检测样品中脂溶性维生素的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测样品中脂溶性维生素的方法，所述方法包括使聚合物尤其是苯乙烯基聚合物包覆的磁珠接触样品的步骤。所述方法可用在质谱和液相色谱的样品制备及前处理中。本发明专利技术还提供了所述磁珠用于检测样品中脂溶性维生素的用途以及用于检测样品中脂溶性维生素的试剂盒。生素的试剂盒。生素的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
检测样品中脂溶性维生素的方法


[0001]本专利技术属于生物领域，具体涉及样品中脂溶性维生素的检测方法。

技术介绍

[0002]脂溶性维生素是指不溶于水而溶于脂肪类有机溶剂的维生素，包括例如维生素A、维生素D、维生素E和维生素K，其中维生素D包括例如维生素D2和维生素D3。脂溶性维生素的作用多种多样，除了直接参与和影响特异性的代谢过程外，它们多半还与细胞内核受体结合，影响特定基因的表达。脂溶性维生素在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。合理的维生素水平对维持人体健康十分重要，准确测定人体中脂溶性维生素的含量，可以指导人们科学合理的补充维生素，预防疾病，提高生活质量，同时对脂溶性维生素缺乏或过量的临床判断、 治疗管理和生理评估具有辅助诊断的意义。对于脂溶性维生素的测定是临床样品中的一项重要任务。
[0003]目前，临床上在测定样品中的脂溶性维生素时，由于临床样品成分复杂，不能直接进行检测，需要首先进行前处理，使样品进行适当的分离和纯化后才有可能进入后面的分析程序。现有技术中采用的脂溶性维生素的前处理方法包括蛋白沉淀(PPT)、液液萃取法(LLE)、固相萃取法(SPE)等。然而，现有技术中的前处理方法存在着无法实现自动化和/或无法同时实现脂溶性维生素A、D、E、K的有效检测的缺点。
[0004]CN113376270B公开了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的样品的蛋白沉淀的前处理方法，包括采用负压装置处理的步骤。此方法操作简单，但由于蛋白沉淀实质是对样本进行的稀释，因此上机样本中待测物的浓度偏低，对测定仪器的灵敏度要求高；而且，方法中需要负压操作，不利于实现操作流程全自动化。CN110779780A公开了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的样品前处理方法，其使用乙醇进行蛋白沉淀，并使用正己烷进行液液萃取、氮气吹干萃取液、样品复溶才可将样品进样分析。该方法实验过程中涉及到萃取、氮吹等步骤，需要大量人工操作，不利于处理自动化；而且操作过程繁琐，对实验人员的要求高。CN111198238A公开的血清中维生素D的萃取方法及检测方法，该方法首先对样品进行蛋白沉淀，然后再将沉淀的混合溶液上样至活性炭96孔板上，使用正己烷等强挥发试剂进行洗脱，氮气吹干洗脱液后进行样品的复溶，随后利用固相萃取法选择性吸附目标物。然而，实验中固相萃取填料接触到有机试剂之后会产生溶胀现象，会影响溶液通过固相萃取填料的流速，从而产生孔间均一性差的问题，而且氮气吹干的处理也不利于处理自动化。CN114487209A公开了一种利用磁性固相萃取材料检测血清中脂溶维生素A、维生素D和维生素E的检测方法，该方法利用了外加磁场和磁性固相萃取填料（亲水亲脂平衡型磁性固相萃取磁珠，HLB磁珠），然而，该方法对维生素A的检测灵敏度不高且无法对维生素K进行检测。
[0005]因此，当前已有的方法尚不能实现对样品中脂溶性维生素A、D、E、K的灵敏有效和/或自动化检测。临床检测客观上要求提供一种能克服上述现有技术中的至少一个问题，特别是能有效检测脂溶性维生素的方法；并优选地能够进一步实现检测的自动化。

技术实现思路

[0006]本专利技术人通过大量实验研究意外发现，通过采用聚合物包覆的磁珠（尤其是疏水聚合物磁珠）接触样品，可以实现对多种脂溶性维生素的检测，实现高的检测灵敏度，并可进一步实现包括维生素K在内的多种脂溶性维生素的同时检测。
[0007]基于此发现，在本专利技术的第一个方面，提供了一种检测样品中目标分析物的方法，包括使聚合物包覆的磁珠接触样品的步骤，其中所述目标分析物优选是脂溶性维生素。
[0008]本专利技术所述的磁珠是一种磁性颗粒，其具有磁性核心和包覆在所述磁性核心表面的包被材料，所述包被材料是聚合物材料，尤其是疏水聚合物，例如烷基修饰的硅胶或苯乙烯基聚合物，所述烷基修饰的硅胶例如是C18或C8烷基修饰的硅胶，所述苯乙烯基聚合物例如是苯乙烯
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二乙烯苯共聚物。
[0009]优选地，所述磁珠具有适当的粒度，例如，其具有的平均粒径为1~200μm，例如10~100μm或30~50μm。
[0010]在本专利技术中，所述“样品”意指所意欲检测的成分来自的产品形态。在本文中，所述样品可以是指生物样品，例如临床样品，其优选选自全血、血浆、血清、尿液、唾液、泪液、胆汁、胃液、组织液和淋巴液。
[0011]在本专利技术中，所述磁珠具有磁性核心和包覆在所述磁性核心表面的聚合物。所述聚合物可以是苯乙烯基聚合物。苯乙烯基聚合物是指以苯乙烯为主要单体聚合而形成的聚合物，或称为苯乙烯系聚合物。本文中的苯乙烯基聚合物可以是以苯乙烯为唯一单体形成的聚苯乙烯，也可以通过加入其它交联剂（例如二乙烯基苯）形成的聚合物，例如苯乙烯
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二乙烯基苯共聚物。所述聚合物可通过不同工艺（例如流化床工艺、反应釜工艺）形成，可具有不同的交联度。
[0012]在本专利技术中，所述磁珠的磁性核心包含磁性颗粒，所述磁性颗粒可以由任何具有磁性的物质组成，优选选自铁、钴、镍的氧化物，更优选四氧化三铁。本领域已知，所述磁性核心可以采用任何合适的方法制备得到。
[0013]本专利技术人在研究中进一步发现，可以借助施加磁场的作用，进一步实现对样品进行移动和/或分离。例如，通过施加磁场实现对样品特别是液体（包括溶液或混悬液）的快速充分转移，同时可避免磁性材料转移过程中残留导致堵塞色谱柱等问题。基于此发现，可实现在施加磁场下对样品进行移动和/或分离的自动化操作。
[0014]相应地，在本专利技术的方法中，还包括在施加磁场下对样品进行移动和/或分离的步骤。更具体地，所述施加磁场对样品进行移动和/或分离的步骤是通过将磁体置于容纳有样品的容器的壁外侧使得当施加磁场时样品被吸引到容器壁内侧来实现的，或者通过将磁体至于容器底部，从而转移上机样本，实现上机样本中磁珠无残留的问题。
[0015]在一些实施方案中，所述对样品进行移动和/或分离是通过从容纳有样品和磁珠的容器中移出样品而实现的，或者是通过从容纳有样品和磁珠的容器中移出磁珠而实现的。
[0016]在一些实施方案中，在施加磁场下对样品进行移动和/或分离的步骤可通过将磁体置于容纳有样品的容器的侧壁外使得当施加磁场时样品被吸到容器侧壁上来实现，或者可通过将磁体插入到容纳有样品的容器中以及移出磁体来实现。
[0017]所述磁体可以是永磁体或电磁体，优选为电磁体，其可通过通断电的方式方便地
控制磁场的存在和消失。在电磁体的情况下，还可以通过可编程逻辑控制器（PLC）对电磁体的通断电进行控制，以适应样品处理的全自动化需要。
[0018]在具体操作时，可将磁体置于或插入到容纳有样品的溶液或混悬液中。
[0019]在一个实施方案中，所述在施加磁场下对样品进行移动和/或分离的步骤是通过将磁体置于容纳有样品的容器的侧壁外，使得当施加磁场时样品被吸到容器侧壁上来实现的。在一个更具体的实施方案中，所述磁体可存在于两个位置：侧吸位和底吸位。对于位于侧吸位的磁体而言，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测样品中目标分析物的方法，其包括使聚合物包覆的磁珠接触样品的步骤，其中所述目标分析物是脂溶性维生素。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚合物为疏水聚合物。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述聚合物为烷基修饰的硅胶聚合物或苯乙烯基聚合物。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述烷基修饰的硅胶聚合物是C18或C8烷基修饰的硅胶聚合物，和/或所述苯乙烯基聚合物是苯乙烯
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二乙烯苯共聚物。5.根据权利要求1或2所述的方法，所述磁珠的平均粒径为1~200 μm、10~100 μm或30~50 μm。6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述样品是或者包含选自全血、血浆、血清、尿液、唾液、泪液、胆汁、胃液、组织液和淋巴液的生物材料。7.根据权利要求1或2所述的方法，其还包括施加磁场对样品进行移动和/或分离的步骤。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述施加磁场对样品进行移动和/或分离的步骤是通过将磁体置于容纳有样品的容器的壁外侧使得当施加磁场时样品被吸引到容器壁内侧来实现的，或者是通过将磁体插入容纳有样品的容器中以及移出磁体来实现的。9.根据权利要求8所述的方法，所述施加磁场是由永磁体或电磁体产生的。10.根据权利要求7所述的方法，其中所述对样品进行移动和/或分离是通过从容纳有样品和磁珠的容器中移出样品而实现的，或者是通过从容纳有样品和磁珠的容器中移出磁珠而实现的。11.根据权利要求8所述的方法，其中所述容器为多孔板或分离的管。12.根据权利要求1或2所述的方法，其包括以下步骤：a）使磁珠与样品接触以吸附样品中的目标分析物；b）施加磁场使得吸附了目标分析物的磁珠与未被吸附的样品组分相分离；c）使吸附了目标分析物的磁珠与洗脱剂相接触，从而使得目标分析物从磁珠上进入洗脱剂中。13.根据权利要求12所述的方法，其还包括在步骤a）之前活化和平衡磁珠的步骤，和/或在步骤b）之后和...

【专利技术属性】
技术研发人员：章申燕，李红娥，李宁，张伟，王晓禄，佟西海，
申请(专利权)人：北京华大吉比爱生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：