一种白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法技术

本发明专利技术检测分析技术领域，具体涉及一种白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法，包括如下步骤：一、获取色谱及质谱数据信息；二、构建QSRR预测模型；三、根据所述色谱及质谱数据信息以及所述QSRR预测模型，对大曲样品中的醛酮类化合物进行分析；其中，所述步骤一包括：对大曲样品进行超声提取、衍生化以及利用UHPLC

【技术实现步骤摘要】
一种白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法


[0001]本专利技术属于检测分析
，具体涉及一种白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法。

技术介绍

[0002]酱香型白酒因其独特的口感和香气在世界范围内广受欢迎。大曲作为白酒生产过程中的重要糖化剂、发酵剂和生香剂，对白酒品质和风味的形成具有重要贡献。大曲中的代谢物成分复杂多样，其中醛基和羰基化合物广泛存在于大曲中，而醛基和羰基化合物与风味密切相关。因此，对大曲中醛基和羰基化合物进行高覆盖的检测与注释，有利于揭示白酒风味形成的原因，也可为制作高质量白酒提供数据支持和理论指导。
[0003]现已报道的基于LC
‑
HRMS的大曲中醛酮类化合物检测通常采用对代谢物提取液直接进行分析的方法，这种方法难以实现大曲中痕量醛酮类化合物的高覆盖分析。化学衍生化技术在提高化合物质谱响应上具有显著优势。已有多种衍生化试剂用于醛酮类化合物的衍生化，如ω
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溴丙酮基喹啉(BQB)、丹磺酰肼(DnsHz)和2
‑
(2
‑
肼基
‑2‑
氧代乙基)异喹啉
‑2‑
鎓溴化物(HIQB)等。但在大多数衍生化方法中待测样品是被一对轻/重同位素衍生化试剂分别标记，然后利用轻/重同位素产生的一对具有固定质量差、相似的保留时间以及相近的峰强度的色谱峰来筛选被衍生化的目标化合物，这种方法所采用的重同位素标记衍生化试剂昂贵且不易获得。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于提供一种基于2
‑
肼基
‑4‑
氯吡啶白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法。
[0005]针对现有技术公开的分析方法难以实现大曲中痕量醛酮类化合物的高覆盖分析或者所使用的衍生化试剂多为重同位素标记的衍生化试剂，价格较为昂贵且不易获得的问题，本专利技术提供了一种基于2
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肼基
‑4‑
氯吡啶衍生化的白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法，所采用的2
‑
肼基
‑4‑
氯吡啶由于其本身带有Cl原子，因此被衍生化的目标化合物会出现一对质量差为1.9971Da、保留时间相近、且强度比约为1：3的峰，因此样品无需被多次标记，而且无需昂贵的重同位素衍生化试剂。
[0006]一方面，本专利技术提供了一种白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法，包括如下步骤：
[0007]一、获取色谱及质谱数据信息；
[0008]二、构建QSRR预测模型；
[0009]三、根据所述色谱及质谱数据信息以及所述QSRR预测模型，对大曲样品中的醛酮类化合物进行分析；
[0010]其中，所述步骤一包括：对大曲样品进行超声提取、衍生化以及利用UHPLC
‑
HRMS联用技术采集大曲样品中醛酮类化合物的色谱及质谱数据信息；
[0011]所述衍生化反应的试剂包括：2
‑
肼基
‑4‑
氯吡啶，2
‑
肼基
‑3‑
氯吡啶，2
‑
肼基
‑5‑
氯吡啶，2
‑
肼基
‑6‑
氯吡啶中的至少一种。
[0012]相对于现有技术公开的使用的一些重同位素标记的衍生化试剂，本专利技术技术方案所选择的衍生化试剂自身含有Cl原子，在筛选被标记的醛酮类化合物时，可以利用氯元素的同位素分布特征，即前体离子的质量差为1.9971Da，保留时间差值不大于0.1min，强度比在0.3
‑
0.4范围内的离子峰对，筛选出潜在的醛酮类化合物，即本专利技术所提供的技术方案能在不用很贵的重同位素衍生化试剂的情况下实现高覆盖筛选被衍生化的醛酮类化合物。
[0013]在一些实施方案中，所述超声提取包括如下步骤：
[0014]在大曲样品中加入提取试剂后放入超声仪中进行冰水浴超声提取；其中，所述提取试剂为100％的乙腈。
[0015]在一些实施方案中，以mg/μL计，所述大曲样品与提取试剂的添加比例为：1:5～1:10；优选地，所述大曲样品与提取试剂的添加比例为：1:5～1:7；优选地，所述大曲样品与提取试剂的添加比例为：1:5～1:6；优选地，所述大曲样品与提取试剂的添加比例为：1:5.1～1:5.5。
[0016]在一些实施方案中，以mg/min计，所述大曲样品的重量与超声提取的时间的比值为：3:1～1:2：优选地，所述大曲样品的重量与超声提取的时间的比值为：3:1～2:1；优选地，所述大曲样品的重量与超声提取的时间的比值为：2.8:1。
[0017]在一些实施方案中，所述超声提取的时间为10min
‑
60min；优选地，所述超声提取的时间为10min
‑
20min。
[0018]在一些实施方案中，所述超声提取条件通过如下步骤进行确定：
[0019]1)在Design Expetr 12软件中分别输入大曲质量、提取溶剂中乙腈的体积占比以及超声提取时间的取值范围，根据软件给出的不同冰水浴超声提取条件的实验方案对大曲样品分别进行冰水浴超声提取，而后进行衍生化；
[0020]2)利用UHPLC
‑
HRMS采集步骤1)衍生化后的大曲样品中醛酮类化合物的色谱及质谱数据信息；
[0021]3)基于采集到的所述色谱及质谱数据信息筛选出潜在醛酮类化合物；
[0022]4)基于不同的超声提取条件下所得到的潜在醛酮类化合物个数之间的关系建立RSM模型，并生成3D曲线图，利用得到的模型以及3D曲线图确定最佳的提取条件。
[0023]在一些实施方案中，所述色谱及质谱数据信息包括：t
R
、M/Z和MS/MS。
[0024]在一些实施方案中，所述步骤3)中，筛选潜在醛酮类化合物包括：筛选出每个超声提取条件下质量差为1.9971Da
±
10ppm、t
R
差值不大于0.1min、强度比在0.3
‑
0.4范围内的化合物，即得到所述的潜在醛酮类化合物。
[0025]在一些实施方案中，所述衍生化包括如下步骤：
[0026]将超声提取后的大曲样品离心后，取上清液；向得到的所述上清液中加入衍生化反应的试剂进行衍生化反应。
[0027]在一些实施方案中，所述衍生化反应的试剂与乙腈、盐酸的添加体积比为：14
‑
16:13
‑
15:1
‑
6；优选地，所述衍生化反应的试剂与乙腈、盐酸的添加体积比为：14
‑
16:13
‑
15:1
‑
3；优选地，所述衍生化反应的试剂与乙腈、盐酸的添加体积比为：15:14:1。
[0028]在一些实施方案中，所述衍生化反应的温度为：40℃～80℃；所述衍生化反应的时
间为：30～120m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白酒大曲中醛酮类化合物的高覆盖分析方法，其特征在于，包括如下步骤：一、获取色谱及质谱数据信息；二、构建QSRR预测模型；三、根据所述色谱及质谱数据信息以及所述QSRR预测模型，对大曲样品中的醛酮类化合物进行分析；其中，所述步骤一包括：对大曲样品进行超声提取、衍生化以及利用UHPLC
‑
HRMS联用技术采集大曲样品中醛酮类化合物的色谱及质谱数据信息；所述衍生化反应的试剂包括：2
‑
肼基
‑4‑
氯吡啶，2
‑
肼基
‑3‑
氯吡啶，2
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肼基
‑5‑
氯吡啶，2
‑
肼基
‑6‑
氯吡啶中的至少一种。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声提取包括如下步骤：在大曲样品中加入提取试剂后放入超声仪中进行冰水浴超声提取；其中，所述提取试剂为乙腈；优选地，所述提取试剂为100％的乙腈；优选地，以mg/μL计，所述大曲样品与提取试剂的添加比例为：1:5～1:10；优选地，所述大曲样品与提取试剂的添加比例为：1:5～1:6；优选地，以mg/min计，所述大曲样品的重量与超声提取的时间的比值为：3:1～1:2：优选地，所述大曲样品的重量与超声提取的时间的比值为：3:1～2:1；优选地，所述超声提取的时间为10min
‑
60min；优选地，所述超声提取的时间为10min
‑
20min。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声提取条件通过如下步骤进行确定：1)在Design Expetr 12软件中分别输入大曲质量、提取溶剂中乙腈的体积占比以及超声提取时间的取值范围，根据软件给出的不同冰水浴超声提取条件的实验方案对大曲样品分别进行冰水浴超声提取，而后进行衍生化；2)利用UHPLC
‑
HRMS采集步骤1)衍生化后的大曲样品中醛酮类化合物的色谱及质谱数据信息；3)基于采集到的所述色谱及质谱数据信息筛选出潜在醛酮类化合物；4)基于不同的超声提取条件下所得到的潜在醛酮类化合物个数之间的关系建立RSM模型，并生成3D曲线图，利用得到的模型以及3D曲线图确定最佳的提取条件；优选地，所述色谱及质谱数据信息包括：t
R
、M/Z和MS/MS；优选地，所述步骤3)中，筛选潜在醛酮类化合物包括：筛选出每个超声提取条件下质量差为1.9971Da
±
10ppm、t
R
差值不大于0.1min、强度比在0.3
‑
0.4范围内的化合物，即得到所述的潜在醛酮类化合物。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化包括如下步骤：将超声提取后的大曲样品离心后，取上清液；向得到的所述上清液中加入衍生化反应的试剂进行衍生化反应；优选地，所述衍生化反应的试剂与乙腈、盐酸的添加体积比为：14
‑
16:13
‑
15:1
‑
3；优选地，所述衍生化反应的温度为：60℃～80℃；所述衍生化反应的时间为：60～90min。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用UHPLC
‑
HRMS采集衍生化后大曲样品中醛酮类化合物的色谱及质谱数据信息包括如下步骤：
将衍生化反应结束后的大曲样品进行冷冻干燥，复溶；将复溶后的样品离心后取上清液通过UHPLC
‑
HRMS进行分析，采集衍生化后大曲样品中醛酮类化合物的色谱及质谱数据信息；所述色谱及质谱数据信息包括：t
R
、M/Z以及MS/MS；优选地，所述UHPLC
‑
HRMS为：Agilent 1290Infinity液相色谱系统和Agilent 6546Q
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ToF联用的分析仪器；优选地，所述UHPLC
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HRMS的液相色谱条件为：A相和B相分别为0.1％的甲酸/水和0.1％的甲酸/乙腈；色谱柱为ACQUITY BEH C8色谱柱(100mm
×
2.1mm,1.7μm,Waters,Milford,MA,U.S.A.)；色谱柱温度为50℃；柱流速为0.35mL/min；样品进样室温度设置为4℃,样品进样体积为1μL；洗脱梯度程序为：0
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1min，5％B；1
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24min，5％
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100％B；24
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28min，100％B；28
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28.1min，100％
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5％B；28.1
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30min，5％B；优选地，所述UHPLC
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HRMS的质谱条件为：扫描模式为正离子模式，在全扫描模式中，扫描范围为100
‑
1000Da，干燥气体流速和温度分别为8L/min和320℃；喷雾器压力为35psig；鞘气温度和流速分别为350℃和11L/min；Vcap为3000V，碎裂电压为110V；二级扫描范围为30
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【专利技术属性】
技术研发人员：卢建军，胡阳，艾梅，王莉，杨帆，许国旺，陈良强，吕锡斌，谢小玉，陈田田，胡春秀，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：