一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的方法，使用基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒，所述试剂盒的成分由裂解结合液、洗涤液、洗脱液和磁珠组成，所述裂解结合液由SDS或CTAB、盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种利用磁珠法快速提取口腔拭子DNA的试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]DNA(Deoxyribonucleicacid)，又称脱氧核糖核酸，是绝大多数生物的遗传物质，决定了生物的基本特征，是分子生物学最重要的研究内容之一。快速提取高质量DNA对于开展分子生物学研究和分子诊断工作有重要意义。
[0003]目前提取DNA的方法主要有酚/氯仿法、磁珠法、过柱法等。酚/氯仿法的试剂对人体和环境均有毒害作用，同时操作较为复杂，无法配备高通量自动化提取设备；过柱法由于亲和柱的亲和力问题，只能吸附大的DNA片段。磁珠法无需氯仿等有害试剂，同时可高效吸附DNA片段，适配高通量自动化提取设备，成为核酸提取的热点研究技术。近年来公布了很多磁珠法DNA提取方法的专利，但大部分试剂盒提取时间较长，例如申请号CN202110722206.5、CN202011536024.0、CN202110249828.0等专利，提取时间均在30
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60min。

技术实现思路

[0004]本专利技术的一个目的是为了提供一种基于磁珠的快速提取口腔拭子DNA的试剂盒，所述试剂盒无需有害试剂，省时省力，节约成本，且提取的基因组DNA纯度高。
[0005]本专利技术提供的基于磁珠的快速提取口腔拭子DNA的试剂盒包括裂解结合液、洗涤液、洗脱液和磁珠，所述裂解结合液由SDS、CTAB、盐酸胍、异硫氰酸胍、Trisr/>‑
HCl、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30和异丙醇中的至少5种成分组成，所述洗涤液为乙醇水溶液，所述洗脱液为Tris
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HCl和EDTA，磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠。
[0006]优选的，所述裂解结合液由Tris
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HCl缓冲液、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30、异丙醇和物质a组成，所述物质a为CTAB或SDS或盐酸胍或异硫氰酸胍中的至少一种；
[0007]优选的，所述裂解结合液中，物质a的质量百分含量为1％
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5％或摩尔浓度为1M
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4M；
[0008]优选的，所述裂解结合液中，Tris
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HCl浓度为50
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200mM，NaCl浓度为50
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500mM，EDTA浓度为20
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100mM，柠檬酸浓度为0.1
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0.5M，柠檬酸三钠浓度为0.2
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1M；
[0009]优选的，所述裂解结合液中，PVP30的体积百分含量为1
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3％，异丙醇的体积百分含量为40％
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60％；
[0010]优选的，所述洗涤液中乙醇体积分数为50％
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80％；
[0011]优选的，所述洗脱液为中Tris
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HCl浓度为10
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30mM，EDTA浓度为0.1
‑
0.5mM；
[0012]优选的，所述磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠，粒径为100
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1000nm。
[0013]优选的，所述物质a为CTAB，所述裂解结合液中，CTAB的质量百分含量为2％；Tris
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HCl浓度为50mM；NaCl浓度为500mM；EDTA浓度为40mM；柠檬酸浓度为0.5M；柠檬酸三钠浓度
为0.2M；PVP30体积百分含量为1％；异丙醇体积百分含量为50％；
[0014]优选的，所述洗涤液中乙醇体积百分含量为75％。
[0015]优选的，所述洗脱液中Tris
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HCl浓度为20mM，EDTA浓度为0.4mM。
[0016]优选的，所述磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠，粒径为800nm。
[0017]本专利技术的第二个目的是提供一个基于上述磁珠法试剂盒提取口腔拭子DNA的应用，所述应用的具体步骤如下：
[0018]1)取待测口腔拭子保存液，加入裂解结合液、磁珠，充分混匀，室温静置；将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，去掉上清液；
[0019]2)向步骤1)得到的离心管加入洗涤液，振荡混匀；然后置于磁力架上静置30s，磁珠完全吸附后，去掉上清液；
[0020]3)将离心管从磁力架上取下，加入洗脱液，振荡混匀，加热孵育；将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，取上清DNA溶液低温保存。
[0021]优选的，所述步骤1)中的静置室温静置时间为5min；磁力架上静置时间为30s。
[0022]优选的，所述步骤2)中的振荡时间为10s；磁力架上静置时间为30s。
[0023]优选的，所述步骤3)中加热温度为56℃，加热时间为2min，磁力架上静置时间为30s。
[0024]本专利技术的有益效果在于：
[0025]1.本试剂盒操作步骤少，简单快速，无需对样本进行预处理，10分钟内即可快速完成提取操作，极大缩短了DNA提取时间；
[0026]2.本试剂盒可用于提取多个物种的口腔拭子样本基因组DNA，兼容性强；
[0027]3.本试剂盒不使用氯仿、苯酚等有机溶剂，可大幅降低对实验人员的身体伤害；
[0028]4.本试剂盒的提取方法可有效减少提取过程中核酸的损失，大大增加提取效率；
[0029]5.本试剂盒适配磁珠提取工作站，可自动化提取，减少人力成本。
附图说明
[0030]图1为本专利技术不同试剂配方提取的口腔拭子DNA的电泳条带，其中，M是Marker。
[0031]图2为本专利技术不同方法提取的口腔拭子DNA的电泳条带，其中，M是Marker。
[0032]图3为本专利技术提取的不同物种口腔拭子DNA的琼电泳条带，其中，M是Marker。
[0033]图4为本专利技术提取试剂盒(6)提取的人源口腔拭子DNA实时荧光定量PCR结果图，其中，横坐标是循环数，纵坐标是荧光强度。
具体实施方式
[0034]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0035]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0036]下述实施例中的盐酸胍、硫氰酸胍、Tris
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HCl、EDTA购买于生工生物工程(上海)股
份有限公司；CTAB、NaCl、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP购买于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。乙醇、异丙醇购买于北京北化精细化学品有限责任公司。磁珠为羟基磁珠，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的方法，其特征在于，使用基于磁珠快速提取口腔拭子DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解结合液、洗涤液、洗脱液和磁珠，所述裂解结合液由SDS、CTAB、盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris
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HCl、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30和异丙醇中的至少5种成分组成，所述洗涤液液为乙醇水溶液，所述洗脱液为Tris
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HCl和EDTA，磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述裂解结合液由Tris
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HCl缓冲液、NaCl、EDTA、柠檬酸、柠檬酸三钠、PVP30、异丙醇和物质a组成，所述物质a为CTAB或SDS或盐酸胍或异硫氰酸胍中的至少一种；所述裂解结合液中，物质a的质量百分含量为1％
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5％；所述裂解结合液中，Tris
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HCl浓度为50
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200mM，NaCl浓度为50
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500mM，EDTA浓度为20
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100mM，柠檬酸浓度为0.1
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0.5M，柠檬酸三钠浓度为0.2
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1M；所述裂解结合液中，PVP30的体积百分含量为1
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3％；异丙醇的体积百分含量为40％
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60％；所述洗涤液中乙醇体积分数为50％
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80％；所述洗脱液为中Tris
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HCl浓度为10
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30mM，EDTA浓度为0.1
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0.5mM；所述磁珠为羟基磁珠或羧基磁珠，粒径为100
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1000n...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宝安，靳凤，刘海涛，黄芳，霍秀爱，单云鹏，尹增奇，刘迎春，田子玄，王均帅，
申请(专利权)人：北京通州国际种业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：