一种导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变的应用及检测试剂制造技术

本发明专利技术提供了一种导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变c.2014C>T的应用及诊断试剂，属于基因诊断技术领域。本发明专利技术通过外显子组测序技术首次发现了CDON:NM_016952.5:exon10:c.2014C>T:p.R672*位点突变导致前脑无裂畸形11型(MIM 614226)。本发明专利技术中检测CDON突变c.2014C>T的试剂用于筛查或诊断前脑无裂畸形11型，以指导患者治疗和帮助优生优育，为前脑无裂畸形11型的发病机制研究提供了新的基础和途径，为前脑无裂畸形11型治疗提供新的理论依据，可以为治疗前脑无裂畸形11型提供可能的药物靶点。能的药物靶点。能的药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变的应用及检测试剂


[0001]本专利技术属于基因诊断
，具体涉及一种导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变的应用及检测试剂。

技术介绍

[0002]全前脑综合征(Holoprosencephaly syndrome，HPE)或前脑无裂畸形、全前脑畸形，是一种神经系统和面部多发性的畸形。HPE除涉及眼、鼻外还涉及头、颌、耳、脑、口等器官，此病异常罕见而其死亡率极高，约占出生人口的1/10000。胚胎时期前脑是三个原始脑泡中最靠近面部的一个，以后发育成大脑半球和间脑结构。脊索前间质伸入前脑和口腔顶部诱导了这一分裂发育过程，此间质组织也负责面部中线结构包括前额、鼻、眶间结构和上唇的发育。如果某些因素干扰了脊索前间质的伸入过程，脑和面部的发育都会受到影响，引起前脑不同程度的分裂，甚至完全不分裂。相应的面部异常主要有眼眶间距过窄，严重者独眼、塌鼻、单鼻孔、无鼻或喙鼻和中央唇裂。
[0003]临床上根据HPE的严重程度分成4型，最严重的是I型
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独眼型：临床上以单眼眶为特征，可表现为单眼球或单眼眶双眼球，有时有喙状鼻在眼的上方。小头畸形。II型
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筛骨发育不良型：两个眼眶，眼距小，喙状鼻在两眼之间，可小头畸形。III型
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猴头型：两个眼眶，两个眼球，眼距小，喙状鼻在眼下方，小头畸形。IV型
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颌骨发育不良型：两个眼眶，两个眼球，眼距小，扁平鼻，伴有正中线唇裂，有时呈三角形头。
[0004]根据前脑分裂障碍程度可分为：1)无叶型全前脑：胚胎前脑完全没有分裂成两大半球，大脑半球间隔缺如，单一脑腔丘脑融和第三脑室、胼胝体、透明隔、脑垂体、视束和嗅球缺如，为最严重型。2)半叶型全前脑：胚胎前脑分裂成原始的脑叶两大脑半球间裂只存在于后方，但仍为单一脑腔。3)叶型全前脑：已发育成较完整的两大脑半球，但半球间裂内的扣带回在中线上有连合，为最轻型。
[0005]临床上根据致病基因进行的分子分型，可分为14型(HPE1
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HPE14)，其中前脑无裂畸形11型(HPE11)(MIM 614226)是CDON基因(MIM 608707)突变所导致。HPE11为常染色显性遗传病，主要临床症状为小头畸形、腭裂、眉毛浓密、前脑无裂畸形、胼胝体发育不全、全面发育迟缓、唇裂、眼距过窄、多脾、连眉、眼球突出等，表型存在异质性。
[0006]CDON定位于染色体11q24.2，基因全长106.5kb，包含20个外显子和19个内含子，编码1262个氨基酸组成的CDON蛋白。CDON是一种细胞表面SHH绑定蛋白，通过充当PTCH1共同受体促进SHH信号激活，进而参与神经系统发育。CDON
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小鼠显示前脑无裂畸形。
[0007]基因突变是导致前脑无裂畸形11型发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊前脑无裂畸形11型的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，然而目前报道的导致脑无裂畸形11型的致病基因的突变位点十分优先，对诊断前脑无裂畸形11型造成极大阻碍。
[0008]此外，现有技术中对基因突变位点基因型的检测，可以采用其他方法限制性酶切
片段长度多态性、单链构象多态性、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交等等，但这些检测方法均不能同时满足定性、定量及明确突变基因的序列的目的，所以需要针对特异突变位点的特异性扩增引物。

技术实现思路

[0009]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种一种导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变的应用，不仅能丰富基因诊断前脑无裂畸形11型的突变位点，还能作为靶点为药物筛选、药效评价及靶向治疗提供基础。
[0010]本专利技术的目的还在于提供一种检测导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变位点的试剂，助力前脑无裂畸形11型基因突变的筛查和诊断。
[0011]本专利技术提供了一种基因CDON突变位点在制备防治前脑无裂畸形11型诊断试剂或制备防治前脑无裂畸形11型的药物中的应用，所述基因CDON突变位点为CDON：NM_016952.5：exon10：c.2014C>T：p.R672*。
[0012]本专利技术提供了一种用于检测导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变位点的试剂，包括检测致病基因CDON突变位点c.2014C>T的引物；
[0013]所述检测致病基因CDON突变位点c.2014C>T的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的CDON
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F和核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的CDON
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R。
[0014]优选的，所述试剂还包括测序引物；
[0015]所述测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO：37所示的CDON
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SeqF和核苷酸序列如SEQ ID NO：38所示的CDON
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SeqR。
[0016]本专利技术提供了一种前脑无裂畸形11型诊断试剂盒，包括所述试剂和PCR扩增试剂。
[0017]优选的，所述PCR扩增试剂包括dNTP、10
×
PCR缓冲液、镁离子和Tap聚合酶；
[0018]所述10
×
PCR缓冲液包含以下组分的水溶液：500mmol/L KCl、pH 8.3的100mmol/L Tris
‑
Cl和15mmol/L MgCl2。
[0019]本专利技术提供了所述试剂在制备检测导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变位点的试剂盒中的应用。
[0020]本专利技术提供了一种检测基因CDON突变位点的引物在制备前脑无裂畸形11型辅助诊断试剂盒中的应用，所述基因CDON突变位点为CDON：NM_016952.5：exon10：c.2014C>T：p.R672*。
[0021]优选的，所述引物为所述试剂。
[0022]优选的，利用所述试剂盒辅助诊断前脑无裂畸形11型的方法，包括以下步骤：
[0023]用所述试剂盒检测样本中CDON基因突变位点的基因型来诊断个体是否患有前脑无裂畸形11型：
[0024]若检测基因型是“c.2014C>T杂合子突变”，则诊断受试个体为前脑无裂畸形11型；
[0025]若检测基因型是“野生型”，则诊断受试个体为正常人。
[0026]优选的，所述样本为血液、羊水和活检组织中的至少一种。
[0027]本专利技术提供了一种基因CDON突变位点在制备防治前脑无裂畸形11型诊断试剂或制备防治前脑无裂畸形11型的药物中的应用，所述基因CDON突变位点为CDON：NM 016952.5：exon10：c.2014C>T：p.R672*。本专利技术通过外显子组测序技术首次发现了CDON：
NM_016952.5：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因CDON突变位点在制备防治前脑无裂畸形11型诊断试剂或制备防治前脑无裂畸形11型的药物中的应用，所述基因CDON突变位点为CDON:NM_016952.5:exon10:c.2014C>T:p.R672*。2.一种用于检测导致前脑无裂畸形11型的致病基因CDON突变位点的试剂，其特征在于，包括检测致病基因CDON突变位点c.2014C>T的引物；所述检测致病基因CDON突变位点c.2014C>T的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的CDON
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F和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的CDON
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R。3.根据权利要求2所述试剂，其特征在于，所述试剂还包括测序引物；所述测序引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:37所示的CDON
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SeqF和核苷酸序列如SEQ ID NO:38所示的CDON
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SeqR。4.一种前脑无裂畸形11型诊断试剂盒，其特征在于，包括权利要求2或3所述试剂和PCR扩增试剂。5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括dNTP、10
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【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，廖乙山，聂欢，伊宁，李婵艺，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：