BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用，属于分子生物学和肺癌治疗技术领域。本发明专利技术通过生物信息技术分析得出BTG2基因的mRNA在肺腺癌组织中的表达低于正常肺组织，预后分析中肺腺癌患者BTG2基因高表达者的总体生存率显著高于低表达者；通过生物学实验得出BTG2蛋白在肺腺癌A549细胞中低表达，且BTG2基因的过表达导致A549细胞周期在G1期出现停滞；同时，BTG2过表达后A549细胞内表达下调的基因与细胞周期信号通路相关，以上结果表明BTG2在肺腺癌中可能发挥抑癌基因的作用。因此BTG2基因有望作为肺腺癌生物标志物、治疗靶点应用于肺腺癌治疗。应用于肺腺癌治疗。

【技术实现步骤摘要】
BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用


[0001]本专利技术涉及一种用于治疗非小细胞肺癌的生物标志物，具体涉及BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用，属于分子生物学和肺癌防治


技术介绍

[0002]肺癌是最常见的癌症类型之一。约85％的肺癌病例属于非小细胞肺癌的诊断范围。肺腺癌是非小细胞肺癌最普遍的一种，其发病率高，预后较差。约85％患者诊断为晚期或转移性疾病，是导致肺腺癌预后不良的重要因素。因此，探究灵敏、特异的早期肺腺癌生物标志物和有效的治疗靶点，是当前研究的迫切需要。
[0003]B细胞易位基因2(BTG2)是抗增殖基因BTG/TOB家族中的一员，在多种物种高度保守，参与细胞生长调控。BTG2在脾脏、胸腺、肺、胃、大肠等多种器官和组织中均有表达，在肺、肠、胰腺、前列腺等正常组织中呈现高表达。研究表明，BTG2可抑制细胞生长，促进细胞凋亡或抑制细胞增殖，在肿瘤的发生、发展中可能作为一种抗增殖基因发挥作用。
[0004]因此，BTG2可能作为抑癌基因成为治疗肺腺癌的新的辅助手段。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是：克服现有技术中存在的不足，提供BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用，通过生物学实验得出BTG2基因的过表达导致肺腺癌细胞的细胞周期停滞，表明BTG2基因在肺腺癌中可能发挥抑癌基因的作用，因此BTG2基因有望作为肺腺癌生物标志物、治疗靶点应用于肺腺癌治疗。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用。
[0007]BTG2基因的mRNA表达应用在肺腺癌预后相关性分析中。
[0008]所述BTG2基因的mRNA在肺腺癌组织中的表达低于正常肺组织，预后相关性分析中BTG2基因在肺腺癌患者中高表达者的总体生存率优于低表达者。
[0009]BTG2蛋白在肺腺癌A549细胞中低表达。
[0010]BTG2基因的过表达应用在肺腺癌细胞周期抑制中，并呈现G1期抑制。
[0011]BTG2基因过表达的A549细胞内多个显著低表达的基因与细胞周期信号通路相关，相关基因为R
‑
HAS
‑
1640170。
[0012]所述BTG2基因可能通过抑制细胞周期的进展发挥抑癌基因的作用，有望作为肺腺癌生物标志物、治疗靶点应用于肺腺癌治疗。
[0013]本专利技术的有益效果是：
[0014]1)本专利技术经生物信息学分析得出BTG2基因的mRNA在肺腺癌组织中的表达低于正常肺组织；预后相关性分析中BTG2基因在肺腺癌患者中高表达者的总体生存率优于低表达者，可将BTG2基因的mRNA表达应用在肺腺癌预后相关性分析中。
[0015]2)本专利技术经生物学实验得出BTG2蛋白在肺腺癌A549细胞中低表达，BTG2基因过表
达的A549细胞内出现细胞周期G1期抑制；且BTG2基因过表达的A549细胞内表达下调的基因与细胞周期信号通路相关，以上结果表明BTG2在肺腺癌中可能发挥抑癌基因的作用，因此可将BTG2基因应用在肺腺癌细胞周期抑制中。
附图说明
[0016]图1为本专利技术中采用生物信息学技术分析肺腺癌中BTG2基因的表达；
[0017]图2为本专利技术中采用生物信息学技术分析LUAD患者生存率与BTG2之间的相关性；
[0018]图3为本专利技术中长度为477bp的BTG2基因的编码序列；
[0019]图4为本专利技术中单克隆挑取法建立的BTG2基因高表达细胞株；
[0020]图5为本专利技术中BTG2基因过表达的A549细胞内显著低表达的基因与细胞周期信号通路的相关性；
[0021]图6为本专利技术中BTG2基因过表达的A549细胞周期的检测结果。
具体实施方式
[0022]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步的解释说明。
[0023]下列实施例中涉及到的材料和方法如下：
[0024]1、肺腺癌组织中BTG2基因的mRNA表达与预后的相关性分析的材料与方法：
[0025]11)从TCGA数据库(https://cancergenome.nih.gov/)中获得人类肺腺癌样本和正常组织相关的转录组数据；
[0026]12)利用RStudio软件的DESeq2包和edgeR包，对数据库中的594个肺腺癌病人转录组数据标准化；
[0027]13)采用limma包对标准化的肺腺癌病人转录组数据进行差异基因表达分析，设置差异显著基因的阈值为：p<0.05且|log2 Fold change|≥1.0；
[0028]14)利用survival包和survminer包，对肺腺癌病人的生存期进行分析，生成Kaplan
‑
Meier生存曲线，并通过long
‑
rank检验进行预后相关性分析。
[0029]实验结果：
[0030]对TCGA数据库肝癌数据样本的分析结果表明，如图1所示，BTG2基因在肺腺癌组织中的表达显著低于正常肺组织。
[0031]如图2所示，预后分析发现，BTG2基因在肺腺癌患者中高表达者预后明显优于低表达者。
[0032]2、稳定细胞株的建立，实验材料与方法：
[0033]21)细胞系及培养：肺腺癌A549细胞生长在含有10％胎牛血清的1640培养基中，在37℃和5％CO2的培养箱中培养；
[0034]22)BTG2过表达质粒的构建：将长度为477bp的BTG2基因编码通过限制性内切酶EcoRI和XhoI克隆至pcDNA3.1+质粒中，BTG2基因的编码序列如图3所示；
[0035]23)细胞转染：利用脂质体Lipofectamine 2000将过表达质粒转染入A549细胞中，用嘌呤霉素筛选稳定表达BTG2的细胞株，收获各细胞株后提取蛋白，利用Western blot实验检测BTG2蛋白的表达情况。
[0036]实验结果：
[0037]Western blot实验结果显示，BTG2蛋白在A549细胞低表达，如图4所示，A549 BTG2
‑
1细胞株内BTG2表达水平良好，选择此细胞株开展后续的实验，A549 BTG2
‑
5细胞株内BTG2表达水平低，作为对照组。
[0038]3、过表达BTG2对肺腺癌细胞功能的影响，材料与方法：
[0039]利用上述构建的稳定表达BTG2的A549细胞进行如下实验：
[0040]31)对过表达BTG2的A549细胞及对照组进行转录组测序分析，设置差异显著基因的阈值为：p<0.05且|log2 Fold change|≥1.0；
[0041]32)细胞周期检测：流式细胞术检测BTG2过表达对A549细胞周期的影响。
[0042]实验结果：
[0043]A549细胞过表达BTG2后，胞内差异表达基因GO/KEGG分析显示，如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BTG2基因在肺腺癌抑癌治疗中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：BTG2基因应用在肺腺癌预后相关性分析中。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述BTG2基因的mRNA在肺腺癌组织中的表达低于正常肺组织，预后相关性分析中BTG2基因在肺腺癌患者中高表达者的总体生存率优于低表达者。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：BTG2蛋白在肺腺癌A549细胞中低表达。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：BTG2基因的过表达应用在肺腺癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁俊婷，陈传亮，
申请(专利权)人：河南省人民医院，
类型：发明
国别省市：