人TIGIT特异性单域抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供抗TIGIT(T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域)单域抗体及其变体。本发明专利技术也包括对受疾病如癌症或传染性疾病折磨的对象施用免疫治疗的方法。该方法包括向上述对象施用含有有效治疗剂量的抗TIGIT单域抗体或其融合分子的药物，通过促进内源反应的活化或内源反应的抑制以增强其内源性免疫反应。的抑制以增强其内源性免疫反应。的抑制以增强其内源性免疫反应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人TIGIT特异性单域抗体及其应用
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年4月19日提交的美国临时申请第63/012,221号的优先权，优先权申请的内容以全文引用的方式并入本文中。


[0003]本专利技术涉及治疗性抗体，尤其涉及一种抗
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TIGIT单域抗体及其应用。
[0004]序列表
[0005]本申请包括一个已以ASCII格式电子提交的序列清单，序列表在此通过引用全文合并。创建于2021年4月18日的ASCII副本名为AG3
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021US_ST25.txt，大小为135KB。

技术介绍

[0006]癌症通常被定义为与异常细胞生长有关的一组疾病，这些异常细胞可能侵入或扩散到身体的其他部位。美国在2019年约有180万人被确诊为癌症。美国每年约有606,880人死于癌症，肺癌和支气管癌症是主要死因。直肠癌和胰腺癌分别为癌症致死的第二和第三主要原因。
[0007]癌症与若干因素有关，包括吸烟、肥胖、不良饮食、缺乏体力运动和过度饮酒。还包括某些感染、暴露于电离辐射和环境污染等其他因素。某些癌症与感染有关，如幽门螺旋杆菌、乙型肝炎、丙型肝炎、人乳头瘤病毒感染、Epstein
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Barr病毒感染以及人类免疫缺陷病毒感染(HIV)。
[0008]传统的癌症治疗直接切除肿瘤组织并抑制其扩散。此类治疗方法包括手术、化疗、放射疗法、激素疗法、靶向疗法和姑息治疗。治疗方法通常根据癌症类型、位置、等级及患者本身的健康状况和偏好进行选择。上述方法都有其局限性，尤其当癌症已经转移，这些疗法可能是无效的。此外，化疗和放射疗法具有一系列与细胞毒性相关的副作用。
[0009]由于癌细胞比大多数正常细胞分裂的更快，它们对化疗药物更敏感。然而化疗药物同样也攻击身体中其他细胞，尤其是快速分裂的细胞，如血细胞和口腔、胃和肠壁细胞。因此就需要一种更具有靶向性和较少毒副作用的药物和癌症治疗方法。开发一种利用免疫系统攻击并杀死肿瘤细胞的治疗方法是一个有前景的方向。
[0010]人类癌症会出现大量的遗传学和表观遗传学方面的改变，产生的新抗原可能会被免疫系统识别(Sjoblom et al.,Science 314:268
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74(2006))。尽管在临床前模型和患者中可观察到对肿瘤的内源性免疫应答，但这种免疫反应是无效的，所形成的肿瘤会被识别为“自我”，并且被免疫系统所耐受。肿瘤细胞可能会通过多种机制抑制宿主的免疫反应，从而最终导致免疫耐受(Topalian等,J Clin Oncol 29:4828
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36(2011)；Mellman等,Nature480:480
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489(2011))。在这些机制中，内源性的“免疫检查点”通常会终止免疫反应以减轻癌旁组织损伤，而癌症可以利用这种检查点来逃避免疫系统的杀伤。在开发免疫检查点特异性抑制剂方面，已投入大量努力并初见成效，能够为癌症治疗提供新的免疫疗法，例如用于晚期黑色素瘤治疗的抗
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CTLA
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4抗体和伊匹单抗(Hodi等,New Engl J Med 363:
711
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23(2010))
[0011]T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)是免疫检查点治疗的新靶点(Dougall et al.,Immunol Rev.2017；276:112
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20.doi:10.1111/imr.12518.PMID:28258695)。它是淋巴细胞表达的免疫抑制性受体，现已研究其在自身免疫、病毒免疫和肿瘤方面的作用。TIGIT与人类癌症和T细胞耗竭有关。TIGIT作为共刺激受体CD226的配体、受体或竞争者，其活性的抑制可增强T细胞抗肿瘤反应。
[0012]多种重要的免疫细胞均可表达TIGIT，不同的细胞类型表达的TIGIT具有不同的功能。在对1467个未筛选的临床病例的全转录基因组测序(RNA
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Seq；～200x106reads/tumor)的分析中，PD
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L1的高表达与TIGIT，FOXP3和LAG3的高表达密切相关(每个P<0.001)(Pal et al.,Annals of Oncology(2018)29(suppl_8):viii400
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viii441.10.1093/annonc/mdy288)。
[0013]单一检查点阻断与其他抑制性检查点的上调和抵抗治疗的进展有关(Koyama et al.,Nat Commun.2016；7:10501.doi:10.1038/ncomms10501.PMID:26883990)。TIGIT和PD
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1双检查点阻断增强GBM小鼠模型的抗肿瘤免疫力和存活率(Hung et al.,Oncoimmunology.2018；7(8):e1466769)。
[0014]因此存在对抗TIGIT单域抗体的需求，其自身或其作为双特异性分子的一部分能有效治疗癌症和其他免疫相关疾病。本申请可满足与此相关的各种需求且还提供了使用抗体和抗体缀合物，药物组合物和制品治疗疾病例如癌症的方法。
[0015]专利技术概述
[0016]此处所述并要求的本专利技术具有许多特性和具体实施方案，包括但不限于专利技术概述中所阐明或描述或提及的。此处所述并要求的本专利技术并不限于专利技术概述中所确定的特征或具体实施方案，专利技术概述仅仅为了说明而非限制
[0017]具体实施方案包括结合人TIGIT的单域抗体，一方面，所述单域抗体包括任一条选自SEQ ID NO:1
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5和6的氨基酸序列。
[0018]在一些具体实施方案中，所述单域抗体的CDR域包括一个、两个、三个、四个或五个氨基酸突变、缺失或增加。
[0019]在一些具体实施方案中，所述单域抗体包括与任一衍生自SEQ ID NO:1
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5和6的序列相同的CDR1、CDR2和CDR3。
[0020]在一些具体实施方案中，所述单域抗体为人源的，在一些具体实施方案中，所述单域抗体处于成熟状态，且相对于亲本抗体对人PD
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1具有增强的亲和力。在一些具体实施方案中，所述单域抗体为人源化的且成熟的。
[0021]在一些具体实施方案中，所述单域抗体为人源的，并且包括选自SEQ ID NO:34，35，36，37和38的氨基酸序列。
[0022]在一些具体实施方案中，所述单域抗体为人源的，并且包括与任一选自SEQ ID NO:34，35，36，37和38的序列具有至少90％、至少95％或至少98％同源性的氨基酸序列。
[0023]在一些具体实施方案中，所述单域抗体和抗体轻链或重链的N末端或C末端融合。
[0024]在一些具体实施方案中，所述单域抗体可选择地通过肽连接物和抗体轻链或重链的N末端或C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.结合人TIGIT蛋白的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体包括任一选自SEQ ID NO:1
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5和6的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单域抗体，其中所述单域抗体的CDR结构域有一个，两个，三个，四个或五个氨基酸突变，缺失或增加。3.一种单域抗体，其特征在于，所述单域抗体包括与衍生自SEQ ID NO:1
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5和6任一序列相同的CDR1,CDR2和CDR3。4.根据权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体为人源化的。5.根据权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体为成熟的，且相对于亲本抗体对人TIGIT具有增强的结合力。6.根据权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体为人源化且成熟的。7.一种结合人TIGIT蛋白的人源化单域抗体，其特征在于，所述人源化单域抗体包括选自SEQ ID NO:34,35,36,37和38的氨基酸序列。8.一种结合人TIGIT蛋白的人源化单域抗体，其特征在于，所述人源化单域抗体包括和SEQ ID NO:34,35,36,37或38具有至少90％，至少95％或至少98％同源性的氨基酸序列。9.根据权利要求1
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8任一项所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体可选择地通过肽连接物和第二抗体的轻链或重链的N末端或C末端融合。10.根据权利要求1
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8任一项所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体可选择地通过肽连接物和第二抗体的轻链或重链的N末端或C末端融合，其中所述第二抗体和肿瘤细胞或免疫细胞表达的抗原结合。11.根据权利要求1
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8任一项所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体可选择地通过肽连接物和Fc多肽或白蛋白分子的N末端或C末端融合。12.根据权利要求1
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8任一项所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体和第二单域抗体融合以形成抗体
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抗体融合分子。13.根据权利要求10所述的单域抗体
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抗体融合分子，其特征在于，所述第二抗体和选自人PD
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1，人PD
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L1，CTLA4，HER2，EGFR，VEGFR2，VEGF，Claudin18.2，FAP，CD20，间皮素，CMET，及5T4的抗原结合。14.根据权利要求10所述的单域抗体
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抗体融合分子，其特征在于，所述第二抗体和PD
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L1结合，且所述第二抗体包括具有SEQ ID NO:19或22氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:20,21或23氨基酸序列的重链。15.根据权利要求10所述的单域抗体
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抗体融合分子，其特征在于，所述第二抗体和PD
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1结合，且所述第二抗体包括具有SEQ ID NO:15或17氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:16或18氨基酸序列的重链。16.根据权利要求10所述的单域抗体
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抗体融合分子，其特征在于，所述第二抗体和CTLA4结合，且所述第二抗体包括具有SEQ ID NO:32氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:33氨基酸序列的重链。17.根据权利要求13
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16任一项所述的单域抗体
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抗体融合分子，其特征在于，所述融合分子进一步包括TGFβ受体II胞外域或其功能类似物。18.根据权利要求17所述的单域抗体
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抗体融合分子，其特征在于，所述TGFβ受体II胞外域包括SEQ ID NO:11,12,13或14的氨基酸序列。
19.根据权利要求11所述的融合分子，其特征在于，所述融合分子进一步包括TGFβ受体II胞外域或其功能类似物。20.根据权利要求19所述的融合分子，其特征在于，TGFβ受体II胞外域包括如SEQ ID NO:11,1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕越峰，于春晓，K，
申请(专利权)人：江苏奥赛康生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：