一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法技术

本发明专利技术公开了一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，主要是通过酶I和酶II两次消化处理后，结合过滤、离心清洗以及红细胞裂解等操作获得纯化后的单细胞悬液。所述酶I为含0.25％胰蛋白酶的HBSS培养基；所述酶II为含中性蛋白酶0.2mg/mL、II型胶原酶1～3mg/mL、IV型胶原酶1～3mg/mL、DNase I 0.1mg/mL和CaCl20.04～0.06mg/L的HBSS培养基。本发明专利技术优点包括：操作简便，无需特殊仪器设备即可实现，可于短时间内获得高活性的肾脏单细胞悬液，经细胞活性检测发现，经最适酶浓度所分离得到的肾脏单细胞产量高达1.6

【技术实现步骤摘要】
一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种将肾脏组织分离成单细胞悬液的方法。

技术介绍

[0002]近年来，随着生物医学研究的发展和进步，单细胞测序技术应运而生。其中最为热门的当属单细胞转录组测序(scRNA
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seq)的研究，它能够在单细胞水平上揭示组织或器官中不同细胞的特性和相互联系，解答之前全转录组高通量测序技术掩盖了的细胞之间的异质性问题。与传统高通量测序相比，单细胞测序技术精度更高，单次获得的基因数据量更大，结合现阶段生物信息学分析算法，统计学理论，将单细胞组学数据进行分析、整合和可视化，能最大限度的还原生物完整性从而了解生物学进程(如疾病)的详细情况，使得这些数据可以更有效地为广大科研共同体服务。
[0003]现如今单细胞测序技术已被广泛应用于精准医学研究。如针对重大慢性疾病，绘制疾病的单细胞多组学信息图谱，发现新型的异质细胞亚群、特定功能的细胞群及基因，揭示重要疾病的发生发展机理；发现疾病新的治疗靶点，药物治疗效果的评估工作；开发多维度组学的超灵敏、高通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，将新鲜离体肾脏组织样本切碎成肾脏组织小块；步骤二，向肾脏组织小块中加入酶I，混匀孵育初步消化，去除酶I，所述酶I为胰蛋白酶消化液；步骤三，向经酶I消化后的肾脏组织小块中加入酶II，混匀孵育消化，所述酶II为含有中性蛋白酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、DNase I和CaCl2的消化液；步骤四，将消化后的细胞
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酶II混合液过滤得细胞悬液，将预冷FBS加入细胞悬液中，离心去上清，加入红细胞裂解液重悬细胞沉淀，混匀后裂解；步骤五，将裂解后的细胞悬液离心后去上清，加入DPBS溶液离心清洗获得纯化后的肾脏细胞，重悬备用。2.根据权利要求1所述的一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，其特征在于，所述步骤一中新鲜离体肾脏样本来源于人的肾脏组织；步骤一中详细过程包括：新鲜离体肾脏组织样本用DPBS清洗2次，滴加少量HBSS培养基使肾脏组织样本保持湿润，用预冷的刀片切碎成0.8
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1.2mm3肾脏组织小块。3.根据权利要求1所述的一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，其特征在于，所述步骤二中详细过程包括：向肾脏组织小块中加入酶I，混匀后置于37℃水平摇床上孵育初步消化10
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20min，摇床设置为50rpm/min；然后210g离心5min，去除酶I。4.根据权利要求1所述的一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，其特征在于，所述酶I为含有质量分数0.25％胰蛋白酶的HBSS培养基。5.根据权利要求1所述的一种将离体肾脏组织解离成单细胞悬液的方法，其特征在于，所述酶II为含有中性蛋白酶0.2mg/mL、II型胶原酶1～3mg/mL、IV型胶原酶1～3mg/mL、DNase I 0.1mg/mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：林传勇，庞美霞，吴声鹏，陈志豪，
申请(专利权)人：广州元信生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：