一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法技术

本发明专利技术涉及一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法，所述分析方法为气相色谱法，采用甾醇系列产品为内标物，用SH

【技术实现步骤摘要】
一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法


[0001]本专利技术属于气相分析检测
，具体涉及一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法。

技术介绍

[0002]芸苔素内酯在高等植物中是普遍存在的，在双子叶植物(油菜、白菜、栗、茶、扁豆、菜豆、蚊母树、牵牛花)、单子叶植物(香蒲、玉米、水稻)、裸子植物(黑松、云杉)中均有存在。但是含量极低，因此目前市场上的产品都是以人工合成的芸苔素内酯为原药。植物的不同器官如根、茎、叶、花粉、雌蕊、果实和种子等都含有芸苔素内酯，其中花粉和未成熟的种子内芸苔素内酯含量为最高(1～100毫微克/克鲜重)，茎、叶组织通常含芸苔素内酯0.01～0.1微克/克鲜重。
[0003]芸苔素内酯被称为第六代植物生长调节剂，是一种植物内源性的生长调节剂，通过抑制植物中的氧化酶的活性，增加植物的呼吸，调节植物的生长平衡，它的存在可影响和有效调控植物的生长和发育，包括从细胞生长、分裂，到生根、发芽、开花、结实、成熟和脱落等一系列植物生命全过程，在各种作物生长的各个阶段均可使用，使用安全无副作用对作物的整个生长发育过程起作用(根、茎、叶、花、果实、种子)。芸苔素内酯能有效调节作物的生育过程，达到稳产增产、改善品质、增强作物抗逆性等目的。
[0004]芸苔素内酯在中国的推广已经有20多年时间，得到了广泛的认可。目前的24
‑
表芸苔素内酯的合成方法大部分是在McMorris(McMorris,T.C.；J.Org,Chem.1993,58,2338)报道的文献的基础上进行改进的。但是在芸苔内酯的合成过程中，中间体麦角甾
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2，22
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二烯
‑6‑
酮几乎没有紫外吸收，用紫外检测器和DAD检测器都没有吸收峰，用蒸发光检测器在定量检测时重现性差，导致生产过程无法准确的判断反应的进程，也无法判断该中间体的准确含量，在芸苔素内酯生产过程中出现盲目性。如中国专利CN112552365A公开了一种(22E,24R)
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5α
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麦角甾
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2,22
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二烯
‑6‑
酮的改进制备方法，其对改进方法获得的化合物(22E,24R)
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5α
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麦角甾
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2,22
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二烯
‑6‑
酮以HPLC，采用UV检测器进行检测，但该检测方法仅对于三种化合物的检测，对于芸苔素内酯合成过程中出现的多个化合物检测灵敏度和分离度低，无法达到检测要求，另外，该化合物(22E,24R)
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5α
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麦角甾
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2,22
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二烯
‑6‑
酮没有共轭双键，也没有杂原子电子共轭，全波段扫描特征吸收峰极其微弱，难以实现定量分析和鉴定。
[0005]综上所述，基于目前现有技术中缺乏对芸苔素内酯类化合物合成中间体采用不同的检测手段难以达到准确的定量分析方法，无法实现对芸苔素内酯合成过程中做到定量的控制、因此，开发一种有效、方便快捷的定量和定性检测方法对芸苔素内酯类化合物的生产过程能起到清晰的判断和指导作用。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法，该方法可适用于芸苔素内酯合成中间体的定量和定性分析检测，以
及对含有芸苔素内酯或芸苔素内酯合成中间体的植物生长调节剂的成分分析。
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法，所述分析方法使用气相色谱法，所述气相色谱条件为：
[0008]进样口温度为200℃
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280℃；
[0009]检测器温度为200℃
‑
280℃；
[0010]载气为氮气；
[0011]柱流速为1mL/min
‑
2.5mL/min；
[0012]分流比为(15
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25):1；
[0013]氢气流速为25mL/min
‑
35mL/min；
[0014]空气流速为250mL/min
‑
350mL/min；
[0015]尾吹气流速为20mL/min
‑
50mL/min。
[0016]优选地，所述色谱分析条件为：
[0017]进样口温度为280℃；
[0018]检测器温度为280℃；
[0019]载气为氮气；
[0020]柱流速为2.5mL/min；
[0021]分流比为20:1；
[0022]氢气流速为30mL/min；
[0023]空气流速为300mL/min；
[0024]尾吹气流速为50mL/min。
[0025]进一步地，所述气相色谱条件中升温程序为：
[0026]起始温度150℃
‑
200℃，保持1min
‑
5min，随后以10℃/min
‑
20℃/min的升温速率升至230℃
‑
300℃，保持10min
‑
20min。
[0027]优选地，所述色谱分析条件中升温程序为：
[0028]起始温度200℃，保持1min，随后以10℃/min的升温速率升至280℃，保持13min。
[0029]进一步地，本专利技术所述分析方法还包括以下气相色谱进样前的处理步骤：
[0030]S1、内标液的配制
[0031]准确称取内标物，溶于稀释液中，定容，混匀，制备得到浓度为0.1～10mg/ml的内标物溶液，备用；
[0032]S2、标准样液的配制
[0033]准确称取芸苔素内酯类化合物合成中间体标准样，置于容量瓶中，用移液管准确吸取定量步骤S1的内标液进行溶解，制备得到浓度为0.1～10mg/ml的标准样液，待标准样液冷却后，注入1ul标准样液于设定好色谱分析条件的气相色谱仪中进行分析。
[0034]更进一步地，本专利技术还提供了所述分析方法的结果分析，具体包括如下方法：
[0035](1)校正系数f的计算
[0036]校正系数f的计算公式如式(1)所示：
[0037][0038]式中：A
S
为内标物的峰面积；W
B
为标准物的质量，mg；A
B
为标准物的峰面积；W
S
为内标物的质量，mg；C为标准物的质量分数，％；
[0039](2)芸苔素内酯合成过程中间体试样含量的测定
[0040]芸苔素内酯合成过程中间体试样含量计算公式如式(2)所示：
[0041][0042]式中：A
甾
为试样中芸苔素内酯合成过程中间体的峰面积；A
s...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法，其特征在于，所述分析方法使用气相色谱法，所述气相色谱条件为：进样口温度为200℃
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280℃；检测器温度为200℃
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280℃；载气为氮气；柱流速为1mL/min
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2.5mL/min；分流比为(15
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25):1；氢气流速为25mL/min
‑
35mL/min；空气流速为250mL/min
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350mL/min；尾吹气流速为20mL/min
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50mL/min。2.根据权利要求1所述的芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法，其特征在于，所述气相色谱条件中升温程序为：起始温度150℃
‑
200℃，保持1min
‑
5min，随后以10℃/min
‑
20℃/min的升温速率升至230℃
‑
300℃，保持10min
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20min。3.根据权利要求1所述的芸苔素内酯类化合物合成过程中间体的定量分析方法，其特征在于，所述分析方法还包括以下气相色谱进样前的处理步骤：S1、内标液的配制准确称取内标物，溶于稀释液中，定容，混匀，制备得到浓度为0.1～10mg/ml的内标物溶液，备用；S2、标准样液的配制准确称取芸苔素内酯类化合物合成中间体标准样，置于容量瓶中，用移液管准确吸取定量步骤S1的内标液进行溶解，制备得...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄刚，叶志励，张才军，王玉宝，赖日阳，
申请(专利权)人：广东五洲药业有限公司，
类型：发明
国别省市：