还原酶以及制备和使用还原酶的方法技术

本公开内容提供了与天然存在的野生型酮还原酶相比具有改进的性质的酮还原酶，所述改进的性质包括还原N

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】还原酶以及制备和使用还原酶的方法


[0001]本专利技术涉及酮还原酶，其在涉及酮还原为手性醇的生物催化和合成过程中是有用的。此类酶在制备核苷和核苷酸(如氟化核苷酸)中可能特别有用。
[0002]针对以电子方式提交的序列表
[0003]本申请的序列表以ASCII格式的序列表形式通过EFS
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Web以电子方式提交，文件名为“24998WOPCT
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SEQTEXT
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14MAY2021.txt”，创建日期为2021年05月14日，大小为24KB。通过EFS
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Web提交的序列表是本说明书的一部分，并且其全部内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0004]酶是用于加速活细胞的化学反应(通常是几个数量级)的蛋白分子。如果没有酶，大多数生化反应都会太慢，甚至无法进行生命过程。酶显示出很强的特异性，并且不会因参与反应而永久改变。由于酶在反应过程中不发生变化，因而可以成本有效地用作所需化学转化的催化剂。
[0005]酮还原酶，也称为醇脱氢酶，是一种酶促还原剂，其是一类特殊的酶，催化酮选择性还原为手性醇。属于酮还原酶或羰基还原酶的酶可用于合成光学活性醇。酮还原酶可以选择性地将酮或醛底物转化为相应的手性醇产物；这些酶也可以在逆反应中将醇转化为相应的酮或醛。酮和醛的酶促还原需要一个可以充当电子供体的辅因子的参与，而醇的酶促氧化需要一个能够充当电子受体的辅因子的参与。
[0006]酮还原酶在自然界中是众所周知的，并且已报道了很多编码酮还原酶的基因和酮还原酶序列。参见，例如，木兰假丝酵母(Candida magnoliae)(Genbank登录号JC7338；GI:11360538)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)(Genbank登录号10BAA24528.1；GI:2815409)、赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolor)(Genbank登录号AF160799；GI:6539734)和红串红球菌(Rhodococcus erythropolis)(Genbank登录号AAN73270.1；GI:34776951)。
[0007]酮还原酶被越来越多地用于提供关键化合物的替代合成途径。当使用时，酮还原酶可以作为纯化的酶或作为表达所需酮还原酶的整个细胞提供。鉴于其改善合成途径的前景，仍然需要鉴定可用于进行转化以制备特定手性醇的其他酮还原酶。

技术实现思路

[0008]本公开内容涉及能够将酮转化为手性醇的酮还原酶，特别是作为核苷酸合成的一部分的酮还原酶。在实施方式中，本文所述的主题酮还原酶能够在氟核苷酸的合成中将酮转化为手性醇。特别地，本文所述的主题酮还原酶可用于制备氟化核苷，如(O
‑
{[(2R,3S,4S,5R)
‑5‑
(2
‑
氨基
‑6‑
氧化
‑
9H
‑
嘌呤
‑9‑
基)
‑3‑
氟
‑4‑
羟基氧杂环戊烷
‑
2基]甲基}硫代磷酸三钠水合物(1：6))，也称为3
’‑
氟硫代鸟苷一磷酸或3
’‑
F
‑
硫代
‑
GMP。此类氟化核苷可用作生物活性化合物或用作合成更复杂的生物活性化合物的中间体。.
[0009]其他实施方式描述了用于制备主题酮还原酶的方法以及使用主题酮还原酶的方
法。
[0010]本专利技术的其他实施方式、方面和特征在随后的说明书、实施例和所附权利要求书中进一步描述或者将是显而易见的。
附图说明
[0011]图1描述了SDS
‑
PAGE凝胶，其显示了从冻干酶制剂中去除IPA不容性蛋白。
具体实施方式
[0012]定义
[0013]某些技术和科学术语具体定义如下。出非在本文其他地方特别定义，否则本文中使用的所有其他技术和科学术语具有本公开内容涉及的本领域普通技术人员通常理解的含义。尽管有并且出非另有说明，否则以下定义适用于整个说明书和权利要求。化学名、通用名和化学结构可以互换使用来描述相同的结构。如果同时使用化学结构和化学名来指化合物，并且结构和名称之间存在歧义，则以结构占优势。除非另有说明，否则无论术语是单独使用还是与其他术语结合使用，这些定义都适用。因此，“烷基”的定义适用于“烷基”以及“羟基烷基”、“卤代烷基”、
“‑
O
‑
烷基”等的“烷基”部分。
[0014]如本文所用，以及贯穿本公开内容，出非另有说明，否则以下术语应理解为具有以下含义：
[0015]如本文所用，包括所附权利要求，单词的单数形式，如“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”，包括其对应的复数引用，除非上下文另有明确规定。特别地，“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”项目各自包括从列表中选择的单个项目以及从列表中选择的两个或更多个项目的混合。
[0016]如本文所用，术语“至少一个”项目或“一个或多个”项目各自包括从列表中选择的单个项目以及从列表中选择的两个或更多个项目的混合。例如，“至少一种酮还原酶型酶”(或者称为“酮还原酶型酶”)指单一酮还原酶型酶以及两种或更多种不同酮还原酶型酶的混合物。类似地，术语“至少两个”项目和“两个或更多个”项目各自包括从列表中选择的两个项目的混合以及从列表中选择的三个或更多个项目的混合。
[0017]在整个说明书和权利要求中使用的“基本上由
……
组成(Consists essentially of)”和诸如“基本上由
……
组成(consist essentially of)”或“基本上由
……
组成(consisting essentially of)”的变体表示包含任何列举的要素或要素的组，以及任选地包含其他要素，其与所列举的要素具有相似或不同的性质，不会实质性地改变给定给药方案、方法或组合物的基本或新性质。
[0018]在整个说明书和权利要求中，词语“包括(comprise)”，或诸如“包含(comprises)”或“含有(comprising)”的变体将被理解为暗示包含所陈述的要素或要素的组，但不排除任何其他要素或要素的组。在整数的情况下，单词“包括(comprise)”，或诸如“包含(comprises)”或“含有(comprising)”的变体将被理解为暗示包含指定的整数或整数的组，但不排除任何其他整数或整数的组。除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，复数术语应包括单数。术语“例如(e.g.)”或“例如(for example)”后的任何一个或多个实例并不意味着详尽或限制。应当理解，在本文中使用语言“包括(comprising)”来描述实施方式
的任何地方，也提供了以“由<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多肽，其中所述多肽包含与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10或11中的任一项具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性。3.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:3具有至少90％序列同一性。4.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:4具有至少90％序列同一性。5.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:5具有至少90％序列同一性。6.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。7.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性。8.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性。9.根据权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID NO:9具有至少90％序列同一性。...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：默沙东有限责任公司，
类型：发明
国别省市：