞上，通过IPMA直接筛选抑制GAstV增殖的多肽，并对筛选出的多肽进行细胞毒性鉴定，综合实验结果筛选出3条GAstV高效抗病毒亲和肽；采用ELISA、IFA、TCID
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等方法进一步证实了该亲和肽的抗病毒活性，并确定了其对应的抗病毒靶点。
附图说明
[0011]图1 GAstV Spike蛋白同源建模后3D结构展示。
[0012]图2分子对接最佳活性口袋展示。
[0013]图3 IPMA筛选抑制GAstV增殖的多肽AP19(
×
200μm)。
[0014]其中，A：多肽处理；B：阳性对照；C：阴性对照。
[0015]图4 IPMA筛选抑制GAstV增殖的多肽AP21(
×
200μm)。
[0016]其中，A：多肽处理；B：阳性对照；C：阴性对照。
[0017]图5 IPMA筛选抑制GAstV增殖的多肽AP30(
×
200μm)。
[0018]其中，A：多肽处理；B：阳性对照；C：阴性对照。
[0019]图6多肽AP19的细胞毒性试验。
[0020]图7多肽AP21的细胞毒性试验。
[0021]图8多肽AP30的细胞毒性试验。
[0022]图9多肽AP19的ELISA鉴定。
[0023]其中，1：阴性对照；2：多肽组。
[0024]图10多肽AP21的ELISA鉴定。
[0025]其中，1：阴性对照；2：多肽组。
[0026]图11多肽AP30的ELISA鉴定。
[0027]其中，1：阴性对照；2：多肽组。
[0028]图12 IFA检测GAstV感染细胞。
[0029]其中，A：阳性对照；B：20μM多肽AP19；C：40μM多肽AP19；D：阴性对照。
[0030]图13 IFA检测GAstV感染细胞。
[0031]其中，A：阳性对照；B：20μM多肽AP21；C：80μM多肽AP21；D：阴性对照。
[0032]图14 IFA检测GAstV感染细胞。
[0033]其中，A：阳性对照；B：20μM多肽AP30；C：80μM多肽AP30；D：阴性对照。
[0034]图15亲和肽AP19抑制GAstV增殖滴度。
[0035]图16亲和肽AP21抑制GAstV增殖滴度。
[0036]图17亲和肽AP30抑制GAstV增殖滴度。
[0037]图18抗病毒靶点的3D结构(亲和肽AP19)。
[0038]其中，A，B为3D结构的不同展现形式。
[0039]图19抗病毒靶点的3D结构(亲和肽AP21)。
[0040]其中，A，B为3D结构的不同展现形式。
[0041]图20抗病毒靶点的3D结构(亲和肽AP30)。
[0042]其中，A，B为3D结构的不同展现形式。
具体实施方式
[0043]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。如无特别说明，实施例中所涉及的仪器设备均为常规仪器设备；涉及试剂均为市售常规试剂；涉及试验方法均为常规方法。
[0044]实施例1鹅星状病毒Spike蛋白亲和肽的虚拟筛选
[0045]1、GAstV Spike蛋白晶体结构的准备
[0046]鉴于GAstV Spike蛋白晶体结构尚未解析，运用SWISS
‑
MODEL将Spike蛋白的氨基酸序列与同属Spike蛋白进行同源性比对，发现它与火鸡星状病毒TAstV
‑
2 Spike蛋白同源性为44.85％，因此以TAstV
‑
2Spike蛋白结构(PDB ID：3TS3)为模板，利用SWISS
‑
MODEL(http://beta.swissmodel.expasy.org/)进行同源建模，获得GAstV Spike蛋白的结构模型。
[0047]对GAstV Spike蛋白氨基酸序列(SEQ ID NO.31)进行同源建模，如图1所示最终得到该蛋白结构为同源二聚体形式，类似于一个紧密堆积的心脏。
[0048]SEQ ID NO.31：
[0049]QATPSLVYNFQGGRQSTTESCSFLVFGIPQAESRSRYNAAITFNVGYRGRTSTSFTLGTHNWWAVMTLSQTGVIFAPPAVGTGVCNTLATAIQHLNPELETAVLRVNTSTTSTGGLIT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽，其特征在于，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKR...

【专利技术属性】
技术研发人员：金前跃，张改平，王方雨，郭振华，卢清侠，邢广旭，张桂悦，魏蔷，王丽，柴书军，邢云瑞，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：