无乙醇洗脱方法及其在建库测序中的应用技术

本申请提出了一种无乙醇洗脱的方法及应用，涉及基因测序技术领域，该方法包括：提供磁珠

【技术实现步骤摘要】
无乙醇洗脱方法及其在建库测序中的应用


[0001]本申请涉及基因测序
，具体涉及一种无乙醇洗脱方法及其在建库测序中的应用。

技术介绍

[0002]目前，随着测序技术的发展，基因测序成为生命科学研究中的重要手段。同时，随着测序通量的不断提升以及应用场景的不断扩大，对高通量、自动化的建库技术的需求量日益增加。
[0003]相关技术中，建库一般包括核酸片段化、末端修复、接头连接、PCR扩增、环化和消化等步骤，其中普遍使用磁珠对各个步骤的产物进行纯化，如对片段化产物、接头连接产物、PCR扩增产物和消化产物等进行纯化，这些纯化步骤中的每一次纯化都需要使用乙醇对磁珠与待纯化产物的结合物进行多次洗涤，以确保纯化效果。然而，多次的乙醇洗涤增加了建库总时长，并且乙醇的添加和洗涤均需要用户手工进行操作，导致实验操作复杂、费时费力，且无法实现“全程自动化，无手工处理”的要求。
[0004]由此，亟待开发一种步骤简单、无需手工操作的流程化高效建库方法。

技术实现思路

[0005]本申请至少从以下方面解决了相关技术的问题之一。
[0006]为此，本申请第一方面实施例提供了一种无乙醇洗脱的方法，包括：提供磁珠
‑
待洗脱样品的结合物；和将洗脱液与所述结合物接触，以洗脱所述样品，其中，所述洗脱中不使用乙醇。
[0007]在一些实施例中，所述样品为核酸或蛋白。在一些实施例中，所述样品为DNA和/或RNA。
[0008]在一些实施例中，所述洗脱液选自单蒸水、双蒸水、无核酶水(NF
‑
free water)、Tris
‑
HCl缓冲液、TE缓冲液、AE缓冲液或其组合。
[0009]本申请第二方面实施例还提供了一种无乙醇建库的方法，包括：使用如上述第一方面任一实施例所述的无乙醇洗脱的方法进行以下中的至少一个：样品片段化产物纯化、接头连接产物纯化、PCR产物纯化和消化产物纯化。
[0010]在一些实施例中，所述样品片段化产物纯化具体包括：将所述样品片段化，以获得样品片段化产物；将磁珠与所述样品片段化产物接触，以获得磁珠
‑
样品片段化产物；和使用洗脱液将所述样品片段化产物洗脱，以获得纯化后的样品片段化产物，其中，所述洗脱中不使用乙醇。
[0011]在一些实施例中，使用酶切和/或超声将所述样品片段化。
[0012]在一些实施例中，所述无乙醇建库的方法还包括：将所述样品片段化，以获得样品片段化产物；将磁珠与所述样品片段化产物接触，以筛选出具有期望片段长度的样品片段化产物，其中所述具有期望片段长度的样品片段化产物与所述磁珠特异性结合；和使用洗
脱液将所述具有期望片段长度的样品片段化产物从所述磁珠上洗脱，以获得筛选后的样品片段化产物，其中，所述洗脱中不使用乙醇。
[0013]在一些实施例中，使用酶切和/或超声将所述样品片段化。
[0014]在一些实施例中，所述期望片段长度为100
‑
700bp。在一些实施例中，所述期望片段长度为250
‑
375bp。在一些实施例中，所述期望片段长度为300
‑
350bp。在一些实施例中，所述期望片段长度为350bp。
[0015]在一些实施例中，在所述接头连接后、所述接头连接产物纯化前，所述无乙醇建库的方法还包括：向所述接头连接产物中加入稀释液。
[0016]在一些实施例中，所述稀释液选自单蒸水、双蒸水、无核酶水、Tris
‑
HCl缓冲液、TE缓冲液、AE缓冲液或其组合。
[0017]在一些实施例中，所述接头连接产物纯化包括两次基于磁珠
‑
接头连接产物结合物的洗脱。
[0018]在一些实施例中，所述无乙醇建库的方法还包括环化，其中在所述环化后、所述消化产物纯化前，所述方法还包括：使用消化酶处理所述环化产物以获得所述消化产物。在一些实施例中，所述消化酶为核酸外切酶III。
[0019]本申请第三方面实施例提出了如上述第一方面任一实施例所述的无乙醇洗脱的方法或如上述第二方面任一实施例所述的无乙醇建库的方法在测序中的应用。
[0020]本申请第四方面实施例提出了一种自动化无乙醇建库试剂盒，包括：建库试剂板；接头试剂板；和磁珠试剂板，其中，所述建库试剂板包含建库试剂，所述建库试剂包含：样品片段化试剂、接头连接试剂、PCR反应试剂。
[0021]在一些实施例中，所述建库试剂板还包含环化试剂和消化试剂。
[0022]在一些实施例中，所述接头试剂板包含接头；所述磁珠试剂板包含磁珠、洗脱液和可选地稀释液，并且其中所述磁珠试剂板中不包含乙醇。
[0023]本申请的实施例实现了如下有益效果：
[0024]本申请实施例中提出的无乙醇洗脱方法以及建库方法，在各个基于磁珠进行的纯化步骤中省去了乙醇洗涤的步骤，有效减少了操作时间并简化了操作步骤，并且能够保证建库质量和后续测序的数据稳定性。进一步地，基于本申请实施例中的无乙醇建库方法提出的建库试剂盒，在使用过程中各个步骤的纯化也无需人工添加乙醇进行洗涤，因此实现了流程的全自动化，并大大简化了实验步骤，有效节约了人力和时间成本。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1为根据本申请实施例的无乙醇洗脱方法的示意图；
[0027]图2为根据本申请实施例的无乙醇建库方法示意图；
[0028]图3为根据本申请实施例的自动化无乙醇建库试剂盒的展示图。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，并非限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0030]本申请是基于专利技术人的以下认识做出的：
[0031]在相关技术中，利用磁珠进行样品纯化的方案一般为：(1)在样品中加入磁珠结合液，该磁珠结合液中包含结合buffer以及磁珠；(2)使样品和磁珠结合液进行一定时间的充分接触，以基于与磁珠的结合进行样品纯化；(3)将结合后的混合液置于磁力装置中，待固体的磁珠在磁力的作用下与液体分离后丢弃液体；(4)在磁珠中加入新鲜乙醇溶液以洗涤磁珠；(5)将洗涤后的体系置于磁力装置中，待固体的磁珠在磁力的作用下与液体分离后丢弃液体；(6)重复一次步骤(4)和步骤(5)；(7)在磁珠中加入洗脱液；(8)待样品和洗脱液进行充分结合；(9)取出含纯化后样品的洗脱液。
[0032]然而，在上述纯化过程中，需要使用乙醇对磁珠进行多次洗涤，由此增加了实验操作时长；而洗涤磁珠往往要求使用新鲜乙醇溶液，即在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无乙醇洗脱的方法，其特征在于，包括：提供磁珠
‑
待洗脱样品的结合物；和将洗脱液与所述结合物接触，以洗脱所述样品，其中，所述洗脱中不使用乙醇。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品为核酸或蛋白，可选地，所述样品为DNA和/或RNA。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述洗脱液选自单蒸水、双蒸水、无核酶水(NF
‑
free water)、Tris
‑
HCl缓冲液、TE缓冲液、AE缓冲液或其组合。4.一种无乙醇建库的方法，其特征在于，包括：使用如权利要求1
‑
3中任一项所述的无乙醇洗脱的方法进行以下中的至少一个：样品片段化产物纯化、接头连接产物纯化、PCR产物纯化和消化产物纯化。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述样品片段化产物纯化具体包括：将所述样品片段化，以获得样品片段化产物；将磁珠与所述样品片段化产物接触，以获得磁珠
‑
样品片段化产物；和使用洗脱液将所述样品片段化产物洗脱，以获得纯化后的样品片段化产物，其中，所述洗脱中不使用乙醇，可选地，使用酶切和/或超声将所述样品片段化。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：将所述样品片段化，以获得样品片段化产物；将磁珠与所述样品片段化产物接触，以筛选出具有期望片段长度的样品片段化产物，其中所述具有期望片段长度的样品片段化产物与所述磁珠特异性结合；和使用洗脱液将所述具有期望片段长度的样品片段化产物从所述磁珠上洗脱，以...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅书锦，席阳，赵霞，胡豆，
申请(专利权)人：深圳华大智造科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：