乳腺癌相关的LncRNA组合标志物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于疾病诊断用生物标志物技术领域，具体涉及乳腺癌相关的LncRNA组合标志物、试剂盒及其应用。本发明专利技术筛选出C6orf99、LINC00987、SIAH2

【技术实现步骤摘要】
乳腺癌相关的LncRNA组合标志物、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于疾病诊断用生物标志物
，具体涉及乳腺癌相关的LncRNA组合标志物、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌(BRCA)是世界上女性中最常见的癌症之一，是女性死亡的主要原因，其发病率每年都在增加。尽管先进诊疗水平已大大降低了BRCA的死亡率，但由于BRCA的异质性高，手术和化疗仍是其主要的治疗手段。最近，有研究报道BRCA患者的预后与免疫力有关。因此，有必要寻找新颖的免疫预测因子来改善BRCA的诊断和治疗。肿瘤微环境 (TME)，由免疫细胞，间质细胞，细胞因子和其他分子组成，BRCA患者的预后可以改变TME中参与肿瘤的发生、发育和预后各种关键遗传标记，同时TME的肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)也是肿瘤免疫治疗的关键。最近的研究表明，TIL可以作为BRCA患者的临床病理学预测模型，而提高TILs浓度可以预测BRCA所有分子亚型中新辅助化疗的反应。
[0003]BRCA是一种高度异质的恶性肿瘤，由于其基因组和遗传多样性。近几十年来，一些以mRNA或miRNA为重点的分子标记物证明有助于优化BRCA患者的治疗决策。长非编码 RNA(LncRNA)是一种主要的非编码RNA类型，其转录数超过200nt，在肿瘤的发生、发育和肿瘤免疫反应中表现出各种作用。改变了肿瘤LncRNA参与调节多种生物功能，如自噬、代谢、炎症和免疫反应。特别是，异常表达的LncRNA可能在细胞增殖、凋亡、侵袭、转移和上皮间质转化的过程中作用，导致预后不佳。例如，LncRNA HOTTIP通过增加 BCSC中的miR
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148a
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3p/WNT1表达量来调节CSC样属性。此外，LncRNA TCL6影响免疫细胞浸润，表明BRCA生存率恶化，LncRNA SNHG1的干扰表达可以通过调节 miR
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448/IDO来抑制特雷格Treg细胞的分化，并影响BRCA的免疫浸润。
[0004]研究与乳腺癌相关的LncRNA，对于改善传统的癌症评估方法，为乳腺癌的治疗制定个体化方案，评估疗效，预测预后，以及精准医疗具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的之一在于提供乳腺癌相关的LncRNA组合标志物，C6orf99，LINC00987，SIAH2
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AS1，LINC01010和ELOVL2
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AS1作为组合标志物，综合评估该五种LncRNA的表达量变化，对乳腺癌患者预后进行相对准确的预测和评估。
[0006]本专利技术的目的之二在于提供一种试剂盒，用于检测LncRNA表达量。
[0007]本专利技术的目的之三在于提供本专利技术试剂盒的应用，应用于乳腺癌预后预测评估、乳腺癌药物筛选等。
[0008]乳腺癌相关的LncRNA组合标志物，所述组合标志物为C6orf99，LINC00987， SIAH2
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AS1，LINC01010和ELOVL2
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AS1。
[0009]本专利技术基于乳腺癌新的免疫相关数据集以及高通量测序数据，通过Cox回归分析和 Pearson相关分析确定出与BRCA免疫相关的LncRNA，再通过多因素Cox回归分析确认了5
个LncRNA，包括C6orf99、LINC00987、SIAH2
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AS1、LINC01010和ELOVL2
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AS1，作为乳腺癌的预后组合标志物，形成乳腺癌预后模型。
[0010]本专利技术组合标志物形成的乳腺癌预后模型，计算风险评分＝Exp1
×
LncRNA1+ Exp2
×
LncRNA2+
…
+Expi
×
LncRNAi，依据计算的风险评分，将BRCA患者分为高、低风险组，高危组的风险分值更高，生存率也更低(P<0.001)，死亡率随着风险评分的提高而继续上升。此外，随着风险评分的上升，C6orf99的表达水平上升，而LINC00987、SIAH2
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AS1、 LINC01010和ELOVL2
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AS1的表达水平下降；
[0011]免疫细胞的类型和数量在不同的BRCA类型之间差别很大，本专利技术五个LncRNA组合标志物的风险分数用于预测它们与浸润性免疫细胞的关系，五个与免疫相关的LncRNA与浸润性免疫细胞(CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、树突状细胞、巨噬细胞和中性粒细胞)呈负相关，表明五种与免疫相关的LncRNA在BRCA的免疫浸润中起着关键作用；
[0012]同时，本专利技术验证筛选的五个免疫相关的LncRNAs组合标志物的预后模型的AUC值 (>0.73)，表明本专利技术组合标志物在评估预后上具有较高的可靠性。同时，将本专利技术五个 LncRNA组合标志物的表达量与不同样本的临床特征和乳腺癌细胞的关联性进行验证。基底类亚型，与LuminalABRCA型相反，LINC01010和C6orf99在基底状细胞亚型中表现出有意义的特性，其高表达更好地预测了乳腺癌的更具攻击性的形式，C6orf99在LuminalA和基底状细胞(MCF
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7A和MDA
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MB
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231)中表现出显著性，而SIAH1
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AS1和 ELOVL1
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AS1在所有细胞子类型中的表达比普通细胞低；根据TCGA数据库中1039位乳腺癌患者的分期、T分期、N分期、M分期和年龄等临床特征，检测该模型在临床中的可行性，验证了模型中5个免疫相关LncRNA与临床特征具有相关性。
[0013]总之，本专利技术筛选的五个免疫相关LncRNA的组合标志物形成的预后模型有助于监测 BRCA的恶性发展，是可靠、可参考的风险评估预后模型，为免疫有关的研究和治疗策略提供新的见解。
[0014]一种试剂盒，包括检测C6orf99，LINC00987，SIAH2
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AS1，LINC01010和ELOVL2
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AS1 表达量的试剂。
[0015]进一步的，上述试剂盒中检测C6orf99表达量的试剂包括正向引物：5'
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Gatgttctttggtc
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3'；反向引物：5'
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ACCTCTCCTCTCTTC
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3'。
[0016]更进一步的，上述试剂盒中检测LINC00987表达量的试剂包括正向引物
[0017]5'
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CCGCCTCACACCTCTTCTCTCTCTC
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3'；反向引物：5'
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CAGAGTCTGTCTCTCC
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3'。
[0018]更进一步的，上述试剂盒中检测SIAH2
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AS1表达量的试剂包括正本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.乳腺癌相关的LncRNA组合标志物，其特征在于，所述组合标志物为C6orf99，LINC00987，SIAH2
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AS1，LINC01010和ELOVL2
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AS1。2.一种试剂盒，其特征在于，包括检测C6orf99，LINC00987，SIAH2
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AS1，LINC01010和ELOVL2
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AS1表达量的试剂。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测C6orf99表达量的试剂包括正向引物：5'
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Gatgttctttggtc
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3'；反向引物：5'
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ACCTCTCCTCTCTTC
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3'。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，检测LINC00987表达量的试剂包括正向引物5'
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CCGCCTCACACCTCTTCTCTCTCTC
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3'；反向引物：5'
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CAGAGTCTGTCTCTCC
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3'。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，检测SIAH2
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AS1表达量的试剂包括正向引物5'
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GACTCATCTCCAACCAACCACC
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3'；反...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖冉，杨盟，丁茹梦，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：