一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR-7-5p模拟物及其筛选方法、应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，主要涉及了一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR

【技术实现步骤摘要】
一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR
‑7‑
5p模拟物及其筛选方法、应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，主要涉及了一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR
‑7‑
5p模拟物及其筛选方法、应用。

技术介绍

[0002]近年来，乳腺癌的发病率逐年上升，已成为威胁女性健康的头号杀手。乳腺癌往往由于肿瘤细胞不可控制的扩散而导致其他一些器官的功能下降，甚至衰竭以致死亡。尽管目前原发性乳腺癌的治疗取得了不错的进展，但转移性乳腺癌还没有有效的治疗方法。包括手术、化疗和放疗等治疗手段主要适用于早期未转移的乳腺癌患者，对晚期广泛转移的乳腺癌患者收益甚微。并且利用化疗等方法的毒副作用很大。
[0003]然而，近年来的研究显示外泌体可装载细胞释放的大量生物活性分子(小的非编码RNA、mRNA、DNA和蛋白质等)进入体液，伴随体液流动并结合靶细胞膜将其内容物释放到靶细胞中，起到细胞间信息传递的作用。其中，外泌体miRNAs也在一定程度上反映了肿瘤细胞中异常miRNAs的表达模式。异常miRNAs更能表现对该肿瘤细胞的具体作用，而且由于miRNA是生物体内天然存在具有通过碱基互补原理靶向抑制基因表达能力的小RNA，所以miRNA具有特异性的优势，是开发靶向性药物的有力工具。因此，利用不同侵袭性的乳腺癌细胞的外泌体筛选与乳腺癌转移相关的差异表达miRNAs，可以开发能够抑制乳腺癌转移的小核酸药物。

技术实现思路

[0004]针对现有转移性乳腺癌治疗中存在的问题，本专利技术提供一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR
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5p模拟物，该模拟物，能够靶向抑制RYK基因表达从而抑制乳腺癌的迁移侵袭。
[0005]本专利技术还提供了一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR
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5p模拟物的筛选方法。
[0006]本专利技术的另一目的为提供了一种miR
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5p模拟物在制备抑制乳腺癌的迁移和侵袭的小核酸药物中的应用。
[0007]本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR
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5p模拟物，所述miR
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5p的序列如SEQ ID NO.1所示：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGUU。
[0008]进一步的，所述miR
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5p模拟物的序列为：引导链: UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGUU；过客链: CAACAAAAUCACUAGUCUUCCAUU。
[0009]本专利技术还提供了一种miR
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5p模拟物的筛选方法，包括以下步骤：（1）利用生物信息学分析GEO数据库下的GSE114329数据集中的MDA231 EXO 和MCF7 EXO两个子集，从数据集中下载原始数据后，对原始数据进行过滤、处理，然后进行差
异表达基因的筛选；（2）将筛选的差异表达的miRNA进行qRT
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PCR分析，筛选出miR
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5p。
[0010]进一步的，步骤（2）中，所述qRT
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PCR的程序为：95℃预变性5分钟，40个循环包括95℃ 15秒，60℃ 20秒，72℃ 40秒，内参为U6。
[0011]进一步的，所述qRT
‑
PCR分析过程中，各miRNA引物序列具体为：。
[0012]本专利技术还提供了一种miR
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5p模拟物在制备抑制乳腺癌的迁移和侵袭的小核酸药物中的应用。
[0013]本专利技术进一步利用miR
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5p模拟物进行伤口愈合实验和Transwell迁移侵袭实验来证明了miR
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5p模拟物能够在体外显著抑制乳腺癌的迁移侵袭。本专利技术又进一步验证miR
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5p模拟物是可以在体外通过靶向抑制RYK基因的表达来抑制乳腺癌的迁移侵袭。
[0014]本专利技术筛选过程中，筛选出来的miRNA包括miR
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5p、miR
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98
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5p、miR
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193a
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5p、miR
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345
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5p、miR
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378a
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3p。
[0015]本专利技术的有益效果为：本专利技术在于提供miR
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5p模拟物在显著抑制乳腺癌侵袭转移中的应用，研究发现miR
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5p模拟物通过靶向抑制RYK的分子机制产生对乳腺癌的显著抑制效果。在体外培养体系下，miR
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5p模拟物作用抑制乳腺癌的迁移侵袭能力；miR
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5p模拟物能够抑制乳腺癌中RYK的蛋白和mRNA水平。在裸鼠体内，miR
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5p模拟物也可以显著抑制乳腺癌的迁移侵袭能力。因此，本专利技术验证miR
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5p模拟物能够成为显著抑制乳腺癌转移的小核酸药物。
附图说明
[0016]图1为生物信息学分析MDA
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MB
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231和MCF7源外泌体中差异表达miRNAs的火山图。
[0017]图2为外泌体的鉴定图。
[0018]图3为各miRNA在细胞以及外泌体中的表达图。
[0019]图4为miR
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5p模拟物能抑制乳腺癌的迁移侵袭效果图。
[0020]图5为miR
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5p模拟物靶向抑制RYK基因的作用结果图。
具体实施方式
[0021]以下通过具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术的范围仅限于以下的实例。在不脱离本专利技术上述方法思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包含在本专利技术的范围内。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。本实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，为从商业途径得到的试剂和材料。
[0022]实施例1 生物信息学分析筛选不同侵袭性乳腺癌细胞来源的外泌体内差异表达的miRNA。
[0023]从GEO数据库中下载GSE114329数据集中的MDA231 EXO 和MCF7 EXO两个子集的原始数据，然后对原始数据进行过滤、处理，得到干净的序列，然后进行差异表达基因的筛选。筛选出来的在低侵袭性乳腺癌细胞系来源的外泌体内高表达的miRNA有9个，结果如图1所示。进一步排除重复数据中存在较大差异的几个miRNA，最后选择了5个miRNA，包括miR
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5p、miR
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5p、miR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制乳腺癌的迁移和侵袭的miR
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5p模拟物，其特征在于，所述miR
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5p的序列如SEQ ID NO.1所示：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGUU。2.根据权利要求1所述的miR
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5p模拟物，其特征在于，所述miR
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5p模拟物的序列为：引导链: UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGUU；过客链: CAACAAAAUCACUAGUCUUCCAUU。3.一种如权利要求1或2所述的miR
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5p模拟物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）利用生物信息学分析GEO数据库下的GSE114329数据集中的MDA231 EXO 和MCF7 EXO...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨革，梁兆仪，车程川，刘金锋，巩志金，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：