一种短肽、一种蛋白核小球藻多肽提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种短肽、一种蛋白核小球藻多肽提取物及其制备方法和应用，属于功能性多肽技术领域。本发明专利技术能够克服现有技术中微藻多肽降脂产品性能有待提升的问题。本发明专利技术提供的短肽FLGPF分子量较小，且对胰脂肪酶活性抑制率较高，通过本发明专利技术制备方法得到的蛋白核小球藻多肽提取物中短肽FLGPF含量可达到7.1～8.6％，具有良好的利用前景。本发明专利技术提供的蛋白核小球藻多肽提取物能够显著降低秀丽隐杆线虫体内的甘油三酯和胆固醇含量，说明在减肥功能食品或保健品开发中具有良好的应用前景。本发明专利技术为开发安全有效的胰脂肪酶抑制剂提供技术支持，对于促进小球藻产业的发展也具有重要意义。意义。意义。

【技术实现步骤摘要】
一种短肽、一种蛋白核小球藻多肽提取物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及功能性多肽
，尤其涉及一种短肽、一种蛋白核小球藻多肽提取物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]小球藻属绿藻门(Chlorophyta)、绿藻纲(Chlorophyceae)、绿球藻目(Chloroco ccales)、卵囊藻科(Oocystaceae)、小球藻属(Chlorella)，是一类普生性单细胞绿藻，生态分布极广，生长速度快，易于培养，应用价值高。蛋白核小球藻含有大量蛋白质和叶绿素，含量分别高达干重的42～58％和3～5％，其氨基酸组成高于世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)颁布的用于人类营养的蛋白质标准，是一种食用安全的优质蛋白质资源。小球藻蛋白及其水解多肽的多种生物活性已有相关报道，主要集中在抗氧化活性、抗肿瘤、降血糖、降血压、矿物螯合作用等。
[0003]随着人们物质生活的不断提高，不健康的高脂饮食和不良生活习惯诱发多种慢性疾病的发生。调查表明，我国成人脂代谢紊乱的比例高达30％，目前常用降脂药物肝毒性大，对继发性脂代谢紊乱疗效不理想。寻找具有改善脂质代谢作用的天然生物资源，开发高效低毒的调节血脂的营养保健食品及生物医药成为当前全球关注和研究的热点。
[0004]近年来，许多研究表明源于天然蛋白的生物活性肽具有显著的降血脂效应，且药效持续长，副作用小，而且活性肽分子质量较小，细胞透过性较好，易被人体消化吸收，作为一种能有效改善体内血脂平衡的天然活性物质，受到广大学者的关注，在功能性食品、保健品和药品等高科技产业中也展现出巨大的潜力，目前现有的微藻源多肽分子量较大，在生物利用度方面的性能仍有待提升。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种短肽、一种蛋白核小球藻多肽提取物及其制备方法和应用，以解决现有技术中多肽降脂产品性能有待提升的问题。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种短肽，所述短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供了上述短肽在制备抑制胰脂肪酶活性的产品中的应用。
[0009]本专利技术还提供了一种蛋白核小球藻多肽提取物，所述蛋白核小球藻多肽提取物中含有上述短肽。
[0010]本专利技术还提供了上述蛋白核小球藻多肽提取物的制备方法，包含如下步骤：
[0011]将小球藻蛋白溶液依次进行酶解、灭酶、离心，得到上清液；
[0012]将上清液依次进行冷冻干燥、超滤，得到超滤产物；
[0013]将超滤产物依次进行真空浓缩、冷冻干燥、葡聚糖凝胶色谱纯化，即可得到蛋白核小球藻多肽提取物。
[0014]优选的，所述小球藻蛋白溶液以水为溶剂，所述小球藻蛋白溶液的浓度为10～20g/kg；
[0015]所述酶解采用木瓜蛋白酶；
[0016]按小球藻蛋白质量计算，所述木瓜蛋白酶的用量为4000～8000U/g；
[0017]所述酶解的温度为40～60℃；
[0018]所述酶解的时间为3～6h。
[0019]优选的，所述灭酶的温度为90～100℃；
[0020]所述灭酶的时间为5～15min；
[0021]所述离心的转速为6000～10000r/min；
[0022]所述离心的时间为10～20min。
[0023]优选的，所述冷冻干燥采用的冷阱温度为
‑
50～
‑
60℃，所述冷冻干燥的真空度为60～100Pa；
[0024]所述超滤产物的分子量<5kDa；
[0025]所述真空浓缩的温度为50～60℃；
[0026]所述真空浓缩的压力为0.08～0.09MPa。
[0027]优选的，所述葡聚糖凝胶色谱纯化分离后收集主峰F2，冷冻干燥后即为蛋白核小球藻多肽提取物。
[0028]优选的，所述葡聚糖凝胶色谱纯化采用的葡聚糖凝胶规格为Sephadex G
‑
25；
[0029]所述葡聚糖凝胶色谱纯化的进样量为柱体积1～5％，进样浓度为10～30mg/mL，流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为220nm。
[0030]本专利技术还提供了上述蛋白核小球藻多肽提取物在制备降脂产品中的应用。
[0031]本专利技术的技术效果和优点：
[0032]本专利技术提供的短肽FLGPF在浓度为8mg/mL时，对胰脂肪酶活性抑制率达到50.12％，对胰脂肪酶活性的抑制类型为可逆抑制，且为非竞争性抑制，可与人源PTL蛋白上3个氨基酸残基相互作用，主要形成了π
‑
氢键、π
‑
阳离子和氢键作用，通过占据催化或底物结合位点来抑制胰脂肪酶的活性。通过本专利技术制备方法得到的蛋白核小球藻多肽提取物中短肽FLGPF含量可达到7.1～8.6％，与其他超滤级分、纯化得到的其他主峰相比能够对胰脂肪酶取得更好的抑制效果。本专利技术提供的蛋白核小球藻多肽提取物在浓度为8mg/mL时，对胰脂肪酶活性抑制率达到42.33％，抑制作用类型为可逆抑制且为非竞争性抑制。本专利技术的蛋白核小球藻多肽提取物对高脂模型秀丽隐杆线虫呈现出了一定的降脂效果，能够显著降低线虫体内的甘油三酯和胆固醇含量。说明本专利技术所述的蛋白核小球藻多肽提取物在减肥功能食品或保健品开发中具有良好的应用前景。本专利技术为开发安全有效的胰脂肪酶抑制剂提供技术支持，对于促进小球藻产业的发展也具有重要意义。
附图说明
[0033]图1为Sephadex G
‑
25凝胶色谱图；
[0034]图2为LC
‑
MS/MS鉴定所得FLGPF(579.3057Da)短肽的二级质谱图；
[0035]图3为FLGPF合成肽的色谱图；
[0036]图4为FLGPF合成肽在不同浓度下对胰脂肪酶的抑制效果；
[0037]图5为FLGPF合成肽对胰脂肪酶的抑制作用类型；
[0038]图6为FLGPF合成肽对胰脂肪酶的可逆抑制双倒数曲线；
[0039]图7为FLGPF与人胰脂肪酶(PTL)的二维(A)、表面(B)及三维(C)结合模式图；
[0040]图8为不同超滤级分对胰脂肪酶的抑制效果对比结果；
[0041]图9为Sephadex G
‑
25凝胶色谱纯化肽段对胰脂肪酶的抑制效果；
[0042]图10为蛋白核小球藻多肽提取物在不同浓度下对胰脂肪酶的抑制效果；
[0043]图11为蛋白核小球藻多肽提取物对胰脂肪酶的抑制作用类型；
[0044]图12为蛋白核小球藻多肽提取物对胰脂肪酶的可逆抑制双倒数曲线。
具体实施方式
[0045]本专利技术提供了一种短肽，所述短肽的序列为FLGPF，也即Phe
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Leu
‑
Gly
‑
Pro
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种短肽，其特征在于，所述短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述的短肽在制备抑制胰脂肪酶活性的产品中的应用。3.一种蛋白核小球藻多肽提取物，其特征在于，所述蛋白核小球藻多肽提取物中含有权利要求1所述的短肽。4.权利要求3所述的蛋白核小球藻多肽提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：将小球藻蛋白溶液依次进行酶解、灭酶、离心，得到上清液；将上清液依次进行冷冻干燥、超滤，得到超滤产物；将超滤产物依次进行真空浓缩、冷冻干燥、葡聚糖凝胶色谱纯化，即得到蛋白核小球藻多肽提取物。5.根据权利要求4所述的蛋白核小球藻多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述小球藻蛋白溶液以水为溶剂，所述小球藻蛋白溶液的浓度为10～20g/kg；所述酶解采用木瓜蛋白酶；按小球藻蛋白质量计算，所述木瓜蛋白酶的用量为4000～8000U/g；所述酶解的温度为40～60℃；所述酶解的时间为3～6h。6.根据权利要求4所述的蛋白核小球藻多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述灭酶的温度为90～100℃；所述灭酶的时间为5～15min；所述离心的转速为6000～10000r/...

【专利技术属性】
技术研发人员：林娈，黄俊媛，贾瑷菁，柳雯郡，赵超，刘斌，汪登谜，
申请(专利权)人：泉州师范学院，
类型：发明
国别省市：