ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用。本发明专利技术方案将ZNF781基因用于制备宫颈癌诊断试剂，扩增得到的目标序列短，扩增效率高，可用于准确检测宫颈癌，操作简单、快捷、低成本，适用于临床检测。适用于临床检测。

【技术实现步骤摘要】
ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，排在乳腺癌之后，其发病进程由正常宫颈细胞且发病率呈现年轻化趋势。99％的宫颈癌患者的宫颈脱落细胞中检测到人类乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)，因此宫颈高级病变和宫颈癌作为病因明确的疾病，可做到早预防、早干预；在HPV感染中，91％的HPV病毒为一过性感染可被自身免疫系统清除，正常的宫颈细胞经过癌前病变发展到浸润癌有5
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10年的潜伏期，因此早发现、早诊断、早治疗是预防宫颈癌的重要手段。
[0003]宫颈癌筛查以早期发现高级别癌前病变并进行阻断性治疗为目标，尽早筛查、及时发现和适当治疗是防治宫颈癌的重要手段。宫颈癌的筛查技术经历了几十年的发展，目前用于宫颈癌筛查的主要分为三种，一种是目测法，直接用肉眼观察经化学处理后细胞的变化，一种是采集宫颈脱落细胞，观察细胞形态学的变化，还有一种检测高危型HPV病毒。
[0004]目前临床上应用的宫颈癌筛查手段为女性健康做出了巨大贡献，同时也存在其不可避免的缺陷：首先，传统的细胞学筛查手段，包括巴士涂片及液基细胞学(TCT)，因为其整个过程包括取样、抹片制备、观察、结果判读等多个环节受人为因素影响较大，造成漏检几率较高。其次，近年兴起的病原学筛查HPV
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DNA检测技术，因其检测的仅是HPV病原存在与否，而HPV病毒的存在大部分是一过性的，也意味着这些被自身免疫清除掉的HPV感染者也会被判定为阳性，从而导致过度医疗。专利技术人期望挖掘出能与癌前病变紧密相关的分子指标，以弥补目前我国临床上应用的宫颈癌筛查手段中的不足。DNA的异常甲基化是肿瘤发生过程中的早期事件，寻找和研究疾病特异性的新甲基化标志物，可以为宫颈癌筛查、诊断和治疗提供新的思路。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用。
[0006]本专利技术还提出一种ZNF781基因甲基化的检测试剂。
[0007]本专利技术还提出一种含有上述ZNF781基因甲基化检测试剂的试剂盒。
[0008]本专利技术还提出一种上述ZNF781基因甲基化检测试剂或试剂盒的应用。
[0009]在本专利技术的一个方面，提出了ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF781基因为经甲基化的ZNF781基因。
[0011]在本专利技术的第二方面，提出了一种ZNF781基因甲基化的检测试剂，所述ZNF781基因甲基化检测试剂包括：序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物、序列如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物，和/
或序列如SEQ ID NO：7所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：8所示的反向引物。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF781基因甲基化检测试剂还包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和/或SEQ ID NO：9所示的荧光探针序列。所述SEQ ID NO：3所示的荧光探针序列为与如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物相匹配的荧光序列；所述SEQ ID NO：6所示的荧光探针序列为与如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物相匹配的荧光序列；所述SEQ ID NO：9所示的荧光探针序列为与如SEQ ID NO：7所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：8所示的反向引物相匹配的荧光序列
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述荧光探针序列的5
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端具有荧光基团，3
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端具有淬灭基团；所述荧光基团为VIC、ROX、FAM、Cy5、HEX、TET、JOE、NED或TexasRed；所述淬灭基团为TAMRA、BHQ、MGB或Dabcyl。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，ZNF781基因甲基化的检测试剂还含有内参基因的检测试剂；优选地，所述的内参基因为ACTB或GAPDH。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述的内参基因为ACTB。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述含有内参基因的检测试剂含有SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11所示的引物对，以及SEQ ID NO:12的探针。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂的样本选自宫颈癌组织、宫颈癌脱落细胞、血液、血清或血浆。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述ZNF781基因甲基化的检测试剂用于检测ZNF781基因经转化试剂修饰后的序列；所述转化试剂是指使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶转化成为尿嘧啶，同时使5
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MeC基本上不受影响的试剂。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述转化试剂包括肼盐、重亚硫酸氢盐(例如重亚硫酸氢钠等)、亚硫酸氢盐(例如偏亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、亚硫酸氢铯、亚硫酸氢铵等)、或在适当的反应条件下可产生肼盐、重亚硫酸氢盐、亚硫酸氢盐的化合物中的一种或几种。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述转化试剂为重亚硫酸氢盐试剂。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术实施例中的重亚硫酸盐转化包括但不限于使用商用试剂盒转化、采用自制或购买得到的重亚硫酸盐进行转化。其中，重亚硫酸盐商用试剂盒由CT Conversion Reagent干粉、M
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Dissolving Buffer、M
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Dilution Buffer、M
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Binding Buffer、M
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Wash Buffer、M
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DesμLphonation Buffer、M
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Elution Buffer和MagBinding Beads组成；重亚硫酸盐转化试剂的制备方法包括以下步骤：将CT Conversion Reagent干粉加入水、M
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Dissolving Buffer和M
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Dilution Buffer，混匀至干粉完全溶解，
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20℃保存待用。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述水为无菌无酶水。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述的ZNF781基因甲基化的检测试剂检测经重亚硫酸氢盐修饰后的序列。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，ZNF781基因甲基化的检测试剂所针对ZNF781基因的检测区域为ZNF781基因或者其启动子区域。
[0025]在本专利技术的一些实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ZNF781基因在制备宫颈癌诊断试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ZNF781基因为经甲基化的ZNF781基因。3.一种ZNF781基因甲基化的检测试剂，其特征在于，所述ZNF781基因甲基化检测试剂包括：序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物、序列如SEQ ID NO：4所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：5所示的反向引物，和/或序列如SEQ ID NO：7所示的正向引物和序列如SEQ ID NO：8所示的反向引物。4.根据权利要求3所述的ZNF781基因甲基化检测试剂，其特征在于，所述ZNF781基因甲基化检测试剂还包括核苷酸序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和/或SEQ ID NO：9所示的荧光探针序列。5.根据权利要求3所述的ZNF781基因甲基化检测试剂，其特征在于，所述ZNF781基因甲基化检测试剂还包括内参基因的检测试剂；优选地，所述的内参基因为ACTB或GAPDH；更优选地，所述的内参基因的检测试剂含有针对内参基因的引物和探针。6.一种试剂盒，其特征在于，含有如权利要求3
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5任一项所述的ZNF781基因甲基化检测试剂；优选地，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照选自SiHa细胞株、Caski细...

【专利技术属性】
技术研发人员：王煜，传军，朱碧银，陈可欣，颛孙丹丹，卜中鑫，赵展平，
申请(专利权)人：人和未来生物科技长沙有限公司，
类型：发明
国别省市：