一种CHO细胞培养基及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种CHO细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，本发明专利技术的CHO细胞培养基可以增强CHO细胞瞬时转染表达蛋白，通过添加组合物，补料的方式，能在细胞转染后，维持高活率，使培养周期延长，从而提高蛋白的表达量。本发明专利技术含有多种高浓度氨基酸和一些其他核苷酸及特殊成分，其中白藜芦醇、丁酸钠、丙戊酸、诺考达唑、普鲁卡因胺、肼苯哒嗪的联合作用，可显著提高蛋白产量，且不影响细胞的正常培养，高浓度氨基酸的添加，尤其L

【技术实现步骤摘要】
一种CHO细胞培养基及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞培养基领域，具体为一种CHO细胞培养基及其应用。

技术介绍

[0002]重组蛋白的生产方法有稳定转染和瞬时转染，随着生物药技术的发展，CHO细胞稳定转染的蛋白产量已达到3
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10g/L，非常可观，但是稳转细胞株开发周期长，仍然有大量对于瞬转的需求，以缩短产品开发周期，短期内快速获得所需蛋白和质量评估反馈，而瞬转表达蛋白的关键因素有很多，如细胞系、表达载体、质粒DNA质量、培养基、转染方法及转染试剂等。
[0003]其中细胞系的选择很有限，一般是CHO和HEK293，HEK293容易转染，受到广泛应用，而CHO细胞因其转染难度较大，表达量偏低，难以放大等因素而受限，近年来，Expi CHO表达体系的出现，颠覆了传统认知，在Expi CHO
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S细胞中，不仅保留了悬浮细胞高密度生长的特性，其瞬转的表达量可以达到3g/L以上，但其转染试剂为脂质体，虽然转染效率和蛋白表达均有显著提高，但价格较高，未能广泛应用，其他的转染方式，也因为各种各样的原因，限制了其大规模工业化生产，目前研究最多的阳离子聚合物，不仅价格低廉，且转染效率相对较高，但目前应用较多的PEI，其缺点是随着PEI用量的增加，毒性也随之增加，想要用少量的PEI，获得较高的转染效率，或者用其他阳离子聚合物替代PEI，成为大家研究的焦点。
[0004]大量的研究表明，想要提高CHO细胞瞬转的蛋白表达，不能单一地优化某个关键因素，要进行DoE设计，找到最优的实验方案，如用转染方法，转染细胞密度、DNA和转染试剂的比例、孵育时间、培养基的选择等，均需进行进一步优化，而其中培养基的选择，不仅影响转染效率，更是蛋白最终产量的最关键因素，但是由于细胞对培养基需求不同，培养基通用性不足，如何选择是个难题，通过添加组合物，补料的方式，能在细胞转染后，维持高活率，使培养周期延长，从而提高蛋白的表达量。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种CHO细胞培养基，用于增强CHO细胞瞬时转染表达蛋白的组合物，提高蛋白表达，以弥补现有技术的不足。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种CHO细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，所述的基础培养基为DMEM/F12培养基，所述的添加剂为：L
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天冬氨酸13.2g/L、L
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天冬酰胺13.2g/L、L
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精氨酸8.6g/L、L
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组氨酸10g/L、L
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异亮氨酸5g/L、L
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亮氨酸5g/L、L
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赖氨酸13.2g/L、L
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蛋氨酸8g/L、L
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苯丙氨酸5.5g/L、L
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苏氨酸20g/L、L
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色氨酸2.8g/L、L
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酪氨酸15g/L、L
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缬氨酸13.2g/L、L
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半胱氨酸4.4g/L、L
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谷氨酸5.5g/L、L
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谷氨酰胺6.2g/L、对氨基苯甲酸5g/L、腺苷0.02~0.04g/L、尿苷0.02~0.04g/L、鸟苷0.02g~0.04/L、甘露聚糖7g/L、白藜芦醇0.1~0.5g/L、丁酸钠0.16~0.8g/L、丙戊酸0.16~0.8g/L、硫酸葡聚糖0.1g/L、诺考达唑0.1~1g/L、普鲁卡因胺0.1~1g/L、肼苯哒嗪0.1~0.5g/L。
[0007]优选的，所述的添加剂为：L
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天冬氨酸13.2g/L、L
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天冬酰胺13.2g/L、L
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精氨酸8.6g/L、L
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组氨酸10g/L、L
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异亮氨酸5g/L、L
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亮氨酸5g/L、L
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赖氨酸13.2g/L、L
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蛋氨酸8g/L、L
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苯丙氨酸5.5g/L、L
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苏氨酸20g/L、L
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色氨酸2.8g/L、L
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酪氨酸15g/L、L
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缬氨酸13.2g/L、L
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半胱氨酸4.4g/L、L
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谷氨酸5.5g/L、L
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谷氨酰胺6.2g/L、对氨基苯甲酸5g/L、腺苷0.02g/L、尿苷0.02g/L、鸟苷0.02g/L、甘露聚糖7g/L、白藜芦醇0.5g/L、丁酸钠0.8g/L、丙戊酸0.8g/L、硫酸葡聚糖0.1g/L、诺考达唑0.1g/L、普鲁卡因胺0.5g/L、肼苯哒嗪0.1g/L。
[0008]优选的，所述的CHO细胞为CHO
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S细胞。
[0009]优选的，所述的CHO
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S细胞为Expi CHO
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S细胞。
[0010]一种前述CHO细胞培养基的应用，用于CHO细胞的培养。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术提出了一种增强CHO细胞瞬时转染表达蛋白的培养基及其应用，搭配市售CHO瞬转基础培养基DMEM/F12培养基，通过添加组合物，补料的方式，能在细胞转染后，维持高活率，使培养周期延长，从而提高蛋白的表达量。本专利技术含有多种高浓度氨基酸和一些其他核苷酸及特殊成分，其中白藜芦醇、丁酸钠、丙戊酸、诺考达唑、普鲁卡因胺、肼苯哒嗪的联合作用，可显著提高蛋白产量，且不影响细胞的正常培养，高浓度氨基酸的添加，尤其L
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半胱氨酸和酪氨酸的添加，可延长细胞存活的时间，从而使蛋白表达进一步提高，长达13
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14天的培养，使蛋白表达提高1.4
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2.24倍。
[0012]本专利技术的作用机理如下：丁酸钠、丙戊酸、普鲁卡因胺、肼苯哒嗪等均为常见的DNMT（DNA甲基转移酶）抑制剂和HDAC（组蛋白去乙酰化酶）抑制剂，一方面可以作为HDAC竞争性抑制剂，与酶的催化中心结合，另一方面可以促进HDAC2泛素依赖的蛋白酶体降解，通过解除转录抑制来提高重组蛋白表达量。
附图说明
[0013]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为对照组与不同实验组的活细胞密度曲线图；图2为对照组与不同实验组的细胞活率曲线图；图3为对照组和实施例1/4/5/6的不同抗体表达柱状图；图4为对照组在24小时的转染效率示意图；图5为添加实施例1中上述组合物在24小时的转染效率示意图；图6为对照组在48小时的转染效率示意图；图7为添加实施例1中上述组合物在48小时的转染效率示意图。
具体实施方式
[0014]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CHO细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，其特征在于，所述的基础培养基为DMEM/F12培养基，所述的添加剂为：L
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天冬氨酸13.2g/L、L
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天冬酰胺13.2g/L、L
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精氨酸8.6g/L、L
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组氨酸10g/L、L
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异亮氨酸5g/L、L
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亮氨酸5g/L、L
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赖氨酸13.2g/L、L
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蛋氨酸8g/L、L
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苯丙氨酸5.5g/L、L
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苏氨酸20g/L、L
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色氨酸2.8g/L、L
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酪氨酸15g/L、L
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缬氨酸13.2g/L、L
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半胱氨酸4.4g/L、L
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谷氨酸5.5g/L、L
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谷氨酰胺6.2g/L、对氨基苯甲酸5g/L、腺苷0.02~0.04g/L、尿苷0.02~0.04g/L、鸟苷0.02g~0.04/L、甘露聚糖7g/L、白藜芦醇0.1~0.5g/L、丁酸钠0.16~0.8g/L、丙戊酸0.16~0.8g/L、硫酸葡聚糖0.1g/L、诺考达唑0.1~1g/L、普鲁卡因胺0.1~1g/L、肼苯哒嗪0.1~0.5g/L。2.根据权利要求1所述的一种CHO细胞培养基，其特征在于，所述的添加剂为：L
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天冬氨酸13.2g/L、L<...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛丽丽，徐亮亮，向琼，赵亚，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：苏州依科赛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：