一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法技术

本发明专利技术公开一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，包括以下步骤：(1)表达纯化得到突变型泛素或类泛素蛋白；所述突变型泛素的C末端为半胱氨酸，所述突变型类泛素蛋白的C末端甘氨酸对应的核苷酸序列突变为半胱氨酸对应的核苷酸序列；(2)表达纯化得到突变型的组蛋白八聚体；所述突变型的组蛋白八聚体在进行泛素化/类泛素化修饰位点上的赖氨酸突变为半胱氨酸；(3)利用化学交联剂，将突变型泛素或类泛素蛋白与突变型组蛋白八聚体在非变性条件下进行交联反应；(4)将化学交联反应产物进行标准色谱纯化。该方法利用化学交联方法直接在组蛋白八聚体水平上进行体外构建泛素化/类泛素化组蛋白八聚体。体外构建泛素化/类泛素化组蛋白八聚体。

【技术实现步骤摘要】
一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法


[0001]本专利技术涉及体外构建泛素化或类泛素化组蛋白八聚体，具体涉及一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法。

技术介绍

[0002]染色体是真核生物中携带遗传信息的主要载体，其基本结构单元是核小体。核小体由四种组蛋白(H2A、H2B、H3和H4)构成的八聚体和缠绕上面的147bp的DNA组成，核小体之间由linker DNA连接形成串珠状结构，经过多步压缩折叠形成染色体。表观遗传调控是一种不改变DNA序列的情况下，发生的基因表达可遗传的变化，主要包括DNA甲基化、X染色体失活、染色质重塑、组蛋白修饰等。
[0003]组蛋白修饰是非常重要的表观遗传调控之一，主要包括甲基化、磷酸化、乙酰化、乙酸化、sumo化和泛素化等。其中泛素化修饰占组蛋白修饰的16％左右，是组蛋白修饰中非常重要的一种翻译后修饰，其通过改变染色质结构或招募组蛋白修饰因子来影响基因表达。组蛋白的泛素化和去泛素化是基于组蛋白修饰的基因表观遗传调控的基质之一，它和组蛋白的其他修饰共同形成了“组蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)通过大肠杆菌感受态细胞表达纯化得到突变型泛素或类泛素蛋白；所述突变型泛素的C末端为半胱氨酸，所述突变型类泛素蛋白的C末端甘氨酸对应的核苷酸序列突变为半胱氨酸对应的核苷酸序列；(2)通过大肠杆菌感受态细胞表达纯化得到突变型的组蛋白八聚体；所述突变型的组蛋白八聚体在进行泛素化/类泛素化修饰位点上的赖氨酸突变为半胱氨酸；(3)利用化学交联剂，将突变型泛素或类泛素蛋白与突变型组蛋白八聚体在非变性条件下进行交联反应；(4)将化学交联反应产物进行标准色谱纯化，即可得到高纯度的泛素化或类泛素化组蛋白八聚体。2.根据权利要求1所述利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，所述步骤(3)中交联反应的具体步骤如下：将突变型泛素或类泛素蛋白和组蛋白八聚体在冰浴条件下混合均匀，再加入化学交联剂，以PBS作为缓冲液，在冰浴条件下进行交联反应，反应结束后加入还原剂终止反应，即得交联反应产物；所述化学交联剂是二氯丙酮或二溴丙酮。3.根据权利要求2所述利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，所述交联反应中，组蛋白八聚体、突变型泛素或类泛素蛋白和化学交联剂的摩尔比为1∶2～16∶2～32。4.根据权利要求3所述利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，其特征是，所述交联反应在1.5～2.5M氯盐的环境下进行；所述氯盐的阳离...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯宇驰，李维捷，徐朋奇，张影，何俊，
申请(专利权)人：深圳粒影生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：