治疗IL13Rα2阳性恶性病的靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞制造技术

描述了靶向IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗IL13R
α
2阳性恶性病的靶向性嵌合抗原受体修饰的T细胞
[0001]优先权要求
[0002]本申请要求于2020年3月12日提交的美国临时申请序列号62/988,828的权益。前述申请的全部内容通过引用并入本文。


[0003]本公开内容涉及结合IL13受体的工程化的嵌合抗原受体(CAR)、表达此类CAR的T细胞、配制此类CAR T细胞的方法和用作抗癌剂的方法。

技术介绍

[0004]IL13Rα2(Lupardus,Birnbaum et al.2010)，由于其在正常组织中的罕见表达(Debinski and Gibo Mol Med 6:440
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449,2000)和在许多人类癌症中的过表达而成为一种通用的治疗靶物，所述癌症包括多形性胶质母细胞瘤(GBM)(Thaci,Brown et al.Neuro Oncol 16:1304
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1312,2014)，胰腺导管腺癌(Shimamura,Fujisawa et al.Clin Cancer Res 16:577
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586,2010)，黑素瘤(Beard,Abate
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Daga et al.Clin Cancer Res 19:4941
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4950,2013)，卵巢癌(Kioi,Kawakami et al.Cancer 107:1407
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1418,2006)，透明细胞肾细胞癌(Shibasaki,Yamasaki et al.PLoS One 10:e0130980,2015)，乳腺癌(Papageorgis,Ozturk et al.Breast Cancer Res 17:98,2015)和肺癌(Xie,Wu et al.Oncotarget 6:32902
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32913,2015)。第二个IL13受体家族成员IL13Rα1以较低的亲和力与IL13相互作用(Lupardus,Birnbaum et al.Structure 18:332
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342,2010)，并且在健康组织中普遍表达(Debinski and Gibo Mol Med 6:440
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449,2000)。此外，IL13Rα1和IL4Rα，一种以高亲和力结合IL13的受体对(Lupardus,Birnbaum et al.Structure 18:332
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342,2010)以通过JAK/STAT6途径介导信号传导(Murata,Taguchi et al.Blood 91:3884
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3891,1998)，在肺组织中共表达(Hecker,Zaslona et al.American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 182,:805
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818,2010)。尽管IL13结合配偶体在健康组织中这种广泛表达，但基于IL13配体的CAR在GBM中的局部区域中枢神经系统(CNS)递送的临床试验期间显示出对人体的安全性(Brown,Badie et al.Clin Cancer Res 21:4062
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4072,2015；Brown,Alizadeh et al.N Engl J Med 375:2561
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2569,2016)，表明在这种情况下，来自中靶/脱疾病结合的毒性不成问题。然而，对于系统性疾病的治疗，IL13结合配偶体在患病组织外的广泛表达可充当基于IL13的疗法的汇点(sink)，从而导致安全问题并可能阻碍向疾病部位的运输。本领域以前的工作试图通过生成源自IL13突变体的CAR来解决此问题，所述IL13突变体含有突变以引导结合远离IL13Rα1/IL4Rα。尽管具有E13Y突变，但是E13处的突变产生了对IL13Rα2相对于对IL13Rα1的改善的选择性(Kahlon,Brown et al.Cancer Res 64:9160
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9166,2004,Krebs,Chow et al.Cytotherapy 16,1121
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1131,2014)，所述E13Y突变在重组抗原和抗原表达性的癌细胞两者的背景中仍然允许IL13Rα1的可测量的识别(Krebs,Chow et al.(Kahlon,Brown et al.Cancer Res 64:9160
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9166,2004,Krebs,Chow et al.Cytotherapy 16:1121
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1131,2014)。将EK和R109K突变两者添加到基于IL13的CAR中也
显示出相对于表达IL13Rα2的癌细胞对表达IL13Rα1的癌细胞的减弱但未消除的识别(Kong,Sengupta et al.Clin Cancer Res 18:5949
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5960,2012)。虽然这些实例令人鼓舞，但需要额外的突变来开发IL13Rα2特异性IL13突变体。开发此类分子的挑战之一是无法预测IL13突变对含有IL13的CAR的功能的影响。

技术实现思路

[0005]本文描述了包含变体IL13的IL13Rα2靶向性CAR(“变体IL13 CAR”)以治疗多种癌症。描述的各种突变(E13Y、E13R、E92L和R109K)的氨基酸位置相对于以下序列：
[0006][0007]野生型人IL13序列(信号序列加下划线)
[0008][0009][0010]如本文所示，相对于IL13Ra1，E92L突变增加对IL13Ra2的特异性。因此，此突变可以与其他突变组合，例如与E13Y、E13R和R109K中的一种或多种组合。对于包含在CAR中有用的IL
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13变体可以包含SEQ ID NO:1的109、110、111、112、113个连续氨基酸或SEQ ID NO:1的具有1、2、3、4或5个单一氨基酸变化的整体，条件是在SEQ ID NO:1的第92位处没有E。因此，第92位可以选自：G,A,L,P,V,I,M,F,Y,W,S,T,C,N,Q,K,R和H；或可以选自：G,A,L,P,V,I,M,F,Y,W,S,T,C,N和Q；或者可以选自：G,A,L,P,V,I,M,F,Y和W；或者可以选自：G,A,L,P,V,I和M；或可以选自：G,A,L,V,I和M。对于包含在CAR中有用的IL
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13变体可以包含SEQ ID NO:1的109、110、111、112、113个连续氨基酸或SEQ ID NO:1的具有1、2、3、4或5个单一氨基酸变化的整体，条件是SEQ ID NO:1的第92位存在有L。因此，第92位可以选自：G,A,L,P,V,I,M,F,Y,W,S,T,C,N,Q,K,R和H；或可以选自：G,A,L,P,V,I,M,F,Y,W,S,T,C,N和Q；或者可以选自：G,A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.核酸分子，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列，其中所述嵌合抗原受体包含：靶向域，其包含选自：SEQ ID NO:30
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37的氨基酸序列；间隔物域；跨膜域；共刺激域和CD3zeta域。2.权利要求1的核酸分子，其中所述间隔物域选自下组：和IgG4(EQ)间隔物域、IgG4(HL
‑
CH3)间隔物域和IgG4(CH3)间隔物域。3.权利要求1的核酸分子，其中所述间隔物域包含SEQ ID NO:10。4.权利要求1的核酸分子，其中所述间隔物域包含SEQ ID NO:9。5.权利要求1的核酸分子，其中所述间隔物域包含SEQ ID NO:12。6.前述权利要求中任一项的核酸分子，其中所述跨膜域选自下组：CD4跨膜域、CD8跨膜域和CD28跨膜域。7.权利要求6的核酸分子，其中所述共刺激域选自CD28共刺激域、CD28gg共刺激域和41
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BB共刺激域。8.权利要求1的核酸分子，其中所述CAR包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:40
‑
68。9.权利要求1的核酸分子，其中所述CAR包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:40
‑
58，其中SEQ ID NO:10的氨基酸序列被SEQ ID NO:2
‑
9和11中任一项的氨基酸序列替换。10.核酸分子，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列，其中所述嵌合抗原受体包含：靶向域，其包含含有变体IL13域的氨基酸序列，所述变体IL13域包含SEQ ID NO:1的109、110、111、112、113个连续氨基酸或SEQ ID NO:1的具有1、2、3、4或5个单一氨基酸变化的整体，条件是在SEQ ID NO:1的第92位处存在有除E以外的氨基酸；间隔物域；跨膜域；共刺激域和CD3zeta域。11.权利要求10的...

【专利技术属性】
技术研发人员：CE布朗，X杨，R斯塔尔，WC张，SJ福尔曼，
申请(专利权)人：希望之城公司，
类型：发明
国别省市：