一种ZNF135基因甲基化检测试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种ZNF135基因甲基化检测试剂及其应用，所述ZNF135基因甲基化检测试剂包括：序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物；和/或序列如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物。本发明专利技术方案制备得到的ZNF135基因甲基化检测试剂，扩增得到的目标序列短，扩增效率高，可准确检出10ng DNA背景下1％的甲基化比率，操作简单、快捷、低成本，适用于临床检测。于临床检测。

【技术实现步骤摘要】
一种ZNF135基因甲基化检测试剂及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种ZNF135基因甲基化检测试剂及其应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，严重威胁着妇女的身体健康，并造成沉重的社会负担和经济负担。
[0003]高危型人乳头瘤病毒(high
‑
risk human papilloma virus,hrHPV)的持续感染是宫颈癌发生的主要因素，宫颈癌的发生和发展是一个缓慢的过程，通常需要持续数十年的时间，这给宫颈癌的筛查和防治提供了绝佳的时间窗口。通过筛查早期宫颈癌前病变，其治愈率为100％。宫颈癌的主要病因现已明确，99.7％由高危型HPV感染导致，2015年ASCCP过渡指南已提出HPV作为初筛。HPV检测有着敏感性很高的特点，但HPV检测特异性普遍不足，从而容易导致持续阳性或假阳性，造成恐慌，导致医院阴道镜检量暴增，甚至过度医疗。
[0004]癌症基因检测已是世界趋势，早期诊断出癌症的风险与发生，提早介入与干预，能够大幅地提升癌症5年生存率与降低死亡率。全世界表观遗传学研究成为最先进癌症早期诊断的重要历程碑：肿瘤的特点之一是甲基化失衡，即癌变部位特定抑癌基因甲基化程度显著增高，表达下降甚至沉默，丧失抑癌功能，最终快速发展为癌症。因此特定基因甲基化状态可以被看做肿瘤发生与发展的重要指标。因此，基因甲基化检测是未来宫颈癌全分子检查的关键，评估在短期内进展为宫颈癌的风险。因此，急需寻找并开发一种高灵敏度、高特异性的检测宫颈癌的分子标志物甲基化检测试剂，为宫颈癌的早期诊断提供有力的帮助。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种ZNF135基因甲基化检测试剂。
[0006]本专利技术还提出一种上述ZNF135基因甲基化检测试剂的应用。
[0007]本专利技术还提出一种含有上述ZNF135基因甲基化检测试剂的试剂盒。
[0008]在本专利技术的第一方面，提出了一种ZNF135基因甲基化检测试剂，所述ZNF135基因甲基化检测试剂包括：序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物；和/或序列如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF135基因甲基化检测试剂还包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：6所示的荧光探针序列；所述SEQ ID NO：3所示的荧光探针序列为与如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物相匹配的荧光序列；所述SEQ ID NO：6所示的荧光探针序列为与如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物相匹配的荧光序列。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述荧光探针序列的5
’
端具有荧光基团，3
’
端具有淬灭基团；所述荧光基团为VIC、ROX、FAM、Cy5、HEX、TET、JOE、NED或TexasRed；所述淬灭基团
为TAMRA、BHQ、MGB或Dabcyl。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF135基因甲基化检测试剂用于检测ZNF135基因经转化试剂修饰后的序列；所述转化试剂是指使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶转化成为尿嘧啶，同时使5
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MeC基本上不受影响的试剂。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述转化试剂包括肼盐、重亚硫酸氢盐(例如重亚硫酸氢钠等)、亚硫酸氢盐(例如偏亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、亚硫酸氢铯、亚硫酸氢铵等)或在适当的反应条件下可产生肼盐、重亚硫酸氢盐、亚硫酸氢盐的化合物中的一种或几种的试剂。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述转化试剂为重亚硫酸氢盐。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术实施例中的重亚硫酸盐转化包括但不限于使用商用试剂盒转化、采用自制或购买得到的重亚硫酸盐进行转化。其中，重亚硫酸盐转化试剂盒由CT Conversion Reagent干粉、M
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Dissolving Buffer、M
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Dilution Buffer、M
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Binding Buffer、M
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Wash Buffer、M
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DesμLphonation Buffer、M
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Elution Buffer和MagBinding Beads组成，重亚硫酸盐转化试剂的制备方法包括以下步骤：将CT Conversion Reagent干粉加入水、M
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Dissolving Buffer和M
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Dilution Buffer，混匀至干粉完全溶解，
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20℃保存待用。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述水为无菌无酶水。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF135基因甲基化的检测试剂用于检测经重亚硫酸氢盐修饰后的序列。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，ZNF135基因甲基化的检测试剂所针对ZNF135基因的检测区域为ZNF135基因或者其启动子区域。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，ZNF135基因甲基化的检测试剂所针对ZNF135基因的检测区域为ZNF135基因的CG富集区域或非CG富集区域。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF135基因甲基化检测试剂所针对的检测区域为ZNF135基因的CG富集区域。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF135基因甲基化检测试剂所针对ZNF135基因的检测区域为如SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11所示的序列。ZNF135基因检测区域的选择会对肿瘤的检测效能产生影响，根据ZNF135基因不同CG富集区域设计的引物对检测结果有明显的差异。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，ZNF135基因甲基化的检测试剂还含有内参基因的检测试剂。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述内参基因为ACTB或GAPDH基因。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述内参基因为ACTB。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述含有内参基因的检测试剂含有SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示的引物对，以及SEQ ID NO：9的探针。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF135基因甲基化检测试剂的检测样本选自宫颈癌组织、血液、血清或血浆。
[0026]在本专利技术的第二方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒含有上述ZNF135基因甲基化检测试剂。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括PCR反应液，所述PCR反应液为TaqMa本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ZNF135基因甲基化检测试剂，其特征在于，所述ZNF135基因甲基化检测试剂包括：序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物；和/或序列如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物。2.根据权利要求1所述的ZNF135基因甲基化检测试剂，其特征在于，所述ZNF135基因甲基化检测试剂还包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：6所示的荧光探针序列。3.根据权利要求1所述的ZNF135基因甲基化检测试剂，其特征在于，所述ZNF135基因甲基化检测试剂还包括内参基因的检测试剂；优选地，所述的内参基因为ACTB或GAPDH；更优选地，所述的内参基因的检测试剂含有针对内参基因的引物和探针。4.根据权利要求1所述的ZNF135基因甲基化检测试剂，其特征在于，所述ZNF135基因甲基化检测试剂的检测样本选自宫颈癌组织、宫颈癌脱落细胞、血液、血清或血浆。5.一种试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1
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4任一项所述的ZNF135基因甲基化检测试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照选自SiHa细胞株、Caski细胞株和ME
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【专利技术属性】
技术研发人员：王煜，传军，朱碧银，陈可欣，颛孙丹丹，卜中鑫，赵展平，
申请(专利权)人：人和未来生物科技长沙有限公司，
类型：发明
国别省市：