用于生产假尿苷单磷酸的融合酶及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于生产假尿苷单磷酸的融合酶，其特征在于：由核糖激酶基因rbsK

【技术实现步骤摘要】
用于生产假尿苷单磷酸的融合酶及其应用


[0001]本专利技术专利涉及一种用于生产假尿苷单磷酸的融合酶及其应用，属于生物工程


技术介绍

[0002]mRNA分子介导的生物疗法是近年来生物医疗研究的一大热点，主要包括了mRNA预防性疫苗、mRNA治疗疫苗及mRNA药物等。与传统疫苗相比，mRNA疫苗具有生产周期短、作用时间更长等优点。因此在研发上，mRNA疫苗能够快速响应疫情，并且在面对病毒菌株突变也更有优势。2005年Katalin Karik
ó
等人发现了mRNA上存在大量的假尿苷修饰，这种修饰能够大大降低mRNA的免疫原性，避免诱发大量炎症反应，降低mRNA疫苗和药物对人体的副作用。假尿苷、N1
‑
甲基假尿苷、5
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甲氧基尿苷等是主要的替换天然尿苷的修饰形式。而假尿苷单磷酸作为主要的合成原料，它的合成生产具有很高的研究价值。
[0003]目前市场上假尿苷单磷酸产品较少，文献记载假尿苷单磷酸的合成方法有化学法和酶法。化学法以假尿苷为底物，步骤较少，但成本较高，并且需要用到易本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于生产假尿苷单磷酸的融合酶，其特征在于：由核糖激酶基因rbsK
‑
刚性连接肽
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假尿苷5
‘
磷酸糖苷酶基因psuG组成，所述rbsK的序列如SEQ ID No.1所示，所述psuG的序列如SEQ ID No.2所示。2.根据权利要求1所述的用于生产假尿苷单磷酸的融合酶，其特征在于：所述刚性连接肽的氨基酸序列为EAAAKEAAAK。3.根据权利要求2所述的用于生产假尿苷单磷酸的融合酶，其特征在于：所述融合酶的C端还带有His标签。4.权利要求1
‑
3中任一项所述的用于生产假尿苷单磷酸的融合酶的表达基因，其序列如SEQ ID No.10所示。5.一种用于生产假尿苷单磷酸的融合酶的表达质粒，其特征在于表达权利要求1
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4中任一项所述的融合酶，质粒载体为PET
‑
28a。6.一种用于生产假尿苷单磷酸的融合酶的原核表达载体，其特征在于表达权利要求1
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3中任一项所述的融合酶，表达载体为大肠杆菌BL21。7.权利要求1
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3中任一项所述的融合酶的制备方法，其特征在于其步骤包括：(1)分别进行核糖激酶基因rbsK和假尿苷5
‘
磷酸糖苷酶基因psuG的引物设计，并且在引物设计过程中加入刚性连接肽和载体的同源片段，以大肠杆菌BL21菌体裂解液为模板，克隆出psuG全长基因片段及rbsK全长基因片段；(2)将步骤(1)的引物克隆出的基因片段连接到质粒载体上，构建rbsK
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刚性连接肽
‑
psuG表达质粒；(3)将表达质粒转化到大肠杆菌BL21，挑选出阳性克隆以表达融合酶蛋白；(4)对阳性克隆菌株进行培养，收集菌体，通过超声破碎、离心收集得到总蛋白，然后用N...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖婉莹，滕以刚，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：