免疫原性降低的新型移植细胞制造技术

本发明专利技术涉及一种用于抑制哺乳动物细胞免疫原性的组合物，以及使用该组合物产生低免疫原性哺乳动物细胞的方法。本发明专利技术涉及为治疗目的进行异体移植的细胞，例如干细胞或免疫细胞，所述细胞可有效地用作有效的细胞治疗试剂，其在受体体内具有最小化的免疫排斥与长期维持的活性。维持的活性。维持的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性降低的新型移植细胞


[0001]本专利技术涉及一种通过基因编辑获得的用于细胞治疗的新型组合物，其具有用于高效异体移植的抑制的免疫原性。

技术介绍

[0002]自然杀伤(NK)细胞是淋巴细胞，约占血细胞的10％，在免疫应答中起着重要作用。NK细胞具有多种功能，特别是能够杀死癌细胞或感染外源性病原体的细胞，从而消除可能受损的异常细胞。
[0003]大多数NK细胞在体内通常以失活状态存在，但需要激活的NK细胞才能用于治疗，因此激活来源于正常血液或病人血液中的NK细胞的研究正在积极开展。研究发现，当NK细胞在体外被激活时，NK细胞表现出较高的细胞毒性，因此可用于免疫细胞治疗。此外，研究发现，当通过异体骨髓移植，将体外激活的NK细胞施用于各种癌症患者，特别是白血病等血癌患者时，它们可产生治疗效果(《血细胞分子&疾病(Blood Cells Molecules&Disease)》，33：p261
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266，2004)。
[0004]同时，目前使用NK细胞的抗癌免疫治疗主要集中在NK细胞抑制性受体上，即，其旨在通过阻断抑制NK细胞活性的抑制受体的功能来提高NK细胞的活性。为此，主要使用利用来自与受体主要组织相容性复合体(MHC)不匹配的供体的异体NK细胞或用抗体阻断抑制性受体功能的方法。由于供体和受体的MHC I类基因型不同，供体NK细胞的抑制性受体(如KIR)不识别受体的MHC I类，因此异体NK细胞的活性没有受到抑制。因此，预计异体NK细胞可能不受可能仍然存在于癌细胞中的MHC I类活性的抑制，因此，它们可能比不能免受MHC I类活性抑制的患者自身的NK细胞更有效地表现出抗癌活性。事实上，异体NK细胞在抗癌治疗方面有很多优势，其最早是在异体造血干细胞移植(HSCT)对血液肿瘤患者的有效治疗中发现的。其他的研究表明，在异体造血干细胞移植中，移植物抗白血病(GVL)反应的很大一部分是由于NK细胞。基于这一事实，许多人尝试将NK细胞给药给癌症患者，这些NK细胞通过体外培养和激活大量从健康供体中分离和纯化的异体NK细胞来获得，这些NK细胞对急性髓系白血病(AML)、多发性髓瘤(MM)等表现出有效的抗癌活性。然而，据报道，完全不匹配的MHC I类异体造血干细胞移植在许多情况下，在一些患者中并没有表现出预期的抗癌活性，并且存在严重的副作用，如“调理疗法”中包含的免疫抑制剂引起的感染。此外，就NK细胞而言，最近的研究表明，在NK细胞分化过程中，抑制性受体与靶细胞MHC I类之间的相互作用(“教导”或“许可过程”)是获得足够的抗癌活性所必需的。因此，预计供体的MHC I类与受体的MHC I类在一定程度上匹配，才能获得具有足够抗癌活性的成熟NK细胞。因此，由于这种影响，目前许多尝试使用与不同MHC I类基因型和NK细胞相匹配的单倍体相合造血干细胞移植治疗血液肿瘤，并发现由此产生的临床预后相对较好。此外，当异体免疫细胞被用作细胞治疗产品时，不可避免地会产生攻击受体自身细胞的移植物抗宿主病(GVHD)等副作用，而在异体NK细胞的情况下，这一问题鲜有报道。据了解，与癌细胞不同，正常细胞几乎不表达NK细胞激活受体的配体，因此不诱导NK细胞激活。目前，除血癌外，将异体NK细胞作为其
他实体瘤的细胞治疗产品的研究正在积极开展(Kim,HS，《汉阳医学评论(Hanyang Med Rev)》，33：59
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64，2013)。
[0005]异体NK细胞移植的另一个问题是移植的NK细胞不能在受体体内长时间存活。为了克服这一问题，尝试了在移植后定期添加能够诱导NK细胞增殖的细胞因子IL
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2的方法。然而，IL
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2会成为一个大问题，因为除了NK细胞外，它可以扩大抑制抗癌免疫反应的调节T细胞(Treg)(Romagne F,Vivier E.,《F1000医学报道(F1000 Med Rep)》，3:9，2011；Waldmann TA.,《自然综述免疫学(Nat Rev Immunol)》，6:595
‑
601，2006)。
[0006]通过本说明书，参考和引用了许多出版物和专利文件。所引用出版物和专利文件的公开内容全文以引用方式并入本文中，以更清楚地描述相关技术的状态和本专利技术。

技术实现思路

[0007]技术问题
[0008]本专利技术人已经进行了广泛的研究，以开发一种有效的细胞治疗产品，该产品在患者体内具有长期的活性，同时显示最小的免疫排斥反应。结果，本专利技术人发现，当靶向II型HLA基因或其激活蛋白的基因编辑组件，特别是免疫原性诱导剂CIITA的特定部分和B2M基因的特定部分被引入细胞治疗时，抑制细胞的免疫原性的效率最大化，使细胞可以作为极好的异体移植的细胞治疗产品，从而完成了本专利技术。
[0009]因此，本专利技术的目的是提供一种用于抑制哺乳动物细胞免疫原性的组合物，和使用该组合物产生的低免疫原性哺乳动物细胞。
[0010]本专利技术的另一目的是提供一种生产低免疫原性哺乳动物细胞的方法。
[0011]从以下对本专利技术的详细说明、所附权利要求书和附图中，本专利技术的其他目的和优点将更加明显。
[0012]技术方案
[0013]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种抑制哺乳动物细胞免疫原性的组合物，所述组合物包含作为活性成分的抑制II型HLA蛋白表达的核酸分子。
[0014]本专利技术人已经进行了广泛的研究，以开发一种有效的细胞治疗产品，该产品在患者体内表现出长期活性，同时显示出最小化的免疫排斥。结果，本专利技术人发现，当靶向II型HLA基因或其激活蛋白的基因编辑组件，特别是免疫原性诱导剂CIITA的特定部分和B2M基因的特定部分被引入治疗细胞时，抑制细胞免疫原性的效率最大化，使细胞可以作为一个极好的用于异体移植的细胞治疗产品。
[0015]如本文所述，术语“核酸分子”一词的含义全面包括DNA(gDNA和cDNA)和RNA分子，以及核苷酸，而核苷酸作为核酸分子的基本结构单位，不仅包括天然核苷酸，还包括糖或碱基位点被修饰的类似物(Scheit，《核苷酸类似物(Nucleotide Analogs)》，John Wiley，纽约(1980)；Uhlman和Peyman，《化学综述(Chemical Reviews)》，90：543
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584(1990))。
[0016]如本文所述，术语“表达抑制”是指通过降低靶基因的活性或表达，使靶基因的活性或表达无法被检测，或靶基因的存在水平不显著，或靶基因的生物学功能显著降低。根据本专利技术，用于抑制表达的核酸分子具体是与所述感兴趣的基因序列互补的核酸分子，并且其实例包括但不限于shRNA、siRNA、miRNA、向导RNA(gRNA)和反义寡核苷酸。此外，本领域中任何已知的核酸分子都可以作为抑制基因表达的手段。
[0017]根据本专利技术的一个具体实施方案，所述核酸分子是向导RNA(gRNA)或编码所述gRNA的核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO：9和SEQ ID NO：14，或与其互补的序列。20.根据权利要求17所述的方法，其中所述II型HLA蛋白的激活蛋白是II类主要组织相容性复合体反式激活(CIITA)蛋白。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述特异性识别编码CIITA蛋白的核苷酸序列的向导RNA(gRNA)特异性识别选自下组的核苷酸序列：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27、SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：金炫娥，金承玟，许正贤，赵晟林，金孝珍，林虎勇，赵诚唯，黄琉炅，
申请(专利权)人：株式会社GC细胞，
类型：发明
国别省市：