免疫亲和净化-超高效液相色谱的确证方法应用技术

本发明专利技术公开了一种免疫亲和净化

【技术实现步骤摘要】
免疫亲和净化
‑
超高效液相色谱的确证方法应用


[0001]本专利技术涉及液相色谱检测
，尤其涉及一种免疫亲和净化
‑
超高效液相色谱的确证方法应用。

技术介绍

[0002]荧光剂被广泛应用于洗涤剂、造纸、纺织及许多高科技领域中。荧光剂CBS广泛适用于洗衣液中。国内外关于荧光剂的检测方法主要有紫外分光光度法、白度法、荧光分光光度法、高效液相色谱法和液相色谱－串联质谱法。现有技术多采用离子对试剂辅助色谱分离和荧光检测器检测，但离子对试剂长期使用可能与固定相产生不可逆吸附结合，缩短色谱柱的使用寿命；而且荧光剂易受溶剂极性溶液、光照等因素的影响转变为顺式异构体，导致荧光检测器检测不出顺式结构，只能检测反式异构体，因此荧光检测器的应用就受到了限制。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是要提供一种免疫亲和净化
‑
超高效液相色谱的确证方法应用。
[0004]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0005]本专利技术免疫亲和净化
‑
超高效液相色谱的确证方法，包括以下步骤：
[0006]S1：称取试样于离心管中，加入甲醇、水配置的水溶液，混匀、离心，取上清液备用；
[0007]S2：取氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和氯化钾，用水溶解，用盐酸调节pH值，加水稀释，加入吐温
‑
20磷酸盐溶解，获得缓冲溶液；
[0008]S3：取出免疫亲和柱，去掉亲和柱堵头，放出柱内保存液后，上步骤S1的上清液；
[0009]S4：上样结束后，用水淋洗亲和柱，去除柱内残留液，用含有荧光剂的甲醇溶液洗脱，收集的洗脱液用滤膜过滤后供液相色谱
‑
质谱分析；
[0010]S5：如果试样中的荧光剂质量色谱峰的保留时间与标准工作溶液一致，样品中荧光剂化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，则可判断样品中存在荧光剂。
[0011]进一步，所述步骤S1中，试样为1g，甲醇与水的配比为6：4；甲醇与水的水溶液为50mL。
[0012]所述步骤S2中氯化钠为10g、磷酸氢二钠1.3g、磷酸二氢钾为0.3g、氯化钾为0.3g，水为1000mL，调节pH值为7.6；吐温
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20磷酸盐为12mL。
[0013]所述步骤S4中淋洗亲和柱的水为10mL，甲醇溶液的乙酸含量为1％，甲醇溶液为15mL。
[0014]所述步骤S4中液相色谱
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质谱分析的色谱柱：WATERSACQUITYUPLCHSST3；柱温：45℃；样品室温度：12℃；进样体积：8μL；流速：0.4mL/min；流动相：A为乙腈、B为水，梯度洗脱程序：2～4min，A由35％线性升到75％，7～8min，A相保持75％，10～12min，A由75％线性降到35％，10～15min，A相保持35％。
[0015]所述色谱柱WATERSACQUITYUPLCHSST3为：100mm
×
2.1mm，1.8μm。
[0016]液相色谱
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质谱分析的条件：离子源温度550℃，喷雾电压6500V，气帘气30psi，喷雾气50psi，辅助加热气65psi，去簇电压70V；化合物参数：母离子332.2，定量离子265，碰撞能量20V，定性离子231碰撞能量48V。
[0017]本专利技术所述免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法的应用：用于检测确证试样物中是否含有荧光剂。
[0018]本专利技术的有益效果是：
[0019]本专利技术是一种免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法应用，与现有技术相比，本专利技术方法可同时检测荧光剂的种类较多，且灵敏度高，回收率和精密度好。本专利技术的方法在高效液相色谱方法检测的基础上采用液相色谱－串联质谱方法进一步确证，与其它现有荧光剂测定方法相比，本专利技术的方法更可靠，能够为洗涤用品中荧光剂的检测提供有力支持。
附图说明
[0020]图1是本专利技术的样品液pH值对样品中TTX的回收率的影响图。
具体实施方式
[0021]下面结合附图以及具体实施例对本专利技术作进一步描述，在此专利技术的示意性实施例以及说明用来解释本专利技术，但并不作为对本专利技术的限定。
[0022]本专利技术免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法，包括以下步骤：
[0023]S1：称取试样于离心管中，加入甲醇、水配置的水溶液，试样为1g，甲醇与水的配比为6：4；甲醇与水的水溶液为50mL，混匀、离心，取上清液备用；
[0024]S2：取氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和氯化钾，用水溶解，氯化钠为10g、磷酸氢二钠1.3g、磷酸二氢钾为0.3g、氯化钾为0.3g，用盐酸调节pH值7.6，加水1000mL稀释，加入吐温
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20磷酸盐12mL溶解，获得缓冲溶液；
[0025]S3：取出免疫亲和柱，去掉亲和柱堵头，放出柱内保存液后，上步骤S1的上清液；
[0026]S4：上样结束后，用10mL水淋洗亲和柱，去除柱内残留液，用含有荧光剂的甲醇溶液洗脱，甲醇溶液的乙酸含量为1％，甲醇溶液为15mL，收集的洗脱液用滤膜过滤后供液相色谱
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质谱分析；色谱柱：WATERSACQUITYUPLCHSST3(100mm
×
2.1mm，1.8μm)；柱温：45℃；样品室温度：12℃；进样体积：8μL；流速：0.4mL/min；流动相：A为乙腈、B为水，梯度洗脱程序：2～4min，A由35％线性升到75％，7～8min，A相保持75％，10～12min，A由75％线性降到35％，10～15min，A相保持35％。液相色谱
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质谱分析的条件：离子源温度550℃，喷雾电压6500V，气帘气30psi，喷雾气50psi，辅助加热气65psi，去簇电压70V；化合物参数：母离子332.2，定量离子265，碰撞能量20V，定性离子231碰撞能量48V。
[0027]S5：如果试样中的荧光剂质量色谱峰的保留时间与标准工作溶液一致，样品中荧光剂化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，则可判断样品中存在荧光剂。
[0028]本专利技术所述免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法的应用：用于检测确证试样物中是否含有荧光剂。
[0029]免疫亲和柱的亲和结合作用与样品液的pH值直接相关，不适宜的pH值会使亲和作用减弱或破坏。本专利技术采用盐酸调节样品液pH值，通过比较不同pH值下TTX的回收率，考察不同pH值下免疫亲和柱的亲和作用能力，结果如图所示。当pH＝7～8时，亲和作用能力最佳，TTX回收率最高；当pH＜6.5或pH＞9时，亲和能力明显减弱，由此确定pH＝7～8时为TTX免疫亲和柱的最适宜图1样品液pH值对样品中TTX的回收率的影响。当使用8m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：称取试样于离心管中，加入甲醇、水配置的水溶液，混匀、离心，取上清液备用；S2：取氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和氯化钾，用水溶解，用盐酸调节pH值，加水稀释，加入吐温
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20磷酸盐溶解，获得缓冲溶液；S3：取出免疫亲和柱，去掉亲和柱堵头，放出柱内保存液后，上步骤S1的上清液；S4：上样结束后，用水淋洗亲和柱，去除柱内残留液，用含有荧光剂的甲醇溶液洗脱，收集的洗脱液用滤膜过滤后供液相色谱
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质谱分析；S5：如果试样中的荧光剂质量色谱峰的保留时间与标准工作溶液一致，样品中荧光剂化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，则可判断样品中存在荧光剂。2.根据权利要求1所述的免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S1中，试样为1g，甲醇与水的配比为6：4；甲醇与水的水溶液为50mL。3.根据权利要求1所述的免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S2中氯化钠为10g、磷酸氢二钠1.3g、磷酸二氢钾为0.3g、氯化钾为0.3g，水为1000mL，调节pH值为7.6；吐温
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20磷酸盐为12mL。4.根据权利要求1所述的免疫亲和净化
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超高效液相色谱的确证方法，其特征在于：所述步骤S...

【专利技术属性】
技术研发人员：李贤良，陈宗祥，郑小玲，王国民，郭思言，唐柏彬，郗存显，李光满，
申请(专利权)人：重庆海关技术中心，
类型：发明
国别省市：