一种可抑制蛋白酶体PSMB5亚基活性的短肽及其在抗立克次体感染中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种可抑制蛋白酶体PSMB5亚基活性的短肽及其在抗立克次体感染中的应用。本发明专利技术提供了短肽的应用，所述短肽序列如SEQ ID No.1所示。该应用为（1）制备蛋白酶体β5亚基活性抑制剂；（2）抑制蛋白酶体β5亚基活性；（3）制备治疗立氏立克次体所致疾病的药物；（4）治疗立氏立克次体所致疾病；（5）制备抗立氏立克次体感染的药物；（6）抗立氏立克次体感染。（6）抗立氏立克次体感染。

【技术实现步骤摘要】
一种可抑制蛋白酶体PSMB5亚基活性的短肽及其在抗立克次体感染中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种可抑制蛋白酶体PSMB5亚基活性的短肽及其在抗立克次体感染中的应用。

技术介绍

[0002]人泛素蛋白酶体系统（Ubiquitin
‑
proteasome system，UPS）是调节体内信号通路和免疫应答的关键因子，对于维持细胞稳态具有重要意义。其中真核细胞26S蛋白酶体（Proteasome）是由19S调节亚基和20S核心亚基组成的多亚基复合物，蛋白酶体 β5亚基（PSMB5亚基）是蛋白酶体20S核心亚基的组成部分，具有胰凝乳样蛋白酶活性，调控蛋白质体内稳态，在免疫应激下能够拓宽MHC
‑
I 类抗原肽范围。
[0003]立氏立克次体(Rickettsia rickettsii)作为一种革兰氏阴性染色的胞内寄生小杆菌，是斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsia, SFGR)中毒力最强的一个种，为落基山斑点热(Rocky Mountain Spotted Fever, RMSF)的病原菌。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一在于提供一种用于体内实验和体外实验中均可抑制人蛋白酶体PSMB5亚基的胰凝乳样蛋白酶活性的短肽，该短肽还可抑制立氏立克次体在人上皮细胞系中的繁殖。
[0005]本专利技术提供了短肽（下述也称为CirB
‑
30aa多肽）在如下任一中的应用，所述短肽序列如SEQ ID No.1所示，（1）制备蛋白酶体 β5亚基活性抑制剂；（2）抑制蛋白酶体 β5亚基活性；（3）制备治疗立氏立克次体所致疾病的药物；（4）治疗立氏立克次体所致疾病；（5）制备抗立氏立克次体感染的药物；（6）抗立氏立克次体感染。
[0006]可选地，根据上述的应用，所述立氏立克次体所致疾病为落基山斑点热。
[0007]本专利技术还提供了上述的短肽相关的生物材料在如下任一中的应用，（1）制备蛋白酶体 β5亚基活性抑制剂；（2）抑制蛋白酶体 β5亚基活性；（3）制备治疗立氏立克次体所致疾病的药物；（4）治疗立氏立克次体所致疾病；（5）制备抗立氏立克次体感染的药物；（6）抗立氏立克次体感染。
[0008]所述生物材料为如下任一种：
B1）编码上述短肽的核酸分子；B2）含有B1）所述核酸分子的表达盒；B3）含有B1）所述核酸分子的重组载体；B4）含有B2）所述表达盒的重组载体；B5）含有B1）所述核酸分子的重组微生物；B6）含有B2）所述表达盒的重组微生物；B7）含有B3）所述重组载体的重组微生物；B8）含有B4）所述重组载体的重组微生物。
[0009]可选地，根据上述的应用，B1）所述的核酸分子序列如SEQ ID No.2所示；B3）所述的重组载体序列如SEQ ID No.6所示。
[0010]可选地，根据上述的应用，所述立氏立克次体所致疾病为落基山斑点热。
[0011]抑制蛋白酶体 β5亚基活性具体可为抑制蛋白酶体 β5亚基（例如，人蛋白酶体 β5亚基）的胰凝乳样蛋白酶活性。抗立氏立克次体感染具体可为抑制立氏立克次体在宿主细胞（例如，人细胞）内生长繁殖。
[0012]上述的短肽也属于本专利技术的保护范围之内。
[0013]上述的生物材料也属于本专利技术的保护范围之内。
[0014]本专利技术还提供了一种药物，活性成分包括上述的短肽和/或上述的生物材料，所述药物具有如下任一用途：（1）抑制蛋白酶体 β5亚基活性；（2）治疗立氏立克次体所致疾病；（3）抗立氏立克次体感染。
[0015]可选地，根据上述的药物，所述立氏立克次体所致疾病为落基山斑点热。
[0016]上述短肽可由如下方法制备：(1)通过多肽合成的方法直接合成CirB的第91至120位，共30个氨基酸的序列（即SEQ ID No.1）；或(2)将CirB的第91至120位氨基酸的编码基因（例如，序列如SEQ ID No.2所示）克隆至pLVX
‑
IRES
‑
RFP或其他真核表达载体上，并转染真核细胞表达该短肽。
[0017]申请人研究发现专性细胞内寄生菌——贝氏柯克斯体在感染真核宿主细胞过程中分泌到宿主细胞质中的效应蛋白CirB，可通过其第91至120位的30个氨基酸（CirB
91
‑
120
，即CirB
‑
30aa）抑制人细胞蛋白酶体PSMB5亚基的胰凝乳样蛋白酶活性。
[0018]本专利技术实施例表明人工合成CirB
‑
30aa多肽，可在体外实验中抑制纯化的人蛋白酶体PSMB5亚基的胰凝乳样蛋白酶活性；在人上皮细胞系（Hela）中转染表达CirB
‑
30aa的真核表达质粒，可长时间抑制蛋白酶体PSMB5亚基胰凝乳样蛋白酶活性，且与已上市的PSMB5亚基抑制剂——硼替佐米相比，毒副作用更低；在人上皮细胞系（Hela）中转染表达CirB
‑
30aa的真核表达质粒，可抑制立氏立克次体在宿主细胞内生长繁殖。
[0019]本专利技术提供了一种由30个氨基酸组成的短肽，合成该短肽可在体外实验中抑制人蛋白酶体PSMB5亚基的胰凝乳样蛋白酶活性；用编码该短肽的真核表达质粒转染人细胞系，可长时间抑制蛋白酶体PSMB5亚基胰凝乳样蛋白酶活性，进而抑制细胞内立氏立克次体的繁殖。
附图说明
[0020]图1为合成的短肽与纯化的人蛋白酶体共混后，短肽抑制人蛋白酶体PSMB5亚基的胰凝乳样蛋白酶活性的（A）时间依赖性检测和（B）剂量依赖性检测。
[0021]图2为质粒转染细胞的短肽表达效率检测（A）荧光检测和（B）Westernblot检测。
[0022]图3为质粒转染Hela细胞后，抑制人蛋白酶体PSMB5亚基的胰凝乳样蛋白酶活性的（A）剂量依赖检测（B）时间依赖检测和（C）硼替佐米对照。
[0023]图4为质粒转染Hela细胞后，细胞活力的（A）剂量依赖检测、（B）时间依赖检测和（C）硼替佐米对照。
[0024]图5为质粒转染细胞后，对细胞中立氏立克次体胞内繁殖的抑制效率检测。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0026]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0027]Hela细胞系购自南京科佰，货号CBP60232。Hela细胞采用DMEM培养基+10%（体积百分比）胎牛血清培养。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 短肽在如下任一中的应用，所述短肽序列如SEQ ID No.1所示，（1）制备蛋白酶体 β5亚基活性抑制剂；（2）抑制蛋白酶体 β5亚基活性；（3）制备治疗立氏立克次体所致疾病的药物；（4）治疗立氏立克次体所致疾病；（5）制备抗立氏立克次体感染的药物；（6）抗立氏立克次体感染。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述立氏立克次体所致疾病为落基山斑点热。3.权利要求1所述的短肽相关的生物材料在如下任一中的应用，（1）制备蛋白酶体 β5亚基活性抑制剂；（2）抑制蛋白酶体 β5亚基活性；（3）制备治疗立氏立克次体所致疾病的药物；（4）治疗立氏立克次体所致疾病；（5）制备抗立氏立克次体感染的药物；（6）抗立氏立克次体感染；所述生物材料为如下任一种：B1）编码权利要求1所述短肽的核酸分子；B2）含有B1）所述核酸分子的表达盒；B3）含有B1）所述核酸分子的重组载体；B4）含有B2）...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊小路，付梦姣，张家宁，焦俊，欧阳譞，于永慧，戴璐鹏，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：