一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法技术

本发明专利技术公开了一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法，包括以下步骤：（a）标准品溶液配制：精密称定不同分子量的标准品，置容量瓶中，加入稀释剂定容，摇匀，进液相相分析；(b)供试品溶液配制：精密称取聚烯丙胺盐酸盐，置于容量瓶中，稀释剂定容稀释，摇匀，进液相相分析；(c)根据软件拟合线性标准曲线方程，并计算出聚烯丙胺盐酸盐的数均分子量及重均分子量。本发明专利技术测定方法操作简单，快速，准确度高，回收率好，灵敏度高，重现性好。对聚合物反应监控有重要的现实意义。聚合物反应监控有重要的现实意义。聚合物反应监控有重要的现实意义。

【技术实现步骤摘要】
一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法


[0001]本专利技术涉及化学分析领域，具体涉及一种凝胶色谱测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布。

技术介绍

[0002]聚烯丙胺盐酸盐为药物碳酸司维拉姆的重要中间体，碳酸司维拉姆是一种新颖的磷酸根结合剂，不含钙和铝是其突出的优点，并且不会被身体吸收，长期使用安全性好。适用于正在透析治疗的肾病晚期患者或高磷血症患者，降低血清磷水平而不引起高钙血症。而聚烯丙胺的聚合反应程度对后续交联反应有较大影响。
[0003]聚烯丙胺盐酸盐的合成为烯丙基盐酸盐在偶氮化合物的催化下，发生聚合反应，形成聚丙烯胺盐酸盐聚合物。反应过程如下图
[0004][0005]由于聚合反应过程复杂，聚烯丙胺盐酸盐的聚合程度直接影响下一步交联反应的空间结构，从而影响到最终药物的药效。
[0006]聚烯丙胺盐酸盐分子量及分子分布研究较少，至今没有聚烯丙胺盐酸盐分子量及分子分布的标准物质及检测方法，也没有公开的专利，满足不了企业对大生产中中间体检测放行的要求。

技术实现思路

[0007]聚烯丙胺盐酸盐在聚合反应过程中，其分子量范围跨越几个数量级，凝胶色谱法是理想的分析方法之一。本专利技术提供了一种串联凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐分子量及分子分布的方法，不同类型对照品的选择有效的扩大了分子量测定范围，提高了聚烯丙胺盐酸盐分子量及分子分布检测的准确度和便捷性。
[0008]为达到上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：
[0009]一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐分子量及分子分布的方法，包括以下步骤：
[0010](a)标准品溶液配制：
[0011]精密称定不同分子量的标准品，置容量瓶中，加入稀释剂定容，摇匀，进液相相分析；
[0012](b)绘制标准曲线
[0013]将不同分子量的标准品溶液进行色谱分析，记录保留时间，绘制线性曲线方程，计算r值；
[0014](c)供试品溶液配制：
[0015]精密称取聚烯丙胺盐酸盐，置于容量瓶中，稀释剂定容稀释，摇匀，进液相相分析；
[0016](d)样品溶液测定：
[0017]将样品溶液进行色谱分析，得到色谱图，通过标准曲线计算不同保留时间下的聚烯丙胺盐酸盐的分子量，得到聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布。
[0018]所述色谱分析条件为：
[0019]色谱柱：Shodex OHpak SB
‑
804HQ2支串联；
[0020]检测器：示差折光检测器；
[0021]流动相：0.4～0.6mol/L氯化钠水溶液；
[0022]流速：0.6～1mL/min；
[0023]柱温：25～40℃；
[0024]检测器温度：30～45℃；
[0025]进样量：5～10μL。
[0026]所述凝胶色谱的标准曲线是采用取分子量108、590、3070、10300、21600的聚乙二醇标样33600、101200、246600的聚氧化乙烯标样，配成标准溶液；再利用标准溶液绘制标准曲线。为了保证拟合度好，可以采取更多的标准点来测试方法的边界，具体实际应用时，可以根据检测对象的分子量范围，以及成本和时间的考虑，选择其中一部分分子量分布来绘制标准曲线。
[0027]例如，本专利技术的两个实施例中采用取分子量590、3070、10300、21600的聚乙二醇标样、33600、10120的聚氧化乙烯标样，配成标准溶液；再利用标准溶液绘制标准曲线。
[0028]所述稀释剂为0.2～1.0mol/L氯化钠水溶液，氯化钠水溶液中含1％乙酸。优选为：0.3～0.6mol/L氯化钠水溶液(含1％乙酸)，更优选地为0.3～0.5mol/L氯化钠水溶液(含1％乙酸)；进一步优选为0.5mol/L氯化钠水溶液，含1％乙酸。
[0029]所述标准曲线是以标准品线性溶液中主峰的保留时间为横坐标，以分子量对照品的Mp值为纵坐标，进行拟合而得。
[0030]作为优选，样品进行凝胶色谱测试时，待测溶液浓度为5
‑
10mg/mL。
[0031]作为优选，凝胶色谱条件中色谱流动相优选为0.5mol/L氯化钠水溶液(含1％乙酸)；流动相流速为1mL/min。
[0032]作为优选，凝胶色谱条件中凝胶色谱柱温为30℃；检测器温度为35℃。
[0033]作为优选，凝胶色谱条件中样品进样量为10μL。
[0034]本专利技术通过Shodex OHpak SB
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804HQ2支串联以及流动相的选择，实现了聚烯丙胺分子量及分子量分布的测定，当采用不同pH乙酸钠水溶液作为流动相时，方法的重现性不佳，可能由于环境变化(室温等)或者流动相离子强度不足导致。而采用氯化钠水溶液(含1％乙酸)时方法重现性好。本专利技术可检测分子量检测范围为108～246600。
[0035]有益效果：
[0036]本专利技术通过Shodex OHpak SB
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804HQ2支串联以及流动相的选择，实现了聚烯丙胺分子量及分子量分布的测定，在该色谱条件下能够便捷、快速的实现不同分子量的聚烯丙胺盐酸盐的分离，经实验验证，本专利技术方法峰形好、分子量检测范围108～246600，范围广，在600～104700分子量区间内重现性高、分离度好、准确度高。
附图说明
[0037]图1为本专利技术实例2中聚烯丙胺盐酸盐标准液相图谱。
[0038]图2为本专利技术实例中2中对照品拟合标准曲线谱图。
[0039]图3为本专利技术对实施例1中流动相改变pH的对比图谱。
[0040]图4为本专利技术对比方案1中图谱。
[0041]图5为本专利技术对比方案2中对照品和供试品重叠图谱。
[0042]图6为本专利技术对比方案3中对照品拟合标准曲线谱图。
[0043]图7为本专利技术对实施例1中流动相改变盐浓度的对比图谱。
具体实施方式
[0044]以下各实施例中所使用试剂均为购买，直接使用。
[0045]实施例1
[0046]考察流动相盐浓度、pH对供试品溶液中主峰峰形的影响
[0047]溶液配制
[0048]稀释剂1：0.12mol/L乙酸钠水溶液(加乙酸调pH至4.5)
[0049]取聚烯丙胺盐酸盐6.63mg，置进样小瓶，加1.5ml稀释剂1溶解，混匀，配制成终浓度为5mg/ml的供试品溶液；
[0050]稀释剂2：0.2mol/L乙酸钠水溶液(加乙酸调pH至4.5)
[0051]取聚烯丙胺盐酸盐4.58mg，置进样小瓶，加1.0ml稀释剂2溶解，混匀，配制成终浓度为5mg/ml的供试品溶液；
[0052]稀释剂3：0.3mol/L乙酸钠水溶液(加乙酸调pH至4.5)
[0053]取聚烯丙胺盐酸盐5.59mg，置进样小瓶，加1.0ml稀释剂3溶解，混匀，配制成终浓度为5mg/ml的供试品溶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）配制标准品溶液将不同分子量的标准品用稀释剂溶解，得标准品溶液，标准品浓度为5~10mg/mL；（2）绘制标准曲线将不同分子量的标准品溶液进行色谱分析，记录保留时间，绘制线性曲线方程，计算r值；（3）配制样品溶液将聚烯丙胺盐酸盐用稀释剂溶解，配置成浓度为5~10mg/mL的样品溶液；（4）样品溶液测定：将样品溶液进行色谱分析，得到色谱图，通过标准曲线计算不同保留时间下的聚烯丙胺盐酸盐的分子量，得到聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布。2.根据权利要求1所述的一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法，其特征在于：步骤1）中所述不同分子量的标准品分别为分子量108、590、3070、10300、21600的聚乙二醇标样，分子量33600、101200、246600的聚氧化乙烯中的任意几种组合。3.根据权利要求1所述的一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法，其特征在于：所述稀释剂为0.2~1.0 mol/L氯化钠水溶液，氯化钠水溶液中含1%乙酸。4.根据权利要求1所述的一种凝胶色谱法测定聚烯丙胺盐酸盐的分子量及分子分布的方法，其特征在于：所述色谱柱为Shodex OHpak SB
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804HQ2支串联。...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾霞，胡振宇，向威，
申请(专利权)人：江苏恒盛药业有限公司，
类型：发明
国别省市：