表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法技术

本发明专利技术公开了表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法。表达载体过表达CCL17，淋巴瘤细胞包含过表达CCL17的表达载体，利用过表达CCL17的淋巴瘤细胞植入小鼠体内构建得到了小鼠淋巴瘤模型。并采用流式分析方法进行流式染色分析和RNA层面分析，结果表明构建的小鼠淋巴瘤模型显示肿瘤部位NK细胞增多，CCL17趋化NK细胞至肿瘤部位发挥肿瘤杀伤作用。伤作用。伤作用。

【技术实现步骤摘要】
表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法


[0001]本申请属于医药生物工程
，具体涉及表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法。

技术介绍

[0002]霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)是一种少见的起源于B淋巴细胞的肿瘤，其特点是肿瘤微环境中霍奇金细胞和Hodgkin Reed
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Stemberg(HRS)细胞少，抑制性免疫细胞丰富。HRS是经典型的霍奇金淋巴瘤(cHL)中唯一且罕见的始发恶性细胞，只占1～2％，但形成了一个独特的强大的免疫抑制微环境。然而，驱动这种独特的HL微环境形成的关键因素仍不清楚。通过探索CCL17/22
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CCR4轴的具体作用可以为了解HL微环境的形成机制及探索新的治疗措施奠定基础。
[0003]趋化因子作为一类小分子细胞因子/信号蛋白家族，可介导细胞独特的趋化作用。许多类型的肿瘤细胞具有独特的趋化因子表达谱，其中HL的HRS细胞特异性表达CCR4的配体CCL17(TARC)和CCL22(MDC)。已有研究表明CCL17的高水平表达在cHL中是特异性的，因为它在结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)或非霍奇金淋巴瘤(NHL)中不表达。CCL22在HRS细胞中表达水平相对较低，可存在于NLPHL和其他B细胞型NHL，特异性较差。而CCR4在HL微环境中的主要细胞群，如M2巨噬细胞、CD24+常规树突状细胞(cDC)、调节性T细胞(Treg)、CTLA4+CD274+CD4+功能障碍T细胞亚群中高表达。CCL17/22通过与CCR4受体结合，招募CCR4+细胞至肿瘤微环境中。同时这些CCR4+细胞类型还能旺盛地产生CCL17和/或CCL22，可能存在正反馈环路导致独特的HL微环境的演变。
[0004]大部分的霍奇金淋巴瘤患者通过规范化疗可以达到完全缓解，治愈率达到90％以上，但仍有20％
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30％的患者会出现复发和/或对治疗无反应，这是需要探索解决的问题。同时在cHL患者中，血清CCL17和CCL22水平升高，与更高的疾病阶段、B
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症状、庞大的肿瘤体积及治疗反应相关，可能成为预测治疗反应，及时调整治疗方案的有力预测标志物。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，一方面，一些实施例公开了表达载体，该表达载体过表达CCL17。
[0006]一些实施例公开的表达载体，将CCL17的cDNA序列过表达于慢病毒载体，得到表达载体。
[0007]一些实施例公开的表达载体，该表达载体表达CCL17、mcherry和嘌呤毒素抗性基因。
[0008]另一方面，一些实施例公开了淋巴瘤细胞，该淋巴瘤细胞包含过表达CCL17的表达载体。
[0009]一些实施例公开的淋巴瘤细胞，将过表达CCL17的表达载体稳定整合到淋巴瘤细胞中，得到稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞。
[0010]一些实施例公开的淋巴瘤细胞，将表达载体稳定整合到淋巴瘤细胞中的方法包括
同源重组、CRISPA/Cas9、TALEN、转染或病毒感染中的任意一种组合。
[0011]再一方面，一些实施例公开了小鼠淋巴瘤模型，包含稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞。
[0012]又一方面，一些实施例公开了小鼠淋巴瘤模型的构建方法，将过表达CCL17的淋巴瘤细胞植入小鼠体内，得到小鼠淋巴瘤模型。
[0013]一些实施例公开的小鼠淋巴瘤模型的构建方法，将淋巴瘤细胞植入小鼠腹股沟皮下，得到小鼠淋巴瘤模型。
[0014]一些实施例公开的小鼠淋巴瘤模型的构建方法，小鼠为经过辐照破坏免疫的6W龄裸鼠。
[0015]本专利技术实施例将CCL17过表达于慢病毒载体，得到过表达CCL17的表达载体，并将过表达CCL17的表达载体引入淋巴瘤细胞中，成功构建了稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞，并将稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞植入小鼠体内构建了小鼠淋巴瘤模型，并采用流式分析方法进行流式染色分析和RNA层面分析，结果表明构建的小鼠淋巴瘤模型显示肿瘤部位NK细胞增多，CCL17趋化NK细胞至肿瘤部位发挥肿瘤杀伤作用。
附图说明
[0016]图1插入CCL17基因的表达系统示意图；
[0017]图2经过嘌呤霉素抗性筛选得到的CCL17
‑
A20细胞；
[0018]图3经过嘌呤霉素抗性筛选后CCL17的表达水平；
[0019]图4小鼠淋巴瘤模型构建时间轴示意图；
[0020]图5小鼠淋巴瘤模型肿瘤大小变化曲线；
[0021]图6小鼠淋巴瘤模型肿瘤大小示意图；
[0022]图7肿瘤组织CCL17和CCR4表达水平；
[0023]图8肿瘤组织的流式分选策略；
[0024]图9肿瘤组织中NK细胞所占比例。
具体实施方式
[0025]在这里专用的词“实施例”，作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。本申请实施例中性能指标测试，除非特别说明，采用本领域常规试验方法。应理解，本申请中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本申请公开的内容。
[0026]除非另有说明，否则本文使用的技术和科学术语具有本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义；作为本申请中其它未特别注明的试验方法和技术手段均指本领域内普通技术人员通常采用的实验方法和技术手段。所用试剂或仪器均为本领域常规技术手段能够获得的常规产品。
[0027]本文所用的术语“基本”和“大约”用于描述小的波动。例如，它们可以是指小于或等于
±
5％，如小于或等于
±
2％，如小于或等于
±
1％，如小于或等于
±
0.5％，如小于或等于
±
0.2％，如小于或等于
±
0.1％，如小于或等于
±
0.05％。在本文中以范围格式表示或呈现的数值数据，仅为方便和简要起见使用，因此应灵活解释为不仅包括作为该范围的界限
明确列举的数值，还包括该范围内包含的所有独立的数值或子范围。例如，“1～5％”的数值范围应被解释为不仅包括1％至5％的明确列举的值，还包括在所示范围内的独立值和子范围。因此，在这一数值范围中包括独立值，如2％、3.5％和4％，和子范围，如1％～3％、2％～4％和3％～5％等。这一原理同样适用于仅列举一个数值的范围。此外，无论该范围的宽度或所述特征如何，这样的解释都适用。
[0028]在本文中，包括权利要求书中，连接词，如“包含”、“包括”、“带有”、“具有”、“含有”、“涉及”、“容纳”等被理解为是开放性的，即是指“包括但不限于”。只有连接词“由
……
构成”和“由
……
组成”是封闭连接词。
[0029]为了更好的说明本申请内容，在下文的具体实施例中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本申请本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.表达载体，其特征在于，所述表达载体过表达CCL17。2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，将CCL17的cDNA序列过表达于慢病毒载体，得到过表达CCL17的表达载体。3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体表达CCL17、mcherry和嘌呤毒素抗性基因。4.淋巴瘤细胞，其特征在于，包含权利要求1
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3任一项所述的过表达CCL17的表达载体。5.根据权利要求4所述的淋巴瘤细胞，其特征在于，将所述表达载体稳定整合到淋巴瘤细胞中，得到稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞。6.根据权利要求4所述的淋巴瘤细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜中兴，郭荣群，赵航，李亚丹，谢新生，李英梅，刘柳，桑丽娜，樊文娟，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：