一种HEK293细胞培养基及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种HEK 293细胞培养基及其应用，是一种安全可靠的含有精氨酸/赖氨酸多肽、半胱氨酰甘氨酸和吡咯喹啉醌组合物的培养基，所述组合物各成分在培养基中的含量如下：精氨酸/赖氨酸多肽0.5

【技术实现步骤摘要】
一种HEK 293细胞培养基及其应用


[0001]本专利技术涉及培养基
，具体为一种HEK 293细胞培养基及其应用领域。

技术介绍

[0002]人胚肾细胞293（Human Embryonic Kidney 239 cell，HEK 293）是1973年荷兰生物学家 Alex Van der Eb通过腺病毒 5 (Ad5) DNA转染形成的。最初的HEK 293细胞适应贴壁含血清的环境，可通过驯化适应无血清悬浮生长，从而易于实现规模化培养。同时由于HEK 293细胞是一种易转染的细胞，也广泛应用于蛋白表达和病毒载体的制备。目前市面上大部分HEK 293培养基仅支持细胞生长，而不支持转染或转染效率较低，与此同时，在转染之前往往需要另一种支持转染的培养基将原有培养体系进行稀释或更换，这大大提高了工艺的繁琐程度和培养基的使用成本。因此，为了提高蛋白表达量以及病毒包装效率，亟需在常规培养基配方的基础上添加几种关键的组分，通过优化组分浓度，获得更有利于维持细胞生长、能量代谢、蛋白表达量和包装病毒，且易于通过纯化方式去除培养基及宿主细胞残留的培养基配比，使细胞扩增、蛋白表达量或病毒包装可满足临床应用推广，符合最终药品质量要求。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种HEK 293细胞培养基及其应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种HEK 293细胞培养基，所述培养基包括基础培养基和组合物，所述组合物包括：精氨酸/赖氨酸多肽、半胱氨酰甘氨酸和吡咯喹啉醌；所述组分各成分的浓度如下：精氨酸/赖氨酸多肽0.5
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5 mg/L、半胱氨酰甘氨酸5
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25 mg/L、吡咯喹啉醌1
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10 mg/L。
[0005]较优化的方案，所述组合物各成分的浓度如下：精氨酸/赖氨酸多肽1 mg/L、半胱氨酰甘氨酸10 mg/L、吡咯喹啉醌2 mg/L。
[0006]较优化的方案，所述基础培养基为OPM
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293 CD03培养基、LV
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MAX 293培养基、FreeStyle F17 293培养基中的任意一种。
[0007]较优化的方案，根据以上所述的一种HEK 293培养基的应用，该培养基用于培养HEK 293细胞。
[0008]与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：本申请为弥补现有HEK 293细胞培养基的缺陷，提供一种安全可靠的含有精氨酸/赖氨酸多肽、半胱氨酰甘氨酸和吡咯喹啉醌的培养基，本专利技术的组合物来源明确，无动物源成分，对细胞无毒性，使用方法简单，性能优异，在保证细胞高活率，快速生长的同时，能够显著提高瞬转蛋白产量和病毒包装效率。
[0009]本专利技术的组合物的作用机理是：
本专利技术组合物中的精氨酸/赖氨酸多肽具有类似表面活性剂的作用，能够降低细胞膜的表面张力，通过改变细胞膜的通透性，促进载体质粒混合物进入细胞，从而提高转染效率和细胞瞬时表达水平。而半胱氨酰甘氨酸作为一种二肽，是谷胱甘肽生物合成的前体，在细胞培养过程中有利于产生活性氧物质，对于维持转染后正常细胞功能至关重要，可大幅度提高转染后细胞活率、提高蛋白表达效率。吡咯喹啉醌近些年来被逐渐发现其作为人类发育的必要因子，除了能够刺激人体免疫细胞的生长，提高人体的免疫功能，同时吡咯喹啉醌通过参与呼吸链电子传递，促进细胞对氨基酸的吸收，从而增加细胞密度，提高细胞生长速度。吡咯喹啉醌还作为一种氧化还原酶辅基，在细胞中可以起到氧化还原剂的作用，修饰信号传导和支持线粒体功能，促进细胞产生更多ATP，从而促进细胞快速增殖和蛋白高表达，并且可减少细胞培养过程中葡萄糖的消耗和乳酸的生成，便于延长细胞维持期，从而提高细胞产量，为蛋白合成提供更多的能量，保证细胞转染后的正常生长功能。
[0010]本专利技术将此两种肽类精氨酸/赖氨酸多肽以及半胱氨酰甘氨酸联合吡咯喹啉醌进行同时添加，对细胞转染和蛋白表达具有协同作用，发挥其促进细胞的跨膜功能，维持细胞正常稳态，达到促进蛋白表达和提高病毒载体滴度的目的。
附图说明
[0011]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为不同OPM
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293 CD03培养基对应培养的细胞活率曲线；图2为不同OPM
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293 CD03培养基对应培养的细胞传代曲线；图3为不同OPM
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293 CD03培养基对应培养的蛋白表达水平对比；图4为不同OPM
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293 CD03培养基对应培养的慢病毒包装滴度对比；图5为不同OPM
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293 CD03培养基对应培养的AAV包装滴度对比；图6为不同LV
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MAX 293培养基对应培养的细胞活率曲线；图7为不同LV
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MAX 293培养基对应培养的细胞传代曲线；图8为不同LV
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MAX 293培养基对应培养的蛋白表达水平对比；图9为不同LV
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MAX 293培养基对应培养的慢病毒包装滴度对比；图10为不同LV
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MAX 293培养基对应培养的AAV包装滴度对比；图11为不同FreeStyle F17 293培养基对应培养的细胞活率曲线；图12为不同FreeStyle F17 293培养基对应培养的细胞传代曲线；图13为不同FreeStyle F17 293培养基对应培养的蛋白表达水平对比；图14为不同FreeStyle F17 293培养基对应培养的慢病毒包装滴度对比；图15为不同FreeStyle F17 293培养基对应培养的AAV包装滴度对比。
具体实施方式
[0012]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0013]一：实验材料：OPM
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293 CD03培养基（奥浦迈，货号81070
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001），LV
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MAX 293培养基（赛默飞，货号A3583402）、FreeStyle F17 293培养基（赛默飞，货号A1383502），精氨酸/赖氨酸多肽（上海遐瑞医药，CAS号31014
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78
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5），半胱氨酰甘氨酸（西格玛，货号C0166），吡咯喹啉醌（PQQ）（Aladdin，货号D134423），HEK 293细胞（赛默飞，货号A14527），目标蛋白质粒（丰晖生物，货号FH2192），转染试剂PEI（西格玛，货号919012），Opti
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MEM培养基（赛默飞，货号A4124802），ELISA试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HEK 293细胞培养基，其特征在于：所述培养基包括基础培养基和组合物，所述组合物包括精氨酸/赖氨酸多肽、半胱氨酰甘氨酸和吡咯喹啉醌；所述组合物各成分的浓度如下：精氨酸/赖氨酸多肽0.5
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5 mg/L、半胱氨酰甘氨酸5
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25 mg/L、吡咯喹啉醌1
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10 mg/L。2.根据权利要求1所述的一种HEK 293细胞培养基，其特征在于：所述组合物各成分的浓度如下：精氨酸/赖氨酸多肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：程成，林家会，马士棋，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：苏州依科赛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：