一株聚乙烯塑料高效降解菌及其分离筛选方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株聚乙烯塑料高效降解菌及其分离筛选方法和其在聚乙烯塑料的生物降解方面的应用。该菌为不动杆菌(Acinetobactersp.)SW2，已于2022年9月9日在中国普通微生物菌种保藏管理中心登记入册，保藏编号为：CGMCCNo:25676。该菌株对聚乙烯塑料如聚乙烯农用地膜、保鲜膜等具有显著降解效果，丰富了聚乙烯降解菌的菌种资源，具有良好的应用前景和生态环保价值。的应用前景和生态环保价值。的应用前景和生态环保价值。

【技术实现步骤摘要】
一株聚乙烯塑料高效降解菌及其分离筛选方法和应用


[0001]本专利技术涉及塑料污染的微生物降解领域，具体涉及一株聚乙烯塑料高效降解菌及其分离筛选方法，以及该菌株在聚乙烯塑料废弃物生物降解方面的应用。

技术介绍

[0002]聚乙烯是由乙烯单体经自由基聚合得到的热塑性树脂，具有塑性强、方便、耐用、成本低等优势，是当前使用最为广泛的塑料之一，常被用于一次性塑料袋、保鲜膜、农用地膜等制备。另一方面，塑料具有疏水性高、表面能低等特征，非常难以被降解，导致其在环境中的大量积累，常被称为“白色污染”，成为了全世界各国政府和学术界面临的共同难题。
[0003]微生物具有繁殖快，吸收多，转化快等特性，在塑料污染生物降解方面具有极大潜力。然而，目前聚乙烯塑料降解菌菌株资源亟待发掘。

技术实现思路

[0004]本专利技术公开一株对聚乙烯塑料具有显著降解效果的菌株及其分离筛选方法，以及该菌株在聚乙烯塑料废弃物生物降解方面的应用。
[0005]本专利技术为一株聚乙烯塑料降解菌菌株Acinetobactersp.SW2，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏编号为：CGMCCNo:25676；保藏时间为：2022年9月9日。
[0006]所述菌株SW2的16SrDNA序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
[0007]本专利技术提供一种聚乙烯塑料降解菌菌株的分离筛选方法，包括以下步骤：
[0008](1)以长期覆盖有聚乙烯塑料垃圾的土壤样品作为菌种来源，接种于以含量为0.1％的聚乙烯为唯一碳源的无机盐培养基中，于30℃、150r/min的摇床中富集培养，至出现明显浑浊现象后，取200μL富集液于新的上述培养基中培养，重复筛选4次。
[0009](2)采用平板划线法对上述富集的菌液进分离纯化，获得聚乙烯降解菌，并对菌株进行16SrDNA序列进行测序鉴定；
[0010](3)在以聚乙烯为唯一碳源的无机盐培养基中检测上述获得的聚乙烯降解菌对聚乙烯的降解效能，进而获得一株能够利用聚乙烯的降解菌SW2。
[0011]所述无机盐培养基组分为：K2HPO40.7g，KH2PO40.7g，MgSO4·
7H2O0.7g，NH4NO31.0g，NaCl0.005g，FeSO4·
7H2O0.002g，ZnSO4·
7H2O0.002g，MnSO4·
H2O0.001g，将上述试剂溶解于1L去离子水中，调节pH至7.2。
[0012]该菌株的菌落形态特征为：菌落呈颗粒状、边缘整齐、表面光滑，菌落直径为0.1
‑
3mm。革兰氏染色显红色，呈阴性，并且该菌在生长过程中存在球杆状变化。生理生化特征显示其接触酶为阳性，细胞色素C氧化酶为阴性。对SW2的菌株16S rRNA基因序列进行扩增、测序，将所得序列与NCBI数据库中已有序列进行BLAST比对分析，结果显示SW2与不动杆菌属的16S rRNA序列一致度为99％以上，且进化距离上相对较近，结合其菌落特征、个体形态染色特征与生理生化特征，鉴定为不动杆菌(Acinetobacter sp.)SW2。
[0013]本专利技术提供的聚乙烯塑料降解菌SW2分离自重庆马鞍溪湿地公园(106.415
°
E,29.826
°
N)长期覆盖有聚乙烯塑料垃圾的土壤。
[0014]本专利技术提供的降解菌SW2对聚乙烯塑料具有显著的降解效果，其特征在于：将SW2接种到含聚乙烯塑料制品(农用地膜或保鲜膜)的无机盐培养基中，第15天，光镜下即可观察到农用地膜开始出现明显破损；第30天，保鲜膜出现大量破损。
[0015]本专利技术所具有以下优点：
[0016](1)采用本专利技术的塑料降解菌的分离筛选方法，能够获得降解聚乙烯的菌种资源。
[0017](2)本专利技术获得的菌株SW2在聚乙烯塑料制品的生物降解方面具有良好效果。
[0018](3)本专利技术为聚乙烯塑料废弃物的生物治理提供了菌株资源与参考，具有切实可行的应用价值。
附图说明
[0019]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0020]图1为本专利技术提供的聚乙烯塑料降解菌Acinetobacter sp.SW2的菌落形态特征图。
[0021]图2为本专利技术提供的聚乙烯塑料降解菌SW2的生长曲线图。
[0022]图3为本专利技术提供的聚乙烯塑料降解菌SW2的16S rRNA基因系统发育树。
[0023]图4为本专利技术提供的聚乙烯塑料降解菌SW2降解60天后聚乙烯农用地膜和保鲜膜在光学显微镜(A、C为对照组；B、D为SW2处理组)下的形态观察图。
具体实施方式
[0024]为清楚、完整地描述本专利技术具体实施方法及本专利技术实施例中的技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图来展开介绍。以下所描述的实施例为本专利技术的部分实施例而非全部实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下获得的所有实施例，均属于本专利技术的保护范围。
[0025]下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明：
[0026]实施例1
[0027]本专利技术为一株聚乙烯塑料降解菌Acinetobacter sp.SW2，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC No:25676；保藏时间为：2022年9月9日。
[0028]聚乙烯塑料降解菌Acinetobacter sp.SW2菌株对聚乙烯农用地膜、保鲜膜降解效果良好。通过采用本生物降解方法，处理60天后聚乙烯农用地膜、保鲜膜表面均有明显的破损孔洞。本专利技术为聚乙烯塑料废弃物的生物降解提供了优良菌株资源，具有巨大的应用潜力。
[0029]实施例2
[0030]本专利技术提供了一种聚乙烯塑料降解菌的分离筛选方法，具体包括以下步骤：
[0031](1)以长期覆盖有塑料垃圾的土壤作为待分离样品，称取8g土壤样本，混匀于100mL无菌水中，充分混匀，取200μL土壤混合液于100mL无机盐培养基中，并加入紫外灯灭
菌后的1g聚乙烯粉末(聚乙烯含量为0.1％)，作为培养基中的唯一碳源，于30℃、150r/min的摇床中培养，每24h观察，至出现明显浑浊现象后，取200μL富集液于新的无机盐培养基中培养，重复筛选4次后，用平板划线法，取单菌落，进行分离纯化。
[0032](2)取20μL纯化菌菌液接种至100mL含2％聚乙烯的无机盐培养基中，同时接种至无碳源的无机盐培养基中作为对照，于30℃、150r/min培养。每隔24h，用滤纸过滤培养基中塑料粉末并测定滤液的OD600，绘制其生长曲线，最终筛选出能够利用聚乙烯的降解菌SW2。
[0033]分离筛选的培养基为无碳源无机盐培养基，其组分为：K2HPO
4 0.7g，KH2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株聚乙烯塑料高效降解菌菌株，其特征在于：所述聚乙烯塑料降解菌为不动杆菌(Acinetobacter sp.)SW2,其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC No:25676；保藏时间为：2022年9月9日。2.根据权利要求1所述的聚乙烯塑料降解菌菌株，其特征在于：所述的降解菌株SW2的16S rDNA序列如序列表SEQ ID NO：1所示。3.根据权利要求1所述的聚乙烯塑料降解菌菌株的应用，其特征在于：所述的聚乙烯塑料降解菌菌株SW2在聚乙烯塑料如农用地膜等废弃物生物降解中的应用。4.根据权利要求1所述的聚乙烯塑料降解菌菌株的分离筛选方法，其特征在于：(1)以长期覆盖有聚乙烯塑料垃圾的土壤样品作为菌种来源；(2)在以聚乙烯为唯一碳源的无机盐培...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏静，林欣，赵长乐，张泽明，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：