一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA标志物及其应用，属于生物技术领域。发明专利技术人研究发现，环状RNA hsa_circ_0055033在胰腺癌患者与健康人血浆中的表达有显著不同，Circ_0055033在胰腺癌患者的血浆中表达显著降低，由此说明，Circ_0055033可作为胰腺癌诊断标志物，且能很好的预测胰腺癌的发生。此外，hsa_circ_0055033过表达后，可显著抑制胰腺癌细胞的增殖能力以及侵袭能力，由此说明，hsa_circ_0055033环状RNA基因可以作为胰腺癌治疗的潜在靶点，用于检测Circ_0055033的试剂可以用于诊断或治疗癌症的产品中。用于诊断或治疗癌症的产品中。用于诊断或治疗癌症的产品中。

【技术实现步骤摘要】
一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，胰腺癌的发病率呈持续上升趋势，它约占所有癌症的2%，与5%的癌症死亡相关。大多数患者在疾病发展和进展至晚期过程中没有明显症状，肿瘤细胞具有高度侵袭性。早期诊断困难，并且它已经成为最致命的恶性肿瘤之一。作为预后极差的消化系统肿瘤，胰腺癌具有早期诊断困难，手术切除率低、术后易复发转移等临床特点，临床诊治极具挑战性。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA及其应用，专利技术人研究发现，hsa_circ_0055033环状RNA基因，在胰腺癌患者的样本中表达水平显著降低，由此提示该环状RNA基因可作为标志物，并可进一步的用于胰腺癌的诊断和治疗中。
[0004]本专利技术的技术构思：CircRNA是一类内源性非编码RNA，由内含子或外显子通过反向剪接产生的具有一个共价闭合的环状结构（没有5
’
端帽子和3
’
端聚腺苷酸尾结构）。在真核生物中广泛的表达，不受RNA外切酶的影响，表达更稳定且不易降解。circRNA具有组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征。近几年，许多circRNA被认为是癌基因或抑癌基因，与多种疾病的发生和发展密切相关。一些研究表明，circRNA的异常表达可以作为多种癌症的诊断和预后的生物标志物及潜在治疗靶点。<br/>[0005]ANTXR 细胞粘附分子 1（ANTXR Cell Adhesion Molecule 1，ANTXR1）又名炭疽毒素受体 1（Anthrax Toxin Receptor 1），编码一种I型跨膜蛋白。ANTXR1也称为肿瘤内皮标志物8 (TEM8)，是一种高度保守的跨膜糖蛋白，在肿瘤脉管系统上过度表达 (Chaudhary等, 2012)。研究发现ANTXR1可以促进炭疽毒素进入细胞，并且已被证明在几种癌症类型中过度表达（Rmali 等，2004；Davies 等，2006；Szot 等）。值得注意的是：ANTXR1在胰腺癌肿瘤干细胞中表达升高，且ANTXR1+胰腺癌干细胞具有更强的增殖能力和侵袭迁移表型（Sonia Alcal
á
等，2019），上述发现说明ANTXR1在肿瘤血管生成、进展、侵袭和转移中起重要的促进作用。
[0006]专利技术人在对ANTXR1来源的circRNA进行研究时发现了一条环状RNA hsa_circ_0055033（Circ_0055033），该环状RNA Circ_0055033特异性的在胰腺癌细胞系和胰腺癌肿瘤患者血清中显著低表达，且当对hsa_circ_0055033进行过表达后，胰腺癌细胞系的恶性表型被显著抑制，这一结果提示hsa_circ_0055033可能与ANTXR1翻译产生的蛋白在胰腺癌中的作用相反，因此我们认为：通过检测hsa_circ_0055033在胰腺癌的表达情况可用于胰腺癌的早期诊断，而通过对hsa_circ_0055033及其序列进行改造后具有作为治疗胰腺癌核
酸药物的可能性。
[0007]本专利技术通过以下技术方案实现：第一方面，本专利技术提供一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA标志物，该circRNA标志物为核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示的hsa_circ_0055033。
[0008]hsa_circ_0055033位于基因ANTXR1 （hsa_circ_0055033由8,9两个外显子组成，全长142 nt），进行扩增后通过一代Sanger测序后确认hsa_circ_0055033的成环序列，hsa_circ_0055033的全长为142个碱基，全长序列为：CTGGCCCGGATTGCGGACAGTAAGGATCATGTGTTTCCCGTGAATGACGGCTTTCAGGCTCTGCAAGGCATCATCCACTCAATTTTGAAGAAGTCCTGCATCGAAATTCTAGCAGCTGAACCATCCACCATATGTGCAGGAG（SEQ ID No. 1）。
[0009]第二方面，本专利技术提供一种上述circRNA标志物的引物组，引物组包括正向引物和反向引物；正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：AGGAGCTGGCCCGGATTGCG；反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：ATGGTGGATGGTTCAGCTGCT。
[0010]具体地，还包括内参GAPDH的正向引物和反向引物：内参GAPDH Primer F: GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT（SEQ ID NO.4）；内参GAPDH Primer R：GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG（SEQ ID NO.5）。
[0011]第三方面，本专利技术提供一种上述circRNA标志物在制备胰腺癌诊断或治疗的产品中的应用。
[0012]第三方面，本专利技术提供一种用于检测上述circRNA标志物的试剂在制备用于诊断或治疗胰腺癌的产品中的应用。
[0013]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述试剂选自：对circRNA标志物具有检测特异性的探针、基因芯片或检测引物组；优选地，检测引物组包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0014]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述试剂还包括RNA提取试剂、逆转录反应体系和荧光定量PCR试剂。
[0015]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述产品包括芯片、试剂盒或者核酸膜条。
[0016]第四方面，本专利技术提供一种用于胰腺癌诊断或治疗的试剂盒，试剂盒包括针对权利要求1中的circRNA标志物的特异性引物组；优选地，引物组包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；第五方面，本专利技术提供一种上述circRNA标志物的表达促进剂在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
[0017]第六方面，本专利技术提供一种治疗胰腺癌的药物，其活性成分包括如权利要求1的circRNA标志物的表达促进剂。
[0018]与现有技术相比，本专利技术至少具有如下技术效果：专利技术人研究发现，环状RNA hsa_circ_0055033在胰腺癌患者与健康人血浆中的表达有显著不同， circ_0055033在胰腺癌患者的血浆中表达显著降低，由此说明，circ_
0055033可作为胰腺癌诊断标志物，其在胰腺癌血清中显著降低，且能很好的预测胰腺癌的发生。
[0019]专利技术人进一步研究发现，hsa_circ_0055033过表达后，可显著抑制胰腺癌细胞的增殖能力以及侵袭能力，由此说明， hsa_circ_0055033环状RNA基因可以作为胰腺癌治疗的潜在靶点。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于胰腺癌诊断及治疗的circRNA标志物，其特征在于，所述circRNA标志物为核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示的hsa_circ_0055033。2.一种如权利要求1所述的circRNA标志物的引物组，其特征在于，所述引物组包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种如权利要求1所述的circRNA标志物在制备胰腺癌诊断或治疗的产品中的应用。4.一种用于检测如权利要求1所述的circRNA标志物的试剂在制备用于诊断或治疗胰腺癌的产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：对所述circRNA标志物具有检测特异性的探针、基因芯片和检测引物组；优选地，所述检测引物组包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书七页序列表电子公布附图三页，
申请(专利权)人：上海卡序生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：