一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒及其在抗肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒及其在抗肿瘤中的应用，所述携带shTRIM35的溶瘤腺病毒的基因组中整合有能够在肿瘤细胞中抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列，经体外实验和体内实验验证发现，所述携带shTRIM35的溶瘤腺病毒具有高效抑制、杀伤肿瘤的效果，有极大的开发成抗肿瘤药物的前景和价值。和价值。和价值。

【技术实现步骤摘要】
一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒及其在抗肿瘤中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地，涉及一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒及其在抗肿瘤中的应用。

技术介绍

[0002]癌症已经成为严重威胁全球人类健康的主要公共卫生问题之一，手术是针对早期癌症最有效的治疗手段，但是对大多数肿瘤晚期并发生转移的患者无显著改善。放疗或化疗及其他辅助治疗虽然在一定程度上能够抑制肿瘤的进展，但是对于癌症患者总体的生存率并无显著提高。因此，寻找新型的且安全有效的治疗药物是当今抗肿瘤治疗领域的研究的热点。近年来，肿瘤免疫治疗(Cancer Immunotherapy)因其显著的疗效而备受关注，肿瘤免疫治疗是一种通过活化及/或调控免疫相关通路，激活机体免疫系统杀死并监视癌细胞的治疗手段。溶瘤病毒(Oncolytic Virus，OV)作为肿瘤免疫治疗领域的新星，随着溶瘤病毒产品Imlygic(T
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Vec)在2015年被FDA批准上市，溶瘤病毒介导的抗肿瘤免疫治疗受到越来越多的关注。
[0003]溶瘤病毒是一类能在肿瘤细胞中特异性复制而不影响正常组织生存稳态的基因工程病毒，是继免疫检查点抑制剂之后的又一抗肿瘤生物疗法。以牛痘病毒、柯萨奇病毒、腺病毒、呼肠孤病毒、单纯疱疹病毒和麻疹病毒等病毒为载体构建的溶瘤病毒正在进行广泛的临床前及临床试验。其中，腺病毒载体是目前最具应用前景的疫苗载体之一，其具有高表达、可同时诱导特异性体液免疫和细胞免疫反应、安全性好、易于制备、无需佐剂等优点，被广泛应用于各种预防性或治疗性疫苗的研发，例如：埃博拉疫苗、寨卡疫苗、HIV疫苗、流感疫苗、疟疾疫苗、新型冠状病毒疫苗等。同时，在肿瘤基因治疗领域，腺病毒也常用于基因治疗及溶瘤疫苗构建，溶瘤腺病毒(Oncolytic Adenovirus，OAV)已成为最具发展前景的抗肿瘤免疫疗法之一。
[0004]溶瘤腺病毒能够在肿瘤细胞中特异性复制并裂解肿瘤细胞，进而释放子代病毒，再感染周围的肿瘤细胞，通过级联放大效应最终消灭肿瘤。然而，目前本领域报道的相关溶瘤腺病毒存在杀伤肿瘤作用较弱、疗效低等问题，难以满足临床上的实际需要，因此，目前在肿瘤免疫治疗领域仍然迫切需要提高溶瘤腺病毒的抗肿瘤疗效。

技术实现思路

[0005]为了解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒及其在抗肿瘤中的应用。
[0006]本专利技术的上述目的通过以下技术方案得以实现：
[0007]本专利技术的第一方面提供了一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒。
[0008]进一步，所述溶瘤腺病毒包含抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列。
[0009]进一步，所述抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]进一步，所述溶瘤腺病毒可操作性地包含依次连接的下列基因：Ki67启动子、E1A基因的编码序列、U6启动子、抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列、SV40的polyA序列。
[0011]在本专利技术中，所述腺病毒的基因组为线性双链DNA，其两端各有1个100
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600bp的反向终端重复序列(Inverted terminal repeat，ITR)，其内侧包含腺病毒早期复制相关的E1
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E4基因，和晚期表达的结构相关的L1
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L5基因。其中E1区和E3区与病毒的复制特性以及免疫逃避功能相关，是常被用来敲除和改造的区域。E1区分为E1A和E1B，E1A主要由289R和243R构成，主要调节细胞的代谢功能而使细胞更易感，E1B 55K基因产物可以与细胞中的p53蛋白相互作用，使其丧失功能，进而阻止p53基因表达产物诱导的宿主细胞分裂停止或细胞凋亡的产生，此外，E1B 55K基因产物还与病毒复制、病毒晚期mRNA的转录以及病毒RNA的转运等有关。E3区域基因表达产物的主要功能是破坏免疫防御机制，而与病毒基因组的复制无关，其中gp19K蛋白可以在内质网上与主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex，MHC)I类分子的重链结合而阻止其转运到细胞表面、延缓MHC I的表达，进而破坏被感染细胞的免疫防御机制，而使病毒大量复制，最终裂解细胞。
[0012]在本专利技术中，所述Ki67启动子用于启动调控E1A的表达，E1A是腺病毒复制的必需基因；所述U6启动子用于启动调控抑制TRIM35表达的外源shRNA(shTRIM35)的表达；所述polyA为病毒来源的SV 40polyA。
[0013]在本专利技术的具体实施方案中，本专利技术首次构建得到了如前所述的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒，并通过体外实验和体内实验证明了所述携带shTRIM35的溶瘤腺病毒的溶瘤作用显著增强，在肿瘤组织中的复制能力也显著增强，具有显著更优的抗肿瘤效果。
[0014]在一些实施方案中，本专利技术所述的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒还可与其他能够用于治疗和/或辅助治疗肿瘤的治疗剂联合使用，所述治疗剂包括但不限于：烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素、免疫调节剂、各种类型的治疗性抗体药物、各种类型的CAR
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T药物、各种类型的抗肿瘤的放射性同位素、各种类型的免疫检查点抑制剂、各种类型的免疫激活剂、各种类型的细胞因子。
[0015]进一步，所述烷化剂包括但不限于：双氯乙基甲胺、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、溴丙哌嗪、松龙苯芥、磷雌氮芥、环磷酰胺、六甲密胺、异磷酰胺、福替目丁、三胺硫磷、卡氮芥、链唑霉素、英丙舒凡、氮烯咪胺、顺铂、奥沙利铂、卡铂。
[0016]进一步，所述抗代谢物包括但不限于：甲氨喋呤、5
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氟脲嘧啶、氟苷、5
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氟脱氧尿嘧啶、卡培他滨、阿糖胞苷、氟达拉滨、6
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巯基嘌呤、2
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氯脱氧腺苷、5
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氮杂胞苷、2，2
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二氟脱氧胞嘧啶核苷、克拉屈滨、脱氧柯福霉素、喷司他丁。
[0017]进一步，所述抗肿瘤抗生素包括但不限于：柔红霉素、阿霉素、去甲氧正定霉素、光神霉素、丝裂霉素C、戊柔比星、盐酸米托蒽醌、博来霉素、更生霉素、光辉霉素、甲基苄肼。
[0018]进一步，所述有丝分裂抑制剂包括但不限于：紫杉萜、长春碱、紫杉醇、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨。
[0019]进一步，所述染色质功能抑制剂包括但不限于：依立替康、依托扑沙、托泊替康、磷酸依托扑沙、鬼臼噻吩甙。
[0020]进一步，所述抗血管生成剂包括但不限于：普啉司他、坦诺司他、伊洛马司他、丙亚胺、马马司他、巴马司他、CGS
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27023A、溴氯哌喹酮、COL
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3、新伐司他、BMS
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275291、沙立度...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型的携带shTRIM35的溶瘤腺病毒，其特征在于，所述溶瘤腺病毒包含抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列。2.根据权利要求1所述的溶瘤腺病毒，其特征在于，所述抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列如SEQ ID NO:1所示。3.根据权利要求2所述的溶瘤腺病毒，其特征在于，所述溶瘤腺病毒可操作性地包含依次连接的下列基因：E1A基因的编码序列、U6启动子、抑制TRIM35表达的外源shRNA的编码序列、SV40的polyA序列。4.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含有效量的权利要求1
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3中任一项所述的溶瘤腺病毒。5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。6.抑制TRIM35表达的试剂在制备增强溶瘤腺病毒抗肿瘤作用的产品中的应用，其特征在于，所述抑制TRIM35表达的试剂包括：(1)针对TRIM35基因的shRNA；(2)针对TRIM35基因的siRNA；(3)抑制TRIM35基因转录活性的试剂；...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙楠，王刚，方琳，郑骏年，张晨，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：