一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用。所述环状RNA生物标志物包括hsa_circRNA_0007132和hsa_circRNA_0078217中的至少1种。本发明专利技术还提供所述环状RNA生物标志物的引物组合。本发明专利技术为卵巢癌的诊断提供参考数据，所提供的环状RNA生物标志物对卵巢癌具有较高的灵敏性和特异性，可以作为新型的生物标志物用于卵巢癌的检测。检测。检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于基因检测
，具体地说，涉及一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌作为卵巢肿瘤的一种恶性肿瘤，是威胁妇女健康的最大疾患之一。虽然卵巢癌的发病率比宫颈癌和子宫内膜癌低，在妇科恶性肿瘤中位居第三位，但其死亡率却排在妇科癌症首位，甚至大于宫颈癌及子宫内膜癌的死亡率之和。这可能与卵巢处于腹部比较深的地方有关，往往造成卵巢癌发现的时候往往是晚期，而此时癌细胞扩散到了腹部其他器官，治愈起来比较困难。因此，非常有必要开发一种检测灵敏度和特异性理想的用于卵巢癌诊断的生物标志物和试剂盒，为卵巢癌患者的确诊及治疗方案选择提供辅助参考。
[0003]环状RNA是一种具有闭合环状结构的RNA，不可依赖于5端的帽子结构来翻译蛋白。与此同时，环状RNA可以抵抗RNA酶的水解作用，具有比线性RNA更强的稳定性。换句话说，环状RNA具有保守性，并具有时间和组织表达特异性是一种潜在的疾病诊断分子生物标志物。已有研究表明，肿瘤的发生、发展与环状RNA的表达异常与有关。譬如， hsa_circRNA_0047905，hsa_circRNA_0138960和has_ circRNA_7690
‑
15与胃癌的形成息息相关。此外，hsa_circRNA_0001785与乳腺癌的发生、发展有关。
[0004]有鉴于此，为了更好的服务卵巢癌患者的诊断，本专利技术申请人公开了一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用，用于卵巢癌的诊断，为卵巢癌患者的确诊和治疗方案选择提供辅助参考。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题在于克服卵巢癌诊断现有技术的不足，提供一种可以克服上述问题或者部分地解决上述问题的一种检测灵敏度和特异性理想的用于卵巢癌诊断的生物标志物和试剂盒，为卵巢癌患者的确诊及治疗方案选择提供辅助参考。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术的技术方案是：本专利技术提供一组用于卵巢癌诊断的环状RNA生物标志物，包括SEQ ID NO. 1所示的hsa_circRNA_0007132和SEQ ID NO.2所示的hsa_circRNA_0078217两种环状RNA。
[0007]上述生物标志物在制备诊断卵巢癌患者的试剂盒或试剂中的应用。
[0008]上述生物标志物在诊断肺癌的环状RNA芯片中的应用。
[0009]上述生物标志物在制备或筛选卵巢癌靶向药物中的应用。
[0010]本专利技术还提供一组用于卵巢癌诊断的环状RNA生物标志物的引物组合，所述引物组合包括针对hsa_circRNA_0007132的特异性引物和针对hsa_circRNA_0078217的特异性引物。
[0011]进一步地，上述针对hsa_circRNA_0007132的特异性引物包括SEQ ID NO. 3所示
的上游引物和SEQIDNO.4所示的下游引物。
[0012]进一步地，上述针对hsa_circRNA_0078217的特异性引物包括SEQIDNO.5所示的上游引物和SEQIDNO.6所示的下游引物。
[0013]进一步地，上述环状RNA生物标志物的引物组合在制备诊断卵巢癌的试剂盒或试剂中的应用。
[0014]进一步地，制备诊断卵巢癌的试剂盒包括Trizol裂解液、氯仿、异丙醇、75％乙醇、DEPC水和qRT
‑
PCR反应液。
[0015]进一步地，所述诊断卵巢癌的试剂盒中的qRT
‑
PCR反应液包括：PCR缓冲液、Mg
2+
、dNTPs、SYBR、TaqDNA聚合酶、模板和ddH2O。
[0016]进一步地，上述环状RNA生物标志物的引物组合在制备或筛选卵巢癌靶向药物的应用。
[0017]本专利技术还提供一种诊断卵巢癌的试剂盒，其中包括上述的环状RNA生物标志物的引物的任意一种或两种。
[0018]采用上述技术方案后，本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果：(1)本专利技术通过基因芯片技术和RT
‑
qPCR技术，筛选出用于检测卵巢癌的环状RNA生物标志物，通过上述两种方法联合筛选的生物标志物，在卵巢癌发生时表达量变化差异性大，利于应用于临床检测；(2)针对两种筛选出的环状RNA生物标志物的特异性引物，其具有特异性强和敏感性高等优点，通过RT
‑
qPCR技术，可以准确地检测出所筛选的生物标志物的含量；(3)两种筛选出的环状RNA生物标志物在卵巢癌发生时表达量发生显著的变化，在制备或筛选卵巢癌靶向药物中具有应用价值；(4)两种筛选出的环状RNA生物标志物在制备诊断卵巢癌患者的试剂盒或试剂方面具有应用价值。
附图说明
[0019]图1为卵巢癌环状RNA生物标志物的筛选流程图。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。图1为卵巢癌环状RNA生物标志物的筛选流程图。
[0021]实施例一卵巢癌环状RNA生物标志物的初步筛选第一步，对样本中的RNA进行抽提及对所抽提的RNA进行质量检测：首先收集符合伦理要求的术前未接受过化疗和放疗的病理学诊断为卵巢癌的患者的癌组织及癌旁组织，然后用TRIZOL法对样本中的RNA进行提取，随后保存在
‑
80摄氏度。所提取RNA的质量通过紫外吸收法和凝胶电泳法来检测。与此同时，将总体RNA分为等量2份，1份采用RNaseR处理，另一份不作处理，在经过纯化和反转录后，用荧光定量PCR检测GAPDH和环状RNA的Ct值表达来评估线性转录本去除效率。所提取RNA的完整性采用琼脂糖凝胶电泳来评估。结果表明，
所提取的RNA都达到检测纯度和浓度等方面的要求，且较为完整，可用于后续实验；第二步，采用商用试剂盒将RNaseR处理后的RNA用随机引物反转录为带有T7promoter的cDNA序列，再将cDNA转录为荧光标记的 cRNA序列；第三步，按照卵巢癌分期(Ⅰ期：80/200；Ⅱ期：72/200；Ⅲ期：48/200)及组织来源(癌和癌旁)，将从200个样本提取的RNA分为6组，每组内各RNA样本混合后利用ArraystarHumancircRNAArrayV2比较不同环状RNA的表达情况。与此同时，按照标准条件的要求，对标记好的探针和高密度基因组芯片进行杂交；第四步，对第三步中所制成芯片的荧光强度采用芯片扫描仪进行扫描，并将实验结果转换成相应的数字型数据并进行分析；箱图分析结果表明6组环状RNA检测结果具有良好的均一性；由差异倍数和P值所得火山图给出显示差异倍数与P存在显著差异表达的环状RNA为hsa_circRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用，其特征在于：所述卵巢癌的环状RNA生物标志物包含SEQ ID NO.1所示的hsa_circRNA_0007132和SEQ ID NO. 2所示的hsa_circRNA_0078217; 所述卵巢癌的环状RNA生物标志物的特异性引物对包括针对hsa_circRNA_0007132的如SEQ ID NO. 3所示的上游引物和SEQ ID NO. 4所示的下游引物，及针对hsa_circRNA_0078217的如SEQ ID No .5所示的上游引物和SEQ ID NO. 6所示的下游引物。2.权利要求1所述的一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用，其特征在于：所述卵巢癌的环状RNA生物标志物在制备诊断卵巢癌患者的试剂盒或试剂中的应用。3.权利要求1所述的一种检测卵巢癌的环状RNA生物标志物、特异性引物对、试剂盒及其应用，其特征在于：所述卵巢癌的环状RNA生物标志物在制备诊断卵巢癌的环...

【专利技术属性】
技术研发人员：童云广，杨开珍，
申请(专利权)人：奥明杭州基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：