一种新型miRNA抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新型miRNA抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用，所述miRNA抑制物为miR

【技术实现步骤摘要】
一种新型miRNA抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学、细胞生物学以及干细胞培养与应用领域，尤其涉及一种新型miRNA抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用。

技术介绍

[0002]诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)是通过导入特定的转录因子使终末分化的体细胞恢复到全能性状态的一类细胞。iPSCs能够长期增殖并维持高度未分化转态，在体内可参与形成机体所有组织和器官；在体外可定向诱导分化出多种成熟细胞。病人可利用iPSCs技术用自身的体细胞制备专有的干细胞，大大降低免疫排斥反应发生的可能性。iPSCs具有供体的确切遗传背景和多能性，可用于精确的疾病建模、体外药物测试，运用iPSC/iPSC衍生干细胞建立疾病模型，将有助于进一步研究特定衰老相关疾病的致病机理和疾病发展，为筛选有效的治疗方法或手段提供良好的平台。
[0003]干细胞是再生医学的基础，间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是再生医学和组织工程领域的关键治疗工具之一。iPSC在体外可通过特定诱导条件分化成MSC，即人诱导性多能干细胞衍生间充质干细胞(iPSC
‑
MSC，iMSC)，而后通过体外培养方法扩增。然而，在体内或体外培养过程中，MSC会随着供体年龄增长和疾病状况而功能退化，并逐渐失去干性，限制其治疗应用。体外长期培养过程会诱发MSC复制性衰老，细胞形态由类似梭形趋于扁平，增殖能力降低，迁移能力下降，溶酶体密度增加，线粒体密度增加和膜电位发生改变。目前，如何有效延缓/逆转iMSCs在体外培养中的复制性衰老，仍是推进其建立疾病模型、研究疾病机理和构建筛选治疗方法平台中亟需解决的关键问题。
[0004]因此，现有技术还有待改进。

技术实现思路

[0005]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种新型miRNA抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用，通过在体外扩增培养iMSC体系中添加miR
‑
311的抑制物，有效缓和iMSC衰老表型，旨在解决目前iMSCs在体外培养中的复制性衰老问题。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]一种新型miRNA抑制物，其中，所述新型miRNA抑制物为miR
‑
311抑制物，所述miR
‑
311抑制物的核苷酸序列如SEQ.ID NO 1所示。
[0008]所述的新型miRNA抑制物，其中，所述miR
‑
311抑制物为化学合成。
[0009]一种如上任一所述的新型miRNA抑制物在体外缓解iMSC衰老中的应用，其中，所述iMSC为人诱导性多能干细胞衍生的间充质干细胞，所述应用为非诊断目的
[0010]所述的应用，其中，所述应用的方法为：在iMSC培养基中添加脂质体包裹的miR
‑
311抑制物。
[0011]所述的应用，其中，所述miR
‑
311抑制物的孵育浓度为100
‑
200nM。
[0012]所述的应用，其中，所述的缓解iMSC衰老包括：减少iMSC衰老相关标志蛋白的表
达，促进iMSC衰老后期的细胞增殖，改善iMSC衰老后期的线粒体膜电位状态，降低iMSC线粒体密度。
[0013]所述的应用，其中，所述衰老相关标志蛋白包括p21以及p16
INK4A
。
[0014]有益效果：本专利技术提供了一种新型miRNA抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用，所述miRNA抑制物为miR
‑
311抑制物，核苷酸序列为GAAUGACCUAACACCCCAC。本专利技术在体外扩增培养iMSC过程中，通过在iMSC培养基中添加脂质体包裹的miR
‑
311抑制物，缓解iMSC复制性衰老，包括来自携带基因突变的早老症病人iMSC的衰老。所述的缓解iMSC复制性衰老是指：减少了衰老相关标志蛋白(p21和p16
INK4A
)表达，促进了iMSC衰老后期的细胞增殖，改善了iMSC衰老后期的线粒体膜电位状态，降低了iMSC线粒体密度。最终，本专利技术中的miR
‑
311抑制物在iMSCs因体外扩增诱发衰老的应用中，有效缓和iMSC衰老表型，延缓iMSC衰老，可提高iMSCs的产量，有利于推动基于iMSCs的早老疾病模型建立、机理研究和个性化医疗应用。
附图说明
[0015]图1为本专利技术实施例1中iMSC衰老后期细胞衰老β
‑
半乳糖苷酶染色结果示意图。
[0016]图2为本专利技术实施例2中iMSC衰老后期胞内衰老相关蛋白表达量变化结果示意图。
[0017]图3为本专利技术实施例3中iMSC衰老后期细胞数量增长变化结果示意图。
[0018]图4为本专利技术实施例4中iMSC衰老早期和后期胞内线粒体膜电位状态示意图。
[0019]图5为本专利技术实施例5中iMSC衰老早期胞内线粒体密度变化结果示意图。
[0020]图6为本专利技术实施例5中iMSC衰老后期胞内线粒体密度变化结果示意图。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供一种新型miRNA的抑制物及其在体外缓解iMSC衰老中的应用，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0022]本专利技术实施例提供一种新型miRNA抑制物，所述新型miRNA抑制物为miR
‑
311抑制物，所述miR
‑
311抑制物的核苷酸序列如SEQ.ID NO 1所示：
[0023]SEQ.ID NO 1：GAAUGACCUAACACCCCAC
[0024]miRNA是一类约由22个核苷酸组成的特殊RNA，影响靶向mRNA的翻译和稳定性来调控转录后的基因表达，被视为基因调控的重要贡献者。miRNA是衰老相关基因表达的重要调控分子。大多数调控干细胞衰老的miRNA已在造血干细胞和间充质干细胞中被证明，通过靶向DNA损伤、表观遗传变化和代谢的相关基因。本专利技术实施例通过提供一种miRNA抑制物——miR
‑
311抑制物，加入体外培养的iMSC(iPSC
‑
MSC，多能诱导干细胞衍生的间充质干细胞)中，可以有效缓解iMSC复制性衰老，包括来自携带基因突变的早老症病人iMSC的衰老。
[0025]miRNA前体的标志性发夹结构，能够用来预测新的miRNA。miR
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311通过整合miRNA预测软件(miREvo和mirdeep2)分析前体序列中的二级结构及Dicer酶切位点信息、能量等特征预测而来的新miRNA。miR
‑
311抑制物是依据miR
‑
311序列信息设计合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型miRNA抑制物，其特征在于，所述新型miRNA抑制物为miR
‑
311抑制物，所述miR
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311抑制物的核苷酸序列如SEQ.ID NO 1所示。2.根据权利要求1所述的新型miRNA抑制物，其特征在于，所述miR
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311抑制物为化学合成。3.一种如权利要求1
‑
2任一所述的新型miRNA抑制物在体外缓解iMSC衰老中的应用，其特征在于，所述iMSC为人诱导性多能干细胞衍生的间充质干细胞，所述应用为非诊断目的。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：何良格，周光前，
申请(专利权)人：深圳阿贝细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：