番茄抗白粉病相关的KASP分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了番茄抗白粉病相关的分子标记及其应用。该方法包括检测番茄基因组中SEQ ID No.4的第100

【技术实现步骤摘要】
番茄抗白粉病相关的KASP分子标记及其应用


[0001]本专利技术涉及基因组序列及植物生物
，具体涉及番茄抗白粉病相关的分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]番茄白粉病是一种真菌性病害，是番茄生产的主要病害之一，严重影响番茄生产，造成巨大的经济损失。番茄白粉病的防治措施主要采用药剂防治、农业措施及种植抗性品种等，其中选育番茄抗白粉病品种是最为有效、环保的方法。在传统抗白粉病品种选育过程中，每代都需要采用田间接种病菌的方法鉴定材料抗性，接种效果易受环境影响，育种效率较低；同时如果接种过程操作不当还会造成病原扩散，不利于白粉病的综合防治，因此抗病品种选育难的问题一直没有彻底解决。
[0003]分子标记辅助选择技术(Marker
‑
assisted Selection，MAS)是分子生物学和常规育种相结合的新型育种模式，利用分子标记在植物发育的任何时期从DNA水平对目标植株进行选择(Tanksley等，RFLP mapping in plant breeding:New tools for an old science.1989,Biotechnology,7:257
‑
263)，从而弥补传统育种中出现的诸多弊端，是解决抗病品种选育难这一问题的有效途径。其中，利用高通量分子检测平台进行分子标记辅助选择则是增加抗病育种准确度与提高育种效率的有效手段。
[0004]目前部分番茄抗白粉病基因已被克隆，如OL
‑
1和OL
‑
2(Huang C C,Cui Y Y,Weng C R,et al.Development of diagnostic PCR markers closely linked to the tomato powdery mildew resistance gene Ol
‑
1on chromosome 6of tomato[J].Theoretical&Applied Genetics,2000,101(5
‑
6):918
‑
924)，相应的SCAR标记也已开发。但上述标记仅为显性标记，无法很好的区分纯合抗病和杂合抗病基因型，同时检测效率相对较低，不适用于高通量的分子检测平台。因此，开发适合于高通量分子检测平台的番茄抗白粉病的分子标记对于推广普及分子标记技术的应用、提高我国的育种效率和育种水平具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的问题是如何鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性。
[0006]为了解决以上技术问题，本专利技术提供番茄抗白粉病相关的KASP分子标记及其应用，并对该标记的实用性进行了验证，为鉴定或辅助培育番茄抗白粉病的品种提供了可靠的分子标记。
[0007]本专利技术首先提供了检测番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸是否缺失的物质在如下任一中的应用：
[0008](1)鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性；
[0009](2)筛选或选育抗白粉病的番茄单株或株系或品系或品种；
[0010](3)筛选或选育感白粉病的番茄单株或株系或品系或品种；
[0011](4)番茄育种；
[0012](5)制备鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性的产品；
[0013](6)制备筛选或选育抗白粉病的番茄单株或株系或品系或品种的产品；
[0014](7)制备筛选或选育感白粉病的番茄单株或株系或品系或品种的产品；
[0015](8)制备番茄育种的产品。
[0016]本专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性的方法，包括检测待测番茄基因组中所述的基因型，根据所述待测番茄的基因型鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性；所述基因型为TT、GG或者GT，所述TT表示番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
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101位核苷酸为at的纯合型；所述GG基因型表示番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸缺失的纯合型；所述GT基因型表示番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸分别为at和缺失的杂合型。
[0017]可选地，根据上述方法，所述鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性可为如下任一种方式：
[0018]1)所述基因型为GG或GT的待测番茄为或候选为抗番茄白粉病的番茄；
[0019]2)所述基因型为TT的待测番茄为或候选为感白粉病的番茄；
[0020]3)所述基因型为GG或GT的待测番茄的白粉病抗性高于所述基因型为TT的待测番茄。
[0021]本专利技术还提供了番茄育种的方法。
[0022]本专利技术所提供的番茄育种的方法为M1或M2：
[0023]M1、所述方法包括检测番茄基因组中所述基因型，选择所述基因型为GG或GT的番茄作为亲本进行育种，所述GG是所述番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸缺失的纯合型，所述GT是所述番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸分别为at和缺失的杂合型，所述方法育种的目的包括选育具有白粉病抗性的番茄；
[0024]M2、所述方法包括检测番茄基因组中所述基因型，选择所述基因型为TT的番茄作为亲本进行育种，所述TT是所述番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸为at的纯合型，所述方法育种的目的包括选育感白粉病的番茄。
[0025]作为一种实施方法，番茄育种的方法可包括如下步骤：
[0026](1)以待测番茄的基因组DNA为模板，采用引物组进行KASP；所述引物组合物由引物A、引物B和引物C组成；
[0027]所述引物A为核苷酸序列是序列表中序列1的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列1的第22
‑
42位的单链DNA；
[0028]所述引物B为核苷酸序列是序列表中序列2的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列2的第22
‑
40位的单链DNA；
[0029]所述引物C为核苷酸序列是序列表中序列3的单链DNA分子。
[0030](2)完成步骤(1)后，进行荧光检测，确定待测番茄所述位点的基因型；
[0031](3)选择GG基因型番茄进行抗白粉病育种。
[0032]所述方法中，引物溶解与配制方法可为：先将3条引物分别用ddH2O稀释成100mmol
·
L
‑1，分别得到引物A溶液、引物B溶液和引物C溶液。再按如下配制引物工作液：引物A12μL、引物B12μL、引物C 30μL、ddH2O 46μL。
[0033]所述方法中，5μL PCR荧光定量仪检测反应体系包括：基因组DNA 50ng，引物混液
0.07μL，LGC公司2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
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101位核苷酸是否缺失的物质在如下任一中的应用，(1)鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性；(2)筛选或选育抗白粉病的番茄单株或株系或品系或品种；(3)筛选或选育感白粉病的番茄单株或株系或品系或品种；(4)番茄育种；(5)制备鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性的产品；(6)制备筛选或选育抗白粉病的番茄单株或株系或品系或品种的产品；(7)制备筛选或选育感白粉病的番茄单株或株系或品系或品种的产品；(8)制备番茄育种的产品。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述物质为下述任一种：D1)所述物质为扩增包含番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
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101位核苷酸的番茄基因组DNA片段的引物组合物；D2)所述物质为含有D1)所述引物组合物的PCR试剂；D3)所述物质为含有D1)所述引物组合物或D2)所述PCR试剂的试剂盒。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物组合物由引物A、引物B和引物C组成；所述引物A为核苷酸序列是序列表中序列1的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列1的第22
‑
42位的单链DNA；所述引物B为核苷酸序列是序列表中序列2的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列2的第22
‑
40位的单链DNA；所述引物C为核苷酸序列是序列表中序列3的单链DNA分子。4.鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性的方法，包括检测待测番茄的基因型，根据待测番茄的基因型鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性；所述基因型为TT、GG或者GT，所述TT表示番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸为at的纯合型；所述GG基因型表示番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸缺失的纯合型；所述GT基因型表示番茄基因组中SEQ ID No.4的第100
‑
101位核苷酸分别为at和缺失的杂合型。所述鉴定或辅助鉴定番茄白粉病抗性为如下任一种方式：1)所述基因型为GG或GT的待测番茄为或候选为抗番茄白粉病的番茄；2)所述基因型为TT的待测番茄为或候选为感白粉病的番茄；3)所述基因型为GG或GT的待测番茄的白粉病抗性高于所述基因型为TT的待测番茄。5.番茄育种的方法，其特征在于：所述方法为M1或M2：M1、所述方法包括检测番茄基因组中权利要求4中所述基因型，选择所述基因型为GG或GT的番茄作为亲本进行育种，所述GG是所述番茄基因组中SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宝安，黄芳，乔媛媛，霍秀爱，单云鹏，尹增奇，刘迎春，靳凤，王均帅，
申请(专利权)人：北京通州国际种业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：