一种测定蜂产品中克百威及其代谢物3-羟基克百威残留检测方法技术

本发明专利技术公开了一种测定蜂产品中克百威及其代谢物3

【技术实现步骤摘要】
一种测定蜂产品中克百威及其代谢物3
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羟基克百威残留检测方法


[0001]本专利技术涉及蜂产品检测
，更具体地说，它涉及一种测定蜂产品中克百威及其代谢物3
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羟基克百威残留检测方法。

技术介绍

[0002]克百威又名呋喃丹，是一种高效、高毒的杀虫、杀螨和杀线虫农药，克百威及其代谢物对病虫害的作用机理是具有不可逆的抑制胆碱酯酶作用,对多种病虫害防治作用显著,目前，克百威及其代谢物在防治农作物病虫害，控制人畜传染病，提高农畜禽产品产量与质量方面起到举足轻重的作用。但是，由于克百威及其代谢物具有不可逆的抑制胆碱酯酶作用机理。在玉米、小麦等饲料作物中的克百威及其代谢物的残留可经过养殖动物摄入并通过食物链进入禽畜及人体体内富集累积，从而对禽畜及人体健康、生态环境造成危害。
[0003]在国标GB2763
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2021标准中克百威残留量按“克百威及3
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羟基克百威之和，以克百威表示”的规定，另外我国农业部235号公告附录4规定克百威为禁止在动物中使用的药物；欧盟(EU)2015/399 规定，蜂及蜂产品中限量为0.05*mg/kg。
[0004]目前，对包括克百威在内的氨基甲酸酯类杀虫剂残留的分析方法较多，主要有酶联免疫吸附法、液相色谱法、气相色谱质谱法和液相色谱串联质谱法等，然而，其中蜂产品的氨基甲酸酯类杀虫剂分析方法较少，且较多方法并未同时测定克百威的代谢产物3
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羟基克百威，导致这些方法在实际使用中受到限制。现行检测动物性食品中克百威的方法主要有GB31658.10
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2021《动物性食品中氨基甲酸酯类杀虫剂残留量的测定液相色谱一串联质谱法》，GB/T5009.163
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2003《动物性食品中氨基甲酸酯类农药多组分残留高效液相色谱测定》，SN/T 2560
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2010《进出口食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定液相色谱
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质谱/质谱法》，所适用范围均没涉及蜂产品。GB23200.99
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2016《蜂王浆中多种氨基甲酸酯类农药残留量的测定液相色谱
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质谱/质谱法》，则只测克百威原药，没有测代谢物3
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羟基克百威。
[0005]蜂产品中克百威和其代谢物3
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羟基克百威的检测研究相对比较少，所涉文献的前处理方法，多是采用固相萃取法，净化过程中，提取液经过固相萃取柱净化，耗费溶剂量相对较大，耗时较长，难以满足大批量样品检测的需求。
[0006]通过本专利技术，主要解决了现在标准中缺少蜂产品中克百威和其代谢物3
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羟基克百威检测的问题。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种测定蜂产品中克百威及其代谢物3
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羟基克百威残留的方法，本专利技术主要是采用QuEChERS前处理方法。试样用乙腈提取，通过分散固相萃取净化，采用液相色谱
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质谱/质谱仪检测，外标法定量。同时QuEChERS前处理方法，操作简便，成本低，耗费溶剂量少，环境友好，能满足大批量样品检测的需求。
[0008]本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种测定蜂产品中克百
威及其代谢物3
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羟基克百威残留检测方法，包括以下步骤方法，S1：试样的制备与保存；取蜂蜜、蜂王浆和蜂胶各500g；无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀，有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，待蜂蜜样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温，装入洁净容器中，密封并做好标记，室温避光保存；
[0009]将蜂王浆搅拌均匀，装入洁净容器中，密封并做好标记，在
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18℃以下条件保存；将蜂胶在
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20℃冷冻后捣碎，充分混匀，装入洁净容器中；密封并做好标记，在
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18℃以下保存。
[0010]S2：样品提取；称取蜂蜜、蜂王浆2g，分别置于50mL离心管中，加5mL水，涡旋混合器混匀1min,静置5min；加入10mL乙腈，涡旋混匀1min,摇床提取10min,加入2
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3g氯化钠涡旋混匀1min， 4000r/min下离心5min,各取出1mL上清液为蜂蜜待净化液、蜂王浆待净化液；
[0011]称取蜂胶0.2g于50mL离心管中,加入10mL乙腈,涡旋混匀1min, 置超声仪提取10min，加入10mL0.5％Ca(OH)2水溶液，涡旋混匀 2min后再加4
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6g氯化钠，涡旋混匀2min,0℃条件下10000r/min 离心10min，取出4mL上清液为蜂胶待净化液；
[0012]S3：净化；取步骤S2中的蜂蜜待净化液、蜂王浆待净化液，分别转移至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中,涡旋混匀1min 后，12000r/min离心5min；离心后分别取上清液过0.22μm有机相型微孔滤膜，供LC
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MS/MS(液相色谱
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质谱/质谱)测定；取蜂胶待净化液全部转移至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中，涡旋混匀后以12000r/min离心5min；准确吸取2mL上清液至氮吹管，45℃水浴氮吹至干后立即加入1mL乙腈复溶，涡旋混匀后过0.22μm有机相微孔滤膜，供LC
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MS/MS测定；
[0013]S4:标准工作曲线的绘制；取空白样品按照S2及S3处理；用所得的样品溶液将克百威和3
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羟基克百威混合标准溶液稀释得到的混合标准工作液，按浓度由低到高的顺序进样检测，以定量离子峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线；
[0014]S5:结果计算；对标准工作溶液和样液等体积进样测定，待测样液中克百威和3
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羟基克百威的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析，根据标准曲线及供试品的峰面积，计算供试品中克百威和其代谢物3
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羟基克百威的含量。
[0015]本专利技术进一步设置为：所述步骤S3中，在塑料离心管中的除水剂和净化材料为无水硫酸镁、PSA和C
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；每1毫升蜂蜜待净化液、蜂王浆待净化液或蜂胶待净化液塑料离心管中需要使用150mg无水硫酸镁，50mgPSA和50mgC
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进行净化。
[0016]本专利技术进一步设置为：所述步骤S3中的LC
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MS/MS(液相色谱
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质谱/质谱)测定，液相色谱使用的色谱柱为C
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色谱柱,C
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色谱柱为 150mm
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2.1mm(内径),粒径2.6μm；使用的流动相为A:甲醇、 B:5mmol/L甲酸铵
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0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.3mL/min；进样量为2μL；柱温为45℃；梯度洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定蜂产品中克百威及其代谢物3
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羟基克百威残留检测方法，其特征是，包括以下步骤方法：S1：试样的制备与保存；取蜂蜜、蜂王浆和蜂胶各500g；无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀，有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，待蜂蜜样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温，装入洁净容器中，密封并做好标记，室温避光保存；将蜂王浆搅拌均匀，装入洁净容器中，密封并做好标记，在
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18℃以下条件保存；将蜂胶在
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20℃冷冻后捣碎，充分混匀，装入洁净容器中；密封并做好标记，在
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18℃以下保存。S2：样品提取；称取蜂蜜、蜂王浆2g，分别置于50mL离心管中，加5mL水，涡旋混合器混匀1min,静置5min；加入10mL乙腈，涡旋混匀1min,摇床提取10min,加入2
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3g氯化钠涡旋混匀1min，4000r/min离心5min,各取出1mL上清液为蜂蜜待净化液、蜂王浆待净化液；称取蜂胶0.2g于50mL离心管中,加入10mL乙腈,涡旋混匀1min,置超声仪提取10min，加入10mL 0.5％Ca(OH)2水溶液，涡旋混匀2min后再加4
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6g氯化钠，涡旋混匀2min,0℃条件下10000r/min离心10min，取出4mL上清液为蜂胶待净化液；S3：净化；取步骤S2中的蜂蜜待净化液、蜂王浆待净化液，分别转移至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中,涡旋混匀1min后，12000r/min离心5min；离心后分别取上清液过0.22μm有机相型微孔滤膜，供LC
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MS/MS(液相色谱
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质谱/质谱)测定；取蜂胶待净化液全部转移至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中，涡旋混匀后以12000r/min离心5min；准确吸取2mL上清液至氮吹管，45℃水浴氮吹至干后立即加入1mL乙腈复溶，涡旋混匀后过0.22μm有机相微孔滤膜，供LC
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MS/MS测定；S4:标准工作曲线的绘制；取空白样品按照S2及S3处理；用所得的样品溶液将克百威和3
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羟基克百威混合标准溶液稀释得到的混合标准工作液，按浓度由低到高的顺序进样检测，以定量离子峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎天勇，席静，李菊，王岚，王璐，徐娟，李志勇，
申请(专利权)人：广州海关技术中心，
类型：发明
国别省市：