【技术实现步骤摘要】
使用多重qPCR快速检测并鉴定多种肠道致病菌的组合物、试剂盒及方法
[0001]本专利技术涉及生物检测和医学诊断
,特别涉及一种使用多重qPCR 快速检测并鉴定多种肠道致病菌的组合物、试剂盒及方法。
技术介绍
[0002]肠道重要致病菌主要有金黄色葡萄球菌、艰难梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌、单细胞增生李斯特菌、致泻大肠埃希氏菌,以及沙门氏菌属、志贺氏菌属、弧菌属、弯曲杆菌属中的多数菌种等。
[0003]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是临床院内感染最常见且最重要的一种革兰阳性菌,感染后会导致恶心、呕吐、腹泻等症状,特别是会给免疫力低下的人带来严重的健康问题。医院内金黄色葡萄球菌耐药情况也非常严重。
[0004]艰难梭菌(Clostridium difficile)为革兰阳性厌氧杆菌,可产生两种毒素:肠毒素和细胞毒素,导致肠道大量失水和出血性坏死。其引起的抗生素相关性结肠炎,是院内获得性腹泻最常见的原因;15%~25%的抗生素相关性腹泻由艰难梭菌引发。
[0005]小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)属于肠杆菌科耶尔森菌属,是一种人兽共患的肠道病原菌,是人类耶尔森氏病的主要原因,是全球范围内最重要的食源性病原菌之一。
[0006]单细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)由于致死率高,在欧盟李氏菌病被认为是最严重的食源性疾病之一。由于宿主对本菌的清除主要依靠细胞免疫功能,因此老年人、孕妇、新生儿及免疫力 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种使用多重qPCR快速检测并鉴定多种肠道致病菌的组合物,其特征在于,其检测的靶基因包括:金黄色葡萄球菌的nuc基因,艰难梭菌的tpi基因,小肠结肠炎耶尔森菌的lysP基因,单增李斯特菌的hlyA基因,志贺菌属的ipaH基因,沙门菌属的invA基因,弧菌属的dnaJ基因,弯曲杆菌属的cadF基因,EPEC的eae和escV基因,EHEC的stx1和stx2基因,ETEC的lt、sth和stp基因,EAEC的aggR、astA和pic基因以及EIEC的invE基因;该组合物包括:用于检测沙门菌属的invA基因的正向引物:SEQ ID No.1,探针:SEQ ID No.2或SEQ ID No.3,反向引物:SEQ ID No.4或SEQ ID No.5;用于检测弧菌属的dnaJ基因的正向引物:SEQ ID No.6或SEQ ID No.7,探针:SEQ ID No.8、SEQ ID No.9或SEQ ID No.10,反向引物:SEQ ID No.11或SEQ ID No.12;用于检测弯曲杆菌属的cadF基因的正向引物:SEQ ID No.13或SEQ ID No.14,探针:SEQ ID No.15或SEQ ID No.16,反向引物:SEQ ID No.17或SEQ ID No.18;用于检测EAEC的aggR基因的正向引物:SEQ ID No.19或SEQ ID No.20,探针:SEQ ID No.21或SEQ ID No.22,反向引物:SEQ ID No.23、SEQ ID No.24或SEQ ID No.25;用于检测EAEC的astA基因的正向引物:SEQ ID No.26或SEQ ID No.27,探针:SEQ ID No.28或SEQ ID No.29,反向引物:SEQ ID No.30或SEQ ID No.31;用于检测EAEC的pic基因的正向引物:SEQ ID No.32或SEQ ID No.33,探针:SEQ ID No.34或SEQ ID No.35,反向引物:SEQ ID No.36或SEQ ID No.37;用于检测艰难梭菌的tpi基因的正向引物:SEQ ID No.38或SEQ ID No.39,探针:SEQ ID No.40或SEQ ID No.41,反向引物:SEQ ID No.42;用于检测单增李斯特菌的hlyA基因的正向引物:SEQ ID No.43或SEQ ID No.44,探针:SEQ ID No.45或SEQ ID No.46,反向引物:SEQ ID No.47、SEQ ID No.48或SEQ ID No.49;用于检测EPEC和EHEC的escV基因的正向引物:SEQ ID No.50或SEQ ID No.51,探针:SEQ ID No.52或SEQ ID No.53,反向引物:SEQ ID No.54或SEQ ID No.55;用于检测EPEC和EHEC的eae基因的正向引物:SEQ ID No.56或SEQ ID No.57,探针:SEQ ID No.58,反向引物:SEQ ID No.59或SEQ ID No.60;用于检测EHEC的stx1基因的正向引物:SEQ ID No.61,探针:SEQ ID No.62或SEQ ID No.63,反向引物:SEQ ID No.64或SEQ ID No.65;用于检测EHEC的stx2基因的正向引物:SEQ ID No.66或SEQ ID No.67,探针:SEQ ID No.68或SEQ ID No.69,反向引物:SEQ ID No.70或SEQ ID No.71;用于检测EIEC的invE基因的正向引物:SEQ ID No.72或SEQ ID No.73,探针:SEQ ID No.74或SEQ ID No.75,反向引物:SEQ ID No.76或SEQ ID No.77;用于检测小肠结肠炎耶尔森菌的lysP基因的正向引物:SEQ ID No.78或SEQ ID No.79,探针:SEQ ID No.80或SEQ ID No.81,反向引物:SEQ ID No.82或SEQ ID No.83;用于检测志贺菌属和EIEC的ipaH基因的正向引物:SEQ ID No.84、SEQ ID No.85或SEQ ID No.86,探针:SEQ ID No.87、SEQ ID No.88或SEQ ID No.89,反向引物:SEQ ID No.90、SEQ ID No.91或SEQ ID No.92;用于检测金黄色葡萄球菌的nuc基因的正向引物:SEQ ID No.93或SEQ ID No.94,探
针:SEQ ID No.95或SEQ ID No.96,反向引物:SEQ ID No.97或SEQ ID No.98;用于检测ETEC的lt基因的正向引物:SEQ ID No.99或SEQ ID No.100,探针:SEQ ID No.101或SEQ ID No.102,反向引物:SEQ ID No.103;用于检测ETEC的sth基因的正向引物:SEQ ID No.104、SEQ ID No.105或SEQ ID No.106,探针:SEQ ID No.107、SEQ ID No.108或SEQ ID No.109,反向引物:SEQ ID No.110或SEQ ID No.111;用于检测ETEC的stp基因的正向引物:SEQ ID No.112或SEQ ID No.113,探针:SEQ ID No.114,反向引物:SEQ ID No.115或SEQ ID No.116。2.根据权利要求1所述的使用多重qPCR快速检测并鉴定多种肠道致病菌的组合物,其特征在于,所有探针序列的5
’
端连接有荧光基团,3
’
端连接有淬灭基团,探针在完好状态下其淬灭基团可以淬灭荧光基团发出的荧光信号,因而实时荧光定量PCR仪检测不到荧光信号;在每一个PCR循环过程中,DNA聚合酶降解探针,使得淬灭基团与荧光基团分离,因此荧光恢复,荧光基团发出荧光信号,实时荧光定量PCR仪通过检测荧光信号的强度可以对未知样品进行定量分析。3.根据权利要求2所述的使用多重qPCR快速检测并鉴定多种肠道致病菌的组合物,其特征在于,该组合物包括:用于检测沙门菌属的invA基因的正向引物:SEQ ID No.1,探针:SEQ ID No.2,反向引物:SEQ ID No.4;用于检测弧菌属的dnaJ基因的正向引物:SEQ ID No.7,探针:SEQ ID No.10,反向引物:SEQ ID No.11;用于检测弯曲杆菌属的cadF基因的正向引物:SEQ ID No.13,探针:SEQ ID No.15,反向引物:SEQ ID No.18;用于检测EAEC的aggR基因的正向引物:SEQ ID No.20,探针:SEQ ID No.21,反向引物:SEQ ID No.23;用于检测EAEC的astA基因的正向引物:SEQ ID No.27,探针:SEQ ID No.28,反向引物:SEQ ID No.31;用于检测EAEC的pic基因的正向引物:SEQ ID No.32,探针:SEQ ID No.34,反向引物:SEQ ID No.36;用于检测艰难梭菌的tpi基因的正向引物:SEQ ID No.39,探针:SEQ ID No.41,反向引物:SEQ ID No.42;用于检测单增李斯特菌的hlyA基因的正向引物:SEQ ID No.43,探针:SEQ ID No.46,反向引物:SEQ ID No.49;用于检测EPEC和EHEC的escV基因的正向引物:SEQ ID No.50,探针:SEQ ID No.53,反向引物:SEQ ID No.54;用于检测EPEC和EHEC的eae基因的正向引物:SEQ ID No.56,探针:SEQ ID No.58,反向引物:SEQ ID No.59;用于检测EHEC的stx1基因的正向引物:SEQ ID No.61,探针:SEQ ID No.62,反向引物:SEQ ID No.64;用于检测EHEC的stx2基因的正向引物:SEQ ID No.66,探针:SEQ ID No.68,反向引物:
SEQ ID No.70;用于检测EIEC的invE基因的正向引物:SEQ ID No.72,探针:SEQ ID No.74,反向引物:SEQ ID No.76;用于检测小肠结肠炎耶尔森菌的lysP基因的正向引物:SEQ ID No.78,探针:SEQ ID No.80,反向引物:SEQ ID No.82;用于检测志贺菌属和EIEC的ipaH基因的正向引物:SEQ ID No.84,探针:SEQ ID No.87,反向引物:SEQ ID No.91;用于检测金黄色葡萄球菌的nuc基因的正向引物:SEQ ID No.93,探针:SEQ ID No.95,反向引物:SEQ ID No.97;用于检测ETEC的lt基因的正向引物:SEQ ID No.99,探针:SEQ ID No.101,反向引物:SEQ ID No.103;用于检测ETEC的sth基因的正向引物...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈莹,顾兵,赵呈雪,张林艳,马勇,郑岷雪,
申请(专利权)人:苏州国科闻普生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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