一种基于多重连接探针扩增技术对石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲进行检测的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于多重连接探针扩增技术对石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲进行检测的方法，它包括以下步骤：1)提取样品基因组DNA；2)以基因组DNA为模板，设计特异性引物扩增核基因片段；3)将扩增产物变性后与MLPA探针杂交；4)利用DNA连接酶将杂交产物进行连接；5)利用通用引物对连接产物进行实时荧光定量PCR扩增；6)收集熔解曲线信号，观测Tm值。本发明专利技术能够在较短的时间内鉴别石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲，可有效检测出掺混样品，该方法具有特异性强，灵敏度高等优点，在中药材真伪鉴定领域有很好的应用前景。的应用前景。的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于多重连接探针扩增技术对石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲进行检测的方法


[0001]本专利技术属于中药材鉴定领域，具体涉及一种基于多重连接探针扩增技术快速鉴别石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲的方法。

技术介绍

[0002]药材市场上菖蒲类药材有石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲三种。石菖蒲为常用野生中药材品种之一，其基原物种为天南星科植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott(Flora of China收录为金钱蒲Acorus gramineus Soland.)，具有开窍豁痰、醒神益智、化湿开胃的功效。水菖蒲为天南星科菖蒲属植物水菖蒲(Acorus calamus Linnaeus)的干燥根茎，具有温胃，消炎止痛的功效。古人以“菖蒲”记为石菖蒲，在《神农本草经》中为被列为草类上品，并以“一寸九节者良”作为优品，称“九节菖蒲”。但现代研究把毛茛科植物阿尔泰银莲花Anemone altaica Fischer ex C.A.Meyer的干燥根茎作为九节菖蒲，具有开窍祛痰，安神醒脾的功效。现有研究表明，石菖蒲与水菖蒲的药材来源、化学成分、药理作用均本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于多重连接探针扩增技术对石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲进行检测的方法，其特征在于包括以下步骤：1)提取样品基因组DNA；2)以提取的基因组DNA为模板，设计特异性引物扩增石菖蒲、水菖蒲、九节菖蒲的核基因片段；3)将扩增产物变性后与MLPA探针杂交；4)利用DNA连接酶将步骤3)的杂交产物进行连接；5)利用通用引物对步骤4)的连接产物进行实时荧光定量PCR扩增；6)收集熔解曲线信号，观测Tm值，其中，所述MLPA探针共3组，每一组分别由左探针和右探针组成，其中：第一组左探针：GGGTTCCCTAAGGGTTGGACGGGTCCGGTCGCGGCACGGCATGCGGTGGG；右探针：CTGAGAGAAAGAGTCCCTACCACTCGCTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC；第二组左探针：GGGTTCCCTAAGGGTTGGATTGATCGCGGCACGGCATGCGGTGGC；右探针：CTGAGAGAAAGAGTCCCTACCACTCGCTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC；第三组左探针：GGGTTCCCTAAGGGTTGGATTCAGAATTGTATACTCATCCCCCAAAGACGAAA；右探针：TGACGCGCACGCCTCGCCGCTCTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述石菖蒲核基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；所述水菖蒲核基因片段的核苷酸序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪波，胡敏，王文斌，徐玲，程华春，李小芳，莫静，
申请(专利权)人：湖北省药品监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：