一种肺结核感染诊断标志物及其诊断试剂盒制造技术

一种肺结核感染诊断标志物及其诊断试剂盒，属于肺结核诊断和治疗技术领域。本发明专利技术提供的检测肺结核的标志物为LINC01148基因，通过引物检测LINC01148基因可以有效的诊断患者是否患有肺结核，LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1，LINC01148基因的引物序列为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。同时，本发明专利技术发现抑制LINC01148基因表达可以有效的抑制巨噬细胞中结核杆菌的活性，因此可将LINC01148基因的siRNA用于治疗肺结核。的siRNA用于治疗肺结核。的siRNA用于治疗肺结核。

【技术实现步骤摘要】
一种肺结核感染诊断标志物及其诊断试剂盒


[0001]本专利技术属于肺结核诊断和治疗
，尤其涉及一种肺结核感染诊断标志物及其诊断试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]肺结核是一种具有久远历史的慢性传染病，其实一个重大的全球性公共卫生问题，严重威胁着人类健康。因此，对肺结核进行及时准确的诊断，不仅能够使患者尽早得到针对性治疗进而改善预后，更重要的是能够使传染源得到及时有效的可知，避免肺结核的传播，然而由于肺结核的临床表现多样，因此影像学表现缺乏足够的特异性，实验室也缺乏理想的生物学指标，致使肺结核的诊断至今仍然困扰这临床医务工作者。
[0003]非编码RNA是指不具备蛋白质编码能力的RNA，包括转运RNA、核糖体RNA、小核仁RNA以及非编码RNA。非编码RNA广泛参与生命活动中重要的生物功能，如生物个体的发育与分化、生殖、细胞凋亡和细胞重编程等，并且其与人类疾病密切相关。
[0004]长链非编码RNA具有广泛的组织表达谱，与编码蛋白质的mRNA相比，他们的表达丰度一般较低，但却具有更强的组织和细胞表达特异性。因此，长链非编码RNA具有成为生物标志物的潜力。故，本专利技术对长链非编码RNA在肺结核诊断中的应用进行研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种肺结核感染诊断标志物及其诊断试剂盒，从而让使用者可以更加快速和有效的诊断患者是否患有肺结核以及患者的预后情况。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了检测LINC01148基因表达的引物在制备辅助诊断肺结核感染的试剂盒中的应用。
[0007]优选地，所述LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1。
[0008]优选地，所述引物的上游序列为SEQ ID NO.2，所述引物的下游序列为SEQ ID NO.3。
[0009]其次，本专利技术提供了检测LINC01148基因表达的引物在制备诊断肺结核感染患者预后的试剂盒中的应用。
[0010]优选地，所述LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1。
[0011]优选地，所述引物的上游序列为SEQ ID NO.2，所述引物的下游序列为SEQ ID NO.3。
[0012]其次，本专利技术提供了LINC01148基因的siRNA在制备肺结核治疗药物中的应用。
[0013]优选地，所述LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1；所述siRNA的正义链的序列为SEQ ID NO.4；所述siRNA的反义链的序列为SEQ ID NO.5。
[0014]优选地，所述药物通过抑制巨噬细胞中结核杆菌存活来治疗肺结核；
优选地，所述巨噬细胞为THP
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1细胞；优选地，所述结核杆菌为结核杆菌H37Rv。
[0015]其次，本专利技术提供了LINC01148基因的siRNA在制备抑制巨噬细胞中结核杆菌存活的药物中的应用。
[0016]优选地，所述LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1；所述siRNA的正义链的序列为SEQ ID NO.4；所述siRNA的反义链的序列为SEQ ID NO.5。
[0017]本专利技术的有益效果是：本专利技术通过对比健康对照组和肺结核患者的外周血单个核细胞中LINC01148基因的表达差异发现LINC01148基因在肺结核患者中表达量升高，同时本专利技术发现治愈后的患者外周血单个核细胞中LINC01148基因的表达量相较于未治疗的患者下降，且差异均具有优异的特异性和灵敏度。因此，可以将LINC01148基因用于诊断肺结核和肺结核患者的预后诊断。
[0018]同时，本专利技术发现结核杆菌感染巨噬细胞后LINC01148基因的表达量同样出现上调，并且抑制LINC01148基因表达可以有效的抑制巨噬细胞中结核杆菌的活性，因此可将LINC01148基因的抑制剂用于治疗肺结核。
附图说明
[0019]图1为不同分组之间LINC01148基因相对表达量的差异；图2为健康治疗组和未治疗组之间的ROC曲线；图3为未治疗组和初步治疗组之间的ROC曲线；图4为未治疗组和治愈组之间的ROC曲线；图5为THP
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1细胞感染结核杆菌后LINC01148的表达量差异；图6为本专利技术提供的LINC01148
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siRNA对于THP
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1细胞中LINC01148表达量的抑制效果；图7为抑制LINC01148后结核杆菌在THP
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1细胞中的存活情况。
具体实施方式
[0020]所举实施例是为了更好地对本专利技术进行说明，但并不是本专利技术的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0021]研究对象选取青岛市中心医院收治的肺结核患者，分为：未治疗组42例，初步治疗组（治疗3月的患者）30例，治愈组25例，同时，选取40例健康对照。各组在年龄，性别上没有显著差异。
[0022]肺结核患者诊断纳入标准符合肺结核诊断标准，排除标准为患有慢性肝炎、HIV、高血压、糖尿病、肿瘤等疾病的患者。
[0023]实施例1提取各分组的cDNA（1）清晨空腹采集研究对象外周血5ml于肝素钠抗凝管中，混匀备用；
（2）使用Ficoll淋巴细胞分离液，按照密度梯度离心法分离获得单个核细胞，PBS冲洗3次；（3）在单个核细胞中加入1ml Trizol试剂，使用移液枪吹打混匀后，放置5min；（4）加入200μl氯仿，颠倒混匀后，室温下静置5min，12000rpm离心15min；（5）小心的将上层水相转移至新的无酶离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀后冰上放置10min；（6）12000离心10min，弃去上清，加入500μl预冷的70%乙醇溶解沉淀，8000rpm离心5min，弃去上清，室温干燥5
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10min，加入30μL DEPC水，即得到RNA。
[0024]（7）参照天根生物逆转录试剂盒配置如下gDNA去除反应体系：组成成分
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
使用量5
×
gDNABuffer2μLTotaLRNA2μgRNase
‑
FreeddH2O补足到10μLgDNA的反应条件为：42℃， 3min，之后4℃放置；（8）逆转录反应体系组成成分使用量10
×
KingRTBuffer2μLFastKingRTEnzymeMix1μLFQ
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RTPrimerMix2μL步骤（7）反应液10μLRNase
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FreeddH2O
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
5μL逆转录反应的反应条件为：42℃ 孵育15min，95℃ 孵育3min，4℃保存。
[0025]实施例2检测LINC01148基因在不同分组中的表达差异1.根据L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测LINC01148基因表达的引物在制备辅助诊断肺结核感染的试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述引物的上游序列为SEQ ID NO.2，所述引物的下游序列为SEQ ID NO.3。4.检测LINC01148基因表达的引物在制备诊断肺结核感染患者预后的试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述LINC01148基因的转录本序列为SEQ ID NO.1。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述引物的上游序列为SEQ ID NO.2，所述引物的下游序...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓华，陈娟，张蓉，
申请(专利权)人：青岛市中心医院，
类型：发明
国别省市：