一种诱导小鼠肠道类器官定向分化为肠内分泌细胞的培养基及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种诱导小鼠肠道类器官定向分化为肠内分泌细胞的培养基及其应用，涉及类器官诱导培养技术领域。本发明专利技术在小鼠小肠类器官标准条件(ENR)培养基中加入Mek抑制剂PD0325901、Wnt抑制剂IWP

【技术实现步骤摘要】
一种诱导小鼠肠道类器官定向分化为肠内分泌细胞的培养基及其应用


[0001]本专利技术属于类器官诱导培养
，具体为一种诱导小鼠肠道类器官定向分化为肠内分泌细胞的培养基及其应用

技术介绍

[0002]小肠内分泌细胞由小肠干细胞分化而来，分布于整个肠道，调控肠道分泌、运动、消化吸收、血糖调节和代谢等生理活动。它能够分泌不同类型的肠道激素，通过内分泌和旁分泌等途径，在肠道蠕动、血管收缩、营养吸收、上皮生长以及中枢生物节律调控等方面发挥关键作用。同时面向医药、营养和组织工程的非临床和临床系统的研究担任重要角色。在过去，关于肠内分泌细胞的体外研究始终停留在细胞系水平，以单层形式培养，与正常的肠内分泌细胞在细胞环境、遗传背景和功能特性上存在较大差异。
[0003]研究表明，肠道中的Lgr5
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肠道干细胞具有分化为肠上皮中所有类型的细胞的潜能，包括潘氏细胞、内分泌细胞、肠上皮细胞等。因此提取小肠隐窝中的Lgr5
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肠道干细胞，加以诱导便能形成可以自我维持和增殖的肠道类器官。该类器官内含所有肠道上皮细胞类型，拥有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导培养基，其特征在于，所述培养基组分包括肠道类器官标准条件ENR培养基10～15mL、Mek抑制剂PD03259010.5～2μM、Wnt抑制剂IWP
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23～8μM和Notch抑制剂DAPT8～15μM；所述ENR培养基组分为AdvancedDMEM培养基10～15ml，Glutamax100～150μL、Hepesbuffer100～150μL、N
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2supplement100～150μL、B
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27supplement100～150μL、青链霉素100～150μL，Noggin80～120ng/ml、R
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spondin1400～600ng/ml、EGF 30～80ng/ml。2.一种诱导小鼠肠道类器官定向分化为肠内分泌细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：使用权利要求1所述的诱导培养基培养小鼠小肠类器官。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养的条件为35～37℃，5％CO2。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当小鼠小肠类器官分化开始每2天更新一次培养基；分化4天后，吸去培养液，加入PBS缓冲液吹打、离心、弃上清，重悬于4℃AdvancedDMEM中，离心、弃去上...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文达，徐宝才，秦子慧，乐建铭，张杰，李图帅，张华月，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：