一种靶向FOLR1和HER2双打靶点CART的制备及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种可以靶向于FOLR1和HER2双靶点的嵌合抗原受体CAR

【技术实现步骤摘要】
一种靶向FOLR1和HER2双打靶点CAR T的制备及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种靶向FOLR1和HER2双打靶点CAR T的制备及应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌是女性癌症死亡的主要原因之一，据报道，2020年全球女性卵巢癌新发病例313959例(中国55342例)，死亡207252例(中国37519例)。由于目前尚没有有效的筛查手段来预防或者筛查卵巢癌，所以卵巢癌患者确诊时70％为卵巢癌晚期，患者总体生存率只有40％左右。
[0003]CAR T，全称是Chimeric Antigen Receptor T
‑
Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。近几年其在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤免疫治疗方式之一。CAR T细胞疗法首先从患者体内收集细胞，然后通过激活和基因工程对其进行修饰，使得T细胞表面表达嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)。嵌合抗原受体是由胞外抗原结合区即识别肿瘤相关抗原的scFv、跨膜区和胞内信号域等组成。当CAR T细胞回输到患者体内，可以识别和消灭表达指定抗原的肿瘤细胞。
[0004]叶酸受体1(Folate receptor1，FOLR1)又名叶酸受体α或叶酸结合蛋白，相较于肿瘤组织，其在正常组织上表达较低。研究显示，FOLR1在大多数的卵巢癌(在恶性卵巢癌中的表达占76％)及子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾癌、肺癌及乳腺癌中高表达，它可介导细胞摄取叶酸或产生调控信号来促进肿瘤细胞生长。FOLR1的这种表达模式使其成为适用于CAR T细胞治疗卵巢癌的一个良好的靶点。
[0005]卵巢恶性肿瘤中以上皮癌最多见(约占90％)，上皮性卵巢癌死亡率占各类妇科肿瘤的首位，对女性生命造成严重威胁。人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2，HER2)的过量表达和许多上皮细胞癌症的恶化程度密切相关。HER2的过度表达具有抑制细胞凋亡、诱导血管和淋巴管新生、增强肿瘤细胞增殖及侵润转移的作用。研究发现在多种恶性肿瘤组织中存在HER2蛋白高表达，其中包括30％乳腺癌，35％～45％胰腺癌和30％～80％食管腺癌和鳞状细胞癌，它在正常卵巢上皮中表达较低，而在上皮性卵巢癌的表达率很高(11％～66％)，且大多数研究表明HER2蛋白表达与卵巢癌的不良预后有关，也与肿瘤对化疗、生物治疗的敏感性相关，因此它是卵巢癌免疫治疗研究的一个重要靶分子。
[0006]由于实体肿瘤的异质性程度高，使用上述单一靶点并不能完全实现对癌细胞的清除。若制备靶向上述FOLR1与HER2两个靶点的双特异性CAR T，能覆盖杀伤更多肿瘤细胞。然而，由于现行的基因修饰方法限制，制备CAR T的转导率并不是100％，其中未装载CAR基因的T细胞，回输之后和患者体内存在的大量普通T细胞一样，只能作为旁观者，缺乏对肿瘤靶点的特异识别能力。若能将这些旁观者T细胞激活调动起来，一起参与到肿瘤免疫治疗中，将极大的增强CAR T细胞的抗肿瘤效果。
[0007]因此，本领域迫切需要开发出一种能高效被修饰的、较大限度调动回输细胞中的T细胞、更加广谱的双特异性的CAR T细胞。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的就是提供一种能够高效被修饰的、较大限度被调动回输的、更加广谱的双特异性的CAR T细胞。
[0009]在本专利技术的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体CAR
‑
免疫细胞，所述CAR
‑
免疫细胞含有以下元件：
[0010](a)第一CAR，所述的第一CAR的胞外结合域含有靶向第一靶蛋白的第一结合元件，并且所述的第一CAR的胞外结合域含有或不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；
[0011](b1)任选的第二CAR，所述的第二CAR的胞外结合域含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；
[0012](b2)任选的编码BiTE的核酸序列，其中，所述的BiTE靶向第二靶蛋白；
[0013]其中，当所述的第一CAR的胞外结合域不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件时，所述的CAR
‑
免疫细胞含有(b1)和/或(b2)元件；
[0014]并且，所述的第一靶蛋白为叶酸受体1(FOLR1)，并且第二靶蛋白为人表皮生长因子受体2(HER2)；或者，所述的第一靶蛋白为所述的第一靶蛋白为人表皮生长因子受体2(HER2)，并且第二靶蛋白为叶酸受体1(FOLR1)。
[0015]在另一优选例中，所述的免疫细胞包括：T细胞、NK细胞或其组合。
[0016]在另一优选例中，所述的第一CAR的胞外结合域从N端到C端依次包括：任选的信号肽、靶向第一靶蛋白的第一结合原件、任选的连接序列，和靶向第二靶蛋白的第二结合原件；所述的第一CAR的胞外结合域从N端到C端依次包括：任选的信号肽、靶向第二靶蛋白的第二结合原件、任选的连接序列，和靶向第一靶蛋白的第一结合原件。
[0017]在另一优选例中，所述的连接序列是柔性肽段。
[0018]在另一优选例中，所述连接序列为(G4S)
n
，其中，n为正整数(例如1、2、3、4、5或6)。
[0019]在另一优选例中，所述的CAR
‑
免疫细胞含有以下元件：
[0020](a)所述的第一CAR的胞外结合域含有靶向第一靶蛋白的第一结合元件，并且不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；和
[0021](b1)第二CAR，所述的第二CAR的胞外结合域含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件。
[0022]在另一优选例中，所述的CAR
‑
免疫细胞含有以下元件：
[0023](a)所述的第一CAR的胞外结合域含有靶向第一靶蛋白的第一结合元件，并且不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；和
[0024](b2)编码BiTE的核酸序列，其中，所述的BiTE靶向第二靶蛋白。
[0025]在另一优选例中，所述第一CAR或第二CAR的结构如下式I所示：
[0026]L
‑
EB
‑
H
‑
TM
‑
C
‑
CD3ζ
ꢀꢀꢀ
(I)
[0027]式中，
[0028]各
“‑”
独立地为连接肽或肽键；
[0029]L为任选的信号肽序列；
[0030]EB为胞外结合域；
[0031]H为任选的铰链区；
[0032]TM为跨膜结构域；
[0033]C为共刺激信号分子；
[0034]CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。
[0035]在另一优选例中，式I中的“H
‑
TM
‑
C”的序列可以是CD28的胞外域、CD28的跨膜区和CD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体CAR
‑
免疫细胞，其特征在于，所述CAR
‑
免疫细胞含有以下元件：(a)第一CAR，所述的第一CAR的胞外结合域含有靶向第一靶蛋白的第一结合元件，并且所述的第一CAR的胞外结合域含有或不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；(b1)任选的第二CAR，所述的第二CAR的胞外结合域含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件；(b2)任选的编码BiTE的核酸序列，其中，所述的BiTE靶向第二靶蛋白；其中，当所述的第一CAR的胞外结合域不含有靶向第二靶蛋白的第二结合元件时，所述的CAR
‑
免疫细胞含有(b1)和/或(b2)元件；并且，所述的第一靶蛋白为叶酸受体1(FOLR1)，并且第二靶蛋白为表皮生长因子受体2(HER2)；或者，所述的第一靶蛋白为所述的第一靶蛋白为表皮生长因子受体2(HER2)，并且第二靶蛋白为叶酸受体1(FOLR1)。2.如权利要求1所述的CAR
‑
免疫细胞，其特征在于，所述第一CAR或第二CAR的结构如下式I所示：L
‑
EB
‑
H
‑
TM
‑
C
‑
CD3ζ
ꢀꢀꢀ
(I)式中，各
“‑”
独立地为连接肽或肽键；L为任选的信号肽序列；EB为胞外结合域；H为任选的铰链区；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，周春燕，蔡丰灿，李秀云，龚剑，
申请(专利权)人：复星凯特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：