一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用制造技术

本发明专利技术涉及食品和化妆品功效评价技术领域，尤其是涉及一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用。本发明专利技术首先利用三甲胺肝代谢产物对HSF和HaCaT细胞进行诱导，得到氧化损伤细胞模型；然后取抗衰老功能性食品的提取物配制母液，将母液除菌后稀释，得到稀释母液；利用稀释母液预处理HSF和HaCaT细胞；预处理结束后，将稀释母液弃除后用PBS清洗HSF和HaCaT细胞，然后加入三甲胺肝代谢产物与完全培养基的混合溶液对其进行作用后通过检测细胞毒性、细胞抗氧化酶活力、细胞氧化应激水平及细胞炎症因子和胶原蛋白分泌水平来评价食品的抗衰老效果，提供了更广泛的抗衰老的评价方法。方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用


[0001]本专利技术涉及食品和化妆品功效评价
，尤其是涉及一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用。

技术介绍

[0002]胆碱、乙酰胆碱、L
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肉碱和卵磷脂等是在红肉、蛋黄、乳制品和海鲜等食品中富含的物质，这些物质在机体消化道作用下代谢生成前体三甲胺，在三甲胺裂解酶的作用下释放三甲胺。代谢产生的三甲胺被动物机体吸收以后，会迅速通过门静脉循环运输至肝脏部位，继而进行进一步的机体代谢。其代谢产物会诱导细胞产生氧化应激，促进炎症因子的释放，诱导细胞衰老，对机体造成损伤。
[0003]细胞衰老尤其是皮肤细胞衰老，是机体衰老最直接的外在表现，是由内源性变化和外源性变化共同引起的过程。皮肤是身体内部器官的保护层，该组织暴露于各种破坏因子，包括自由基，可导致各种大分子的氧化损伤，破坏重要的细胞过程和增加突变。当大量的氧化剂超过抗氧化防御系统的能力时，就会发生氧化应激。氧化应激被认为是老化过程和各种皮肤疾病的发病机制的一个促成因素。自由基作为线粒体有氧代谢电子传递链的副产物不断产生，被认为是除遗传因素外导致机体衰老的主要原因。自由基激活无数的信号通路，导致胶原蛋白的产生减少，激活并合成基质金属蛋白酶(MMPs)，导致结缔组织降解，及衰老相关分泌表型的分泌，最终促进皮肤老化。老化的皮肤会变得干燥、功能失调，并增加患皮肤病、皮肤恶性肿瘤的风险。
[0004]目前抗衰老食品和化妆品功效评价主要采用动物模型、细胞模型和3D皮肤模型，自2013年起，欧盟全面禁止销售任何在动物身上进行安全测试的化妆品，虽然目前动物试验并未在我国化妆品行业废止，但动物试验严格受到《中华人民共和国实验动物管理条例》等一系列法规的管控，兼顾科学目的和动物福利，减少动物试验是大势；3D皮肤模型对造模技术要求高，过程复杂；细胞模型则相对简单易操作；但这些模型的建立通常使用紫外线、过氧化氢和D
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半乳糖等进行诱导，在诱导方法上存在一定的局限性，因此需要进一步深化了解大量存在的对皮肤健康产生影响的诱导因素。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用；本专利技术首先利用三甲胺肝代谢产物对HSF和HaCaT细胞进行诱导，得到氧化损伤细胞模型；然后取抗衰老功能性食品的提取物配制母液，将母液除菌后稀释，得到稀释母液；利用稀释母液预处理HSF和HaCaT细胞；预处理结束后，将稀释母液弃除后用PBS清洗HSF和HaCaT细胞，然后加入三甲胺肝代谢产物与完全培养基的混合溶液对其进行作用后通过检测细胞毒性、细胞抗氧化酶活力、细胞氧化应激水平及细胞炎症因子和胶原蛋白分泌水平来评价食品的抗衰老效果，提供了更广泛的抗衰老的评价方法。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0007]本专利技术提供一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用，包括以下步骤：
[0008](1)利用三甲胺肝代谢产物对HSF和HaCaT细胞进行诱导，得到氧化损伤细胞模型；
[0009](2)取抗衰老功能性食品的提取物配制母液，将母液除菌后稀释，得到稀释母液；
[0010](3)利用步骤(2)得到的稀释母液预处理HSF和HaCaT细胞；
[0011](4)预处理结束后，将稀释母液弃除后用PBS清洗HSF和HaCaT细胞；
[0012](5)将三甲胺肝代谢产物与完全培养基的混合溶液作用于清洗后的HSF和HaCaT细胞；
[0013](6)将未处理的HSF和HaCaT细胞作为对照组，将步骤(1)所得的氧化损伤细胞模型作为实验组，将步骤(5)所得HSF和HaCaT细胞收集后作为干预组，检测各组细胞的细胞抗氧化能力、细胞炎症因子TNF
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α和IL
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6的分泌水平以及细胞CoL I、MMP
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1的分泌水平，评价食品的抗衰老能力。
[0014]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(1)中，诱导过程中，三甲胺肝代谢产物的浓度为150
‑
300mM。
[0015]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(1)中，诱导过程中，诱导时间为18
‑
36h。
[0016]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，母液为10mg提取物与10mL完全培养基的混合溶液；
[0017]所述完全培养基为45mL DMEM基础培养基、5mL胎牛血清、500μL青霉素
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链霉素溶液的混合溶液。
[0018]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，母液浓度为1mg/mL。
[0019]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(2)中，稀释母液的浓度为1.56
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6.25μg/mL。
[0020]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(3)中，预处理过程中，预处理时间为12
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18h。
[0021]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(5)中，三甲胺肝代谢产物与完全培养基的体积比为3：10。
[0022]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(5)中，作用时间为18
‑
36h。
[0023]在本专利技术的一个实施方式中，步骤(6)中，评价时，实验组与对照组相比，细胞抗氧化能力低、细胞炎症因子TNF
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α和IL
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6的分泌水平高、细胞CoL I分泌水平低且MMP
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1分泌水平高时，进一步评价干预组的抗衰老能力；
[0024]干预组与实验组相比细胞抗氧化能力强、细胞炎症因子TNF
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α和IL
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6的分泌水平低、细胞CoL I分泌水平高且MMP
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1分泌水平低时，表明食品的抗衰老能力强。
[0025]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0026](1)三甲胺肝代谢产物作为一种与磷脂类代谢产物，与人们日常饮食所摄入的食物息息相关，尤其是磷脂类食物如鱼肉、豆制品等占日常摄入比例高的人群；基于细胞模型进行的实验操作简单易调控，有效避免造成环境污染和产生痛感的实验手段，同时也有效降低对实验操作人员身体健康的伤害。
[0027](2)本专利技术方法通过细胞毒性实验筛选出浓度为150
‑
300mM的三甲胺肝代谢产物，通过检测细胞毒性、细胞抗氧化酶活力、细胞氧化应激水平及细胞炎症因子和胶原蛋白分泌水平来评价效果，提供了更广泛的抗衰老的评价方法。
附图说明
[0028]图1为本专利技术中不同浓度三甲胺肝代谢产物处理HSF细胞24h后，采用MTT法检测得到细胞存活率图；a.H2O2处理后HSF细胞存活率图；b.三甲胺肝代谢产物处理后HSF细胞存活率图。
[0029]图2为本专利技术中不同浓度三甲胺肝代谢产物处理HaCaT细胞24h后，采用MTT法检测得到细胞存活率图；a.H2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用三甲胺肝代谢产物对HSF和HaCaT细胞进行诱导，得到氧化损伤细胞模型；(2)取抗衰老功能性食品的提取物配制母液，将母液除菌后稀释，得到稀释母液；(3)利用步骤(2)得到的稀释母液预处理HSF和HaCaT细胞；(4)预处理结束后，将稀释母液弃除后用PBS清洗HSF和HaCaT细胞；(5)将三甲胺肝代谢产物与完全培养基的混合溶液作用于清洗后的HSF和HaCaT细胞；(6)将未处理的HSF和HaCaT细胞作为对照组，将步骤(1)所得的氧化损伤细胞模型作为实验组，将步骤(5)所得HSF和HaCaT细胞收集后作为干预组，检测各组细胞的细胞抗氧化能力、细胞炎症因子TNF
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α和IL
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6的分泌水平以及细胞CoL I、MMP
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1的分泌水平，评价食品的抗衰老能力。2.根据权利要求1所述的一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用，其特征在于，步骤(1)中，诱导过程中，三甲胺肝代谢产物的浓度为150
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300mM。3.根据权利要求1所述的一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用，其特征在于，步骤(1)中，诱导过程中，诱导时间为18
‑
36h。4.根据权利要求1所述的一种三甲胺肝代谢产物在评价食品的抗衰老能力中的应用，其特征在于，步骤(2)中，母液为10mg提取物与10mL完全培养基的混合溶液；所述完全培养基为45mL DMEM基础培养基、5mL胎牛血清、500μL青霉素
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【专利技术属性】
技术研发人员：肖瀛，许豪杰，潘亮，俞苓，周一鸣，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：