一种麻黄定喘汤组合物HPLC指纹图谱的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种麻黄定喘汤组合物的指纹图谱构建方法及检测方法。本发明专利技术指纹图谱构建方法包括如下步骤：取对照品和麻黄定喘汤组合物，分别制备对照品溶液和供试品溶液；采用高效液相色谱法对对照品溶液和供试品溶液进行检测，获得相应检测图谱和对照图谱；将检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，获得具有标识性的麻黄定喘汤组合物的指纹图谱。本发明专利技术构建得到麻黄定喘汤组合物的指纹图谱，色谱峰丰富，且包含归属于麻黄、苦杏仁、黄芩、桑白皮、麦冬、桔梗、款冬花、莱菔子、白果等多味药材的有效成分，能够更全面地反应麻黄定喘汤组合物的整体化学成分，为麻黄定喘汤制剂的整体质量控制及评价提供了有效手段，能更好的监控和评价本品质量，具有较高的应用价值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种麻黄定喘汤组合物HPLC指纹图谱的构建方法


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及采用高效液相色谱法建立麻黄定喘汤组合物的高效液相指纹图谱用于控制麻黄定喘汤制剂的质量。

技术介绍

[0002]支气管哮喘(简称哮喘)是全球范围内常见的慢性呼吸道疾病，近年来在世界各国均有逐年上升的趋势，已成为严重威胁人类健康的一类疾病。据统计，全球约有3亿哮喘患者，全球患病率1
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18％，我国约有1000
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3000万哮喘患者，并有不断增加的趋势。支气管哮喘是一种以气道慢性炎症、粘液分泌增加、气道重塑及气道反应性增高为主要特征的免疫变态反应性疾病。其中，气道炎症为最主要的病理变化并决定气道阻塞和气道高反应性的程度。目前西医对哮喘主要以使用糖皮质激素。糖皮质激素不论对慢性哮喘还是急性哮喘发作都是最有效的治疗药物，已成为治疗支气管哮喘的一线药物，但是接受激素治疗后仍存在持续性气道高反应或激素不敏感的患者，长期应用激素可带来严重的副作用。另外对儿童患者使用时，对其生长和代谢也有一定影响，并且有些严重病例用激素不能很好控制病情，且产生耐药性转化为慢性疾患。中医对哮喘的治疗主要方案为分期论治、辨证论治及专方治疗，在临床个体化治疗中取得了一定疗效，但适合群体化治疗的药物开发尚没有取得突破性进展。
[0003]麻黄定喘汤由麻黄，杏仁，黄芩、桑白皮、麦冬、桔梗、款冬花、莱菔子、白果组成。
[0004]在本专利技术完成前，以麻黄定喘汤组合物的含有的化成分为指标建立指纹图谱的方法未见报道。/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一在于，提供一种麻黄定喘汤组合物的指纹图谱检测方法及其指纹图谱，采用该方法构建的指纹图谱能够全面地反映麻黄定喘汤组合物整体化学成分，为麻黄定喘汤组合物的整体质量控制及评价提供了有效手段，旨在解决现有技术中没有关于麻黄定喘汤组合物的指纹图谱文献报道的缺陷，有效的控制了麻黄定喘汤制剂的质量。
[0006]本专利技术目的之二在于，经过系统的成分指认和药品不同批次共有峰的单味药材归属，较全面的反应麻黄定喘汤组合物中各成分的现状，能够为麻黄定喘汤制剂质量提供参考依据。
[0007]本专利技术中所述的麻黄定喘汤组合物是由麻黄300g、苦杏仁150g、黄芩100g、桑白皮100g、麦冬100g、桔梗100g、款冬花100g、莱菔子100g、白果150g制备而成。具体的制备方法为：以上九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至1.30～1.35(60℃)稠膏，干燥，粉碎，过筛，即得。
[0008]本专利技术采用如下的技术方案：一种麻黄定喘汤组合物的指纹图谱检测方法，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。具体的，所述的麻黄定喘汤组合物的指纹图谱检测方法包括以下步骤：
[0009]a.供试品溶液的制备：取麻黄定喘汤组合物，研细，取约0.2～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50mL，称取重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0010]b.对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸麻黄碱、野黄芩苷、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成质量浓度分别为0.1、0.002、0.05、0.002、0.002、0.001mg/mL的混合对照品溶液，作为对照品溶液；
[0011]c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μL，注入高效液相色谱仪，记录80分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得麻黄定喘汤组合物的指纹图谱。
[0012]上述方法中，所述高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01
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0.2％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL/min，柱温25
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40℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于4000。
[0013]优选的，所述的麻黄定喘汤组合物的指纹图谱检测方法，包括以下步骤：
[0014]a.供试品溶液的制备：取麻黄定喘汤组合物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称取重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0015]b.对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸麻黄碱、野黄芩苷、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素对照品适量，精密称定，分别置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；再分别精密吸取对照品储备液5、0.2、2、0.2、0.2、0.1mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.10152、0.00208、0.05144、0.00216、0.00202、0.00108mg/mL的混合对照品溶液，作为混合对照品溶液；
[0016]c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录80分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得麻黄定喘汤组合物的指纹图谱。
[0017]所述高效液相色谱测定的色谱条件优选为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为：Shimadzu C18 250
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4.60mm；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长250nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于4000。
[0018]前述的麻黄定喘汤组合物HPLC指纹图谱构建方法，梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0
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15min，5
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10％A；15
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20min，10
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15％A；20
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45min，15
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25％A；45
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55min，25
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30％A；55
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70min，30
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55％A；70
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80min，55
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65％A。
[0019]所述指纹图谱具有24个共有峰，将对照品所测得的色谱图与样品指纹图谱进行对比，在与各对照品相同保留时间处的色谱峰即得到了指认，对照品色谱图见图1。结果显示，共有峰中7、10、16、17、21、22号色谱峰分别被指认为盐酸麻黄碱、野黄芩苷、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素。
[0020]本专利技术的有益效果是：
[0021]1、本专利技术建立了10批麻黄定喘汤组合物的HPLC指纹图谱，相似度均大于0.90，可以更加全面的反应麻黄定喘汤组合物所含有的化学信息，更好的表征其质量。
[0022]2、标定了24个共有峰，共有峰中7、10、16、17、21、22号色谱峰分别被指认为盐酸麻
黄碱、野黄芩苷、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种麻黄定喘汤组合物HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于：包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取麻黄定喘汤组合物，研细，取约0.2～2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50mL，称取重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；b.对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸麻黄碱、野黄芩苷、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成质量浓度分别为0.1、0.002、0.05、0.002、0.002、0.001mg/mL的混合对照品溶液，作为对照品溶液；c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μL，注入高效液相色谱仪，记录80分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得麻黄定喘汤组合物的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种麻黄定喘汤组合物HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01
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0.2％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL/min，柱温25
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40℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于4000。3.根据权利要求1所述的一种麻黄定喘汤组合物HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于：包括以下步骤：a.供试品溶液的制备：取麻黄定喘汤组合物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称取重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；b.对照品溶液的制备：分别精密称取盐酸麻黄碱、野黄芩苷、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、汉黄芩素对照品适量，精密称定，分别置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；再分别精密吸取对照品储备液5、0.2、2、0.2、0.2、0.1mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.10152、0.00208、0.05144、0.00216、0.00202、0.00108mg/mL的混合对照品溶液，作为混合对照品溶液；c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录80分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得麻黄定喘汤组合物的指纹图谱。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：延光海，郑明昱，南敏伦，赫玉芳，
申请(专利权)人：延边大学，
类型：发明
国别省市：