一种携带shSTAT3/shPD-L1重组质粒的减毒沙门氏菌载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种携带shSTAT3/shPD

【技术实现步骤摘要】
一种携带shSTAT3/shPD
‑
L1重组质粒的减毒沙门氏菌载体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种携带shSTAT3/shPD
‑
L1重组质粒的减毒沙门氏菌载体及其应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌(colorectal cancer)是常见的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处。几十年前，由于医疗技术的落后，以及人们卫生意识的缺乏等原因，结直肠癌很少被诊断出来，而如今结直肠癌已成为全球癌症死亡的第三大常见原因，发病率为10.2％，死亡率占所有癌症死亡率的9.2％。结直肠癌不仅影响患者生活质量，如何提升结直肠的癌治疗效果，同时降低治疗成本成为科研人员的研究重点。
[0003]结直肠癌的标准常规治疗方法包括手术、化学疗法和放射疗法。根据疾病的定位和进展，这些治疗可以组合使用。通过腹腔镜和经肛门手术方法进行的全直肠系膜切除术(TME)通常是局部癌症的治疗选择，然而，完全去除所有癌细胞通常是不可能的，部分结直肠癌患者需接受辅助化疗和放疗的进一步治疗。由于这些疗法对任何正在生长和分裂的细胞存在非特异性的细胞毒性，会给机体带来许多副作用。此外，经辅助疗法治疗后，仍有很大比例的患者复发。因此，探索有效的替代方法对治疗结直肠癌患者显得尤为重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一在于提供一种短发夹RNA，所述短发夹RNA为shSTAT3或shPD
‑
L1，其中shSTAT3序列如SEQ ID NO.2所示，shPD
‑
L1序列如SEQ ID NO.3所示。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种重组质粒，所述重组质粒中含有权利要求1中的shSTAT3 和shPD
‑
L1。
[0006]优选地，所述重组质粒含有PLKO.1骨架。
[0007]更优选地，所述重组质粒的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术的目的之三在于提供一种减毒沙门氏菌载体，所述减毒沙门氏菌载体含有序列如 SEQ ID NO.1所示的重组质粒。
[0009]本专利技术的目的之四在于提供序列如SEQ ID NO.2所示的shSTAT3或序列如SEQ ID NO.3 所示的shPD
‑
L1在制备结直肠癌及相关实体肿瘤药物中的应用。
[0010]本专利技术的目的之五在于提供上述重组质粒在制备结直肠癌及相关实体肿瘤药物中的应用。
[0011]本专利技术的目的之六在于提供上述减毒沙门氏菌载体在制备结直肠癌及相关实体肿瘤药物中的应用。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0013](1)本专利技术在同一个表达载体中采用两个启动子分别表达两个shRNA，成功构建携带 shSTAT3/shPD
‑
L1重组质粒的减毒沙门氏菌载体；
[0014](2)shSTAT3/shPD
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L1重组质粒能够同时沉默结直肠癌细胞中STAT3、 PD
‑
L1的表达，从而引起细胞周期阻滞，抑制癌细胞增殖、迁移，促进细胞凋亡；
[0015](3)携带shSTAT3/shPD
‑
L1重组质粒的减毒沙门氏菌能够在肿瘤组织中特异性聚集，具有良好的肿瘤靶向性；
[0016](4)减毒沙门氏菌携带的shSTAT3/shPD
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L1重组质粒，能够通过抑制细胞增殖、促进凋亡及增加免疫细胞浸润等机制，明显抑制了C57BL/6N小鼠结直肠癌的生长，具有良好的抗肿瘤作用，成为一种有效的结直肠癌治疗新策略。
附图说明
[0017]图1为实施例1中的STAT3、PD
‑
L1的mRNA表达量化图。
[0018]图2为实施例1中的RT
‑
PCR、Western Blot检测CT26细胞STAT3、PD
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L1表达水平结果图，其中(A)为STAT3、PD
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L1的mRNA表达量化图；(B)为STAT3、PD
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L1的蛋白表达情况(C)STAT3、PD
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L1的蛋白表达量化图。
[0019]图3为实施例2中的CCK
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8实验检测细胞增殖结果图。
[0020]图4为实施例2中的克隆形成实验检测细胞增殖图，其中(A)为克隆形成实验结果图； (B)为克隆形成实验结果量化图。
[0021]图5为实施例2中的流式细胞术检测细胞凋亡比例图，其中(A)为流式细胞术检测细胞凋亡结果图；(B)为细胞凋亡结果量化图。
[0022]图6为实施例2中的Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达结果图，其中(A)为细胞凋亡相关蛋白结果图；(B)为Bcl
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2/Bax蛋白结果量化图；(C)Cleaved
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caspase3蛋白结果量化图。
[0023]图7为实施例2中的Transwell小室侵袭实验检测细胞迁移能力结果图，其中(A)为侵袭实验结果图；(B)为侵袭实验结果量化图。
[0024]图8为实施例2中的细胞划痕实验检测细胞迁移能力结果图，其中(A)为划痕实验结果图；(B)为划痕实验结果量化图。
[0025]图9为实施例2中的流式细胞术实验检测细胞周期结果图，其中(A)为流式细胞术实验检测细胞周期结果图；(B)为细胞周期结果量化图。
[0026]图10为实施例2中的流式细胞术检测细胞周期相关蛋白结果图，其中(A)为细胞周期相关蛋白结果图；(B)为细胞周期相关蛋白结果量化图。
[0027]图11为实施例3中的治疗期间小鼠肿瘤体积及体重变化图，其中(A)为治疗期间小鼠肿瘤体积变化图；(B)为治疗期间小鼠体重变化图。
[0028]图12为实施例3中的减毒沙门氏菌在小鼠体内的分布情况图。
[0029]图13为实施例3中的治疗结束后小鼠肿瘤重量结果图，其中(A)为治疗结束后收获小鼠肿瘤图；(B)为治疗结束后小鼠肿瘤重量量化图。
[0030]图14为实施例3中的肿瘤组织相关蛋白表达图，其中(A)为蛋白表达情况图；(B) 为蛋白表达量化图。
[0031]图15为实施例3中的小鼠主要脏器图。
[0032]图16为实施例3中的小鼠主要脏器H&E染色(Bar＝50μm)图。
[0033]图17为实施例3中的肿瘤组织H&E染色(Bar＝50μm)图。
[0034]图18为实施例3中的肿瘤STAT3、PD
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L1表达情况(Bar＝50μm)图。
[0035]图19为实施例3中的肿瘤增殖相关蛋白表达情况(Bar＝50μm)图。
[0036]图20为实施例3中的肿瘤凋亡相关蛋白表达情况(Bar＝50μm)图。
[0037]图21为实施例3中的肿瘤TUNEL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种短发夹RNA，其特征在于，所述短发夹RNA 为shSTAT3 或shPD
‑
L1，其中shSTAT3序列如SEQ ID NO.2 所示，shPD
‑
L1 序列如SEQ ID NO.3 所示。2.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒中含有权利要求1 中的shSTAT3 和shPD
‑
L1。3.根据权利要求2 中所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有PLKO.1 骨架。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：张灵，魏晓东，郭宝锋，戚凤春，
申请(专利权)人：吉林启众生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：