一种糜蛋白酶提取生产工艺制造技术

发明专利技术公开了一种糜蛋白酶提取生产工艺，它依次包括酸浸提取、超滤浓缩、盐析结晶、酶原激活、除杂脱盐、亲和层析、浓缩干燥步骤；酶原激活步骤是将滤饼用去离子水溶解并加入240～260g氯化钙和0.2～0.3g激活剂，调整pH到7.5～8.5，在2～8℃温度条件下酶解，得到含有杂质的糜蛋白酶混合溶液；将糜蛋白酶混合溶液经过板框过滤、20KD超滤膜过滤、5KD的超滤膜，获得糜蛋白酶脱盐溶液；将糜蛋白酶脱盐溶液经过亲和层析，得到糜蛋白酶溶液。它生产成本低，糜蛋白酶生物活性和纯度高。酶生物活性和纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种糜蛋白酶提取生产工艺


[0001]本专利技术属于生物制药
，尤其是一种糜蛋白酶提取生产工艺。

技术介绍

[0002]糜蛋白酶是从牛胰腺或猪胰腺中分离纯化得到的一种蛋白酶。它在药理和临床上的功用主要有两方面：一是、消炎：对各种炎症、炎性水肿、血肿、溃疡及血栓等有较好疗效。二是、抗癌：能促进抗癌药物向病灶渗透，促使化疗药物发挥作用，有报道在抗癌增效上有效率超过50％，局部大剂量使用时作用更强。大剂量使用可治疗多种肿瘤，如乳腺癌、宫颈癌、胃癌等，并且无任何毒副作用或不良反应。
[0003]我国专利200610117613.9 公开了“高纯度糜蛋白酶的制备方法”，它采用酸浸、过滤、盐析和层析分离等步骤制备糜蛋白酶，其特征是以进口GE Health 凝胶介质为基础，接上慈菇蛋白酶抑制剂作为配基得到亲和层析介质。其缺点是凝胶介质昂贵，可重复使用次数少，产品收率低。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种糜蛋白酶提取生产工艺，该工艺生产成本低，可提高了糜蛋白酶生物活性和纯度。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糜蛋白酶提取生产工艺，它包括以下步骤：（1）酸浸提取：将牛胰腺粉碎、酸浸、过滤，得到胰腺提取液；（2）超滤浓缩：将牛胰腺提取液通过5KD超滤膜过滤，收集截流液，得到浓缩胰腺提取液；（3）盐析结晶：将浓缩胰腺提取液加入硫酸铵，经过结晶析出和过滤，得到含有糜蛋白酶原的滤饼；（4）酶原激活：将滤饼用3～5倍去离子水溶解成滤饼水溶液，在滤饼水溶液中，每公斤滤饼加入240～260g氯化钙和0.2～0.3g激活剂，用NaOH调整pH到7.5～8.5，在2 ～ 8℃温度条件下酶解；每隔60～100分钟监测溶液活性，当胰蛋白酶活力≥2000u/mg，并且糜蛋白酶活力≥400u/mg时，加入盐酸溶液调节pH到2～3，终止激活，得到含有杂质的糜蛋白酶混合溶液；（5）除杂脱盐：先将糜蛋白酶混合溶液通过板框过滤，滤除硫酸钙等沉淀物，得糜蛋白酶除杂溶液；再将糜蛋白酶除杂溶液通过分子量20KD超滤膜过滤，除去20000以上分子量的物质, 得糜蛋白酶净化溶液；然后将糜蛋白酶净化溶液通过分子量5KD的超滤膜和去离子水进行超滤脱盐，使膜内糜蛋白酶净化溶液电导率小于1200s/cm，获得糜蛋白酶脱盐溶液；（6）亲和层析：用DEAE琼脂糖凝胶介质装层析柱，用缓冲液进行平衡，平衡后用糜蛋白酶浓缩溶液直接上样，用缓冲液洗柱，洗至流出液OD280的值小于0.1，洗柱之后用洗脱液洗脱，收集洗脱峰，所得溶液即为糜蛋白酶溶液；（7）浓缩干燥：将糜蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文浩，包前德门，李相超，陈美欣，边静，
申请(专利权)人：赤峰市云淞科技发展有限责任公司，
类型：发明
国别省市：