【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、单克隆抗体(mab)用于多种治疗、诊断和研究应用。治疗和诊断领域包括癌症、抗病毒治疗、抗免疫和炎性疾病、过敏、心血管疾病、骨质疏松症、和风湿病。
2、蛋白质工程改造和其他努力已经生成了具有改善的功效和靶向(例如，双特异性mab)、改善的定位、组织穿透、和血液清除(例如，单链fab可变片段(scfv)、双抗体、小抗体、和其他片段)、和改变的免疫刺激性、安全性、毒性、和/或药代动力学/药效学性质，如含有修饰的fc区域的那些(例如，通过突变或糖基化)的mab。mab已经重新工程改造以允许小分子的位点特异性偶联来改善递送(例如，thiomab)或不可逆地结合至其关联表位(例如，无限亲和性mab)。也已经开发mab来改善生物活性肽和其他生物制剂(例如，covx-体)的循环和呈递。偶联至各种试剂已经使得能够进行靶向的免疫治疗和诊断方法。已经开发了与亲和素融合的mab或scfv和杂多聚scfv用于预靶向治疗并改善肿瘤成像的检测限制。
3、虽然mab可能有效并且比小分子方法有优势，但是现有的抗体和方法存在各种限制。这些可包括来自脱靶相互作用的不良副作用，和/或由于抗体-药物偶联物的长循环时间等的附带损伤。另外，虽然一些抗体能够有效结合细胞表面抗原上的表位，但是它们可能需要被细胞内化以产生所需或计划的结果。仅结合至关联抗原可能不足以引发治疗应答。增加细胞表面抗原的内化率可改善抗体或抗体治疗的功效。就这些缺点而言，需要改善的抗体和相关化合物，包括提供改善的功效、协同性、特异性和安全性的那些，及其方法和用途。本
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本公开包括增加或促进抗体的细胞内化的方法，包括向细胞给予中间表位(meditope)-激活的抗体，其特异性结合至细胞上呈递的表位或细胞表面抗原和多价中间表位，从而促进靶细胞表面上的细胞表面抗原的内化。
2、还提供了增加或促进细胞上细胞表面抗原的聚类的方法，包括向细胞给予中间表位-激活的抗体，其特异性结合细胞表面抗原，和多价中间表位，从而促进细胞表面抗原在靶细胞表面上的聚类。在一个方面中，与单独用抗体孵育之后观察到的聚类程度相比，或者与用抗体和单价中间表位孵育之后相比，给予中间表位-激活的抗体和多价中间表位之后的聚类程度增加。
3、另一个实施方式还提供了增加或促进细胞上细胞表面抗原的内化的方法，包括向细胞给予中间表位-激活的抗体，其特异性结合细胞表面抗原，和多价中间表位，从而促进细胞表面抗原在靶细胞表面上的内化。在一个方面中，与单独用抗体孵育之后的抗原内化程度相比，或者与用抗体和单价中间表位孵育之后相比，给予中间表位-激活的抗体和多价中间表位之后的内化程度增加。
4、另一个实施方式还提供了向细胞递送多价中间表位的方法，包括向细胞给予中间表位-激活的抗体，其特异性结合细胞表面抗原，和多价中间表位，从而促进细胞表面抗原在靶细胞表面上的聚类和/或抗原的内化。在另一个方面中，感兴趣的抗原是内化或非内化抗原。在另一个方面中，单特异性二价抗体的结合在没有中间表位的情况下导致没有抗原内化，产生不超过代谢转换产生的或在没有抗原特异性抗体存在下的内化程度的内化程度，或产生不超过代谢转换产生的或在没有抗原特异性抗体存在下的内化程度2倍的内化程度。
5、在一些实施方式中，中间表位-激活的抗体是二价或双特异性的。另一个实施方式还包括向细胞给予另一种中间表位-激活的抗体，其结合至与中间表位-激活的抗体所结合的表位不同的抗原上的表位，或不与其竞争结合，或其特异性结合至细胞表面上的不同抗原的不同表位。
6、在一个实施例中，处理方法包括向对象给予一个或多个中间表位-激活的抗体或片段，例如，本文所述的那些中的任一种。在一个实施例中，该方法包括向对象给予一个或多个中间表位-激活的抗体或片段和中间表位，例如，本文所述的那些中的任一种，包括多价中间表位和与治疗或诊断剂偶联的中间表位。在一个方面中，依次给予中间表位激活的抗体或片段和一个或多个中间表位。在另一个方面中，同时给予它们。
7、一般而言，一个或多个中间表位包含结合至中间表位激活的抗体或其抗原结合片段的中间表位结合位点的肽。在一个方面中，在给予一个或多个中间表位同时、之前、或之后给予中间表位-激活的抗体。在一些方面中，一个或多个中间表位与治疗剂偶联，如选自下组的治疗剂：药物、小分子、化疗剂、治疗性抗体、毒素、放射性同位素、酶、核酸酶、激素、免疫调节剂、寡核苷酸、rnai分子、sirna分子、螯合剂、硼化合物、光活性剂、染料、荧光或发光物质、金属、金属合金、增强剂、和有机或无机纳米颗粒。
8、同时，提供的中间表位是多价中间表位，如包含2个或更多个中间表位以及一个或多个接头的那些，例如，其中2个或更多个中间表位各自是与中间表位激活的抗体的中间表位结合位点结合的肽。这类多价中间表位可包括本文所述的中间表位中的任一种。在一个方面中，2个或更多个中间表位包括至少3个中间表位，或至少4个中间表位。在一个方面中，一个或多个接头包括肽、小化学支架、生物素-链霉亲和素、有机或无机纳米颗粒、多核苷酸序列、肽核酸、有机聚合物、或免疫球蛋白fc结构域。
9、示例性的多价中间表位是二价、三价和四价中间表位，以及含有5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、数百、1000、数千或更多中间表位的多价中间表位。在一些方面中，可通过将中间表位偶联至纳米颗粒、病毒、和/或其他支持物如其他半固体支持物，例如，纳米管、布基球、lga颗粒、和/或量子点来得到这类多价中间表位，例如，用于手术成像。
10、多价中间表位是包括一个或多个链的化合物，其包括通过接头连接至免疫球蛋白(ig)恒定区或其部分(例如，下式中的r4a)的中间表位。在一些实施方式中，ig恒定区或其部分是fc区或其部分，例如，重链ch1、ch2、和/或ch3结构域。在一些方面中，ig恒定区部分还包括ch4结构域。在一些方面中，ig是igg。在一些方面中，恒定区部分不含ch2，不含ch1，不含ch4，和/或不含可变区或抗原结合部分。这类化合物和中间表位通常是二价或多价的，例如，四价，通过多个ig恒定区部分，例如，fc部分之间的相互作用。在一个实施例中，多价中间表位具有一条或多条链，如一条或多条多肽链，具有下式：
11、r3a-l3a-r4a(式i)，
12、其中r3a是中间表位或中心空腔结合部分，如肽中间表位或结合部分，l3a是接头，如肽基接头，连接r3a和r4a，并且r4a是免疫球蛋白(ig)重链恒定区部分，包含ig fc区或其功能性片段。
13、在一些实施方式中，链具有式：
14、r3a-l3a-r4a-z1(式ii)，
15、其中r3a是第一中间表位或中心空腔结合部分，如肽中间表位或结合部分；l3a是第一接头如肽基接头；r4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种改变细胞表面抗原分布的方法，包括：
2.一种增加细胞表面抗原共定位的方法，包括：
3.一种增加中间表位激活的抗体的细胞内化的方法，包括：
4.一种增加细胞表面抗原的细胞内化的方法，包括：
5.一种增加抗体治疗的功效的方法，包括：
6.一种降低在对象中实现所需治疗效果所需的抗体治疗的剂量的方法，包括
7.一种交联第一中间表位激活的抗体或其抗原结合片段和第二中间表位激活的抗体或其抗原结合片段的方法，包括：
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞表面抗原是能够进行受体介导的内吞作用的受体。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位包括连接中间表位的免疫球蛋白Fc区或其部分。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位的中间表位偶联至接头。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述接头包括SEQ ID NO:199、200、201、202、203、或204的序列，或其变体。
12.如前述权利要求
13.如权利要求12所述的方法，其中：
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一中间表位激活的抗体结合至与所述第二中间表位激活的抗体不同的表位。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述中间表位激活的抗体或其抗原结合片段特异性结合至由细胞或其组织的疾病或病症表达的抗原。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中依次给予所述中间表位激活的抗体或其抗原结合片段和所述中间表位。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述中间表位激活的抗体或其抗原结合片段中的至少一种与选自下组的抗体或其抗原结合片段竞争结合抗原或与其结合相同的表位：阿巴莫单抗、阿昔单抗、阿达木单抗、阿德木单抗、阿仑单抗、阿妥莫单抗、阿妥莫单抗喷替酸盐、马安那莫单抗、马安那莫单抗、阿西莫单抗、阿替珠单抗、巴利昔单抗、贝妥莫单抗、艾妥莫单抗、贝伐单抗、贝那珠单抗、贝伐珠单抗、贝他单抗、卡尼卡单抗、卡波米单抗、卡波米单抗喷地肽、卡他莫单抗、塞妥珠单抗、替坦司可利妥珠单抗、达珠单抗、地诺单抗、依库珠单抗、依决洛单抗、依法利珠单抗、伊塔木单抗、厄妥索单抗、法索单抗、芳妥珠单抗、吉妥珠单抗、吉瑞昔单抗、戈利木单抗、替伊莫单抗、伊戈伏单抗、英夫利昔单抗、易普利姆玛、拉贝珠单抗、美泊利单抗、莫罗单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奈昔尼妥珠单抗、奥法木单抗、奥马珠单抗、奥戈伏单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、兰尼单抗、利妥昔单抗、沙妥莫单抗、硫索单抗、替伊莫单抗、替伊利莫单抗、托珠单抗、托西莫单抗、曲妥单抗、优特克单抗、维西珠单抗、伏妥莫单抗、扎妥木单抗、布罗芦单抗、安鲁珠单抗、巴匹珠单抗、达鲁珠单抗、登西珠单抗、加尼单抗、奥英妥珠单抗、马威利姆单抗、摩西珠单抗、利落木单抗、西法木单抗、他尼珠单抗、曲罗尼单抗、特姆单抗和脲酶；或
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位包括具有下式的肽：
20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位包括SEQ ID NO:1、2、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、186、187、188、189、或207的氨基酸序列，或从中衍生的环状肽。
21.一种多价中间表位，包括：
22.如权利要求21所述的多价中间表位，还包含第二接头。
23.如权利要求21所述的多价中间表位，其中所述第一接头包括Ssp Ic内含肽序列和Ssp IN内含肽序列。
24.如权利要求22所述的多价中间表位，其中所述第一接头包括Ssp Ic内含肽序列并且所述第二接头包括Ssp IN内含肽序列。
25.如权利要求21所述的多价中间表位，其中所述分选酶序列包括序列LPXTG(SEQ IDNO:249)，其中X是任意氨基酸。
26.如权利要求21、22或25所述的多价中间表位，其中所述第一接头和/或第二接头还包括甘氨酸残基。
27.如权利要求21-26中任一项所述的多价中间表位，其中所述醛标签包括SEQ ID NO:247的序列。
28.如...
【技术特征摘要】
1.一种改变细胞表面抗原分布的方法，包括：
2.一种增加细胞表面抗原共定位的方法，包括：
3.一种增加中间表位激活的抗体的细胞内化的方法，包括：
4.一种增加细胞表面抗原的细胞内化的方法，包括：
5.一种增加抗体治疗的功效的方法，包括：
6.一种降低在对象中实现所需治疗效果所需的抗体治疗的剂量的方法，包括
7.一种交联第一中间表位激活的抗体或其抗原结合片段和第二中间表位激活的抗体或其抗原结合片段的方法，包括：
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞表面抗原是能够进行受体介导的内吞作用的受体。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位包括连接中间表位的免疫球蛋白fc区或其部分。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位的中间表位偶联至接头。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述接头包括seq id no:199、200、201、202、203、或204的序列，或其变体。
12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述多价中间表位偶联至治疗剂或诊断剂。
13.如权利要求12所述的方法，其中：
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一中间表位激活的抗体结合至与所述第二中间表位激活的抗体不同的表位。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述中间表位激活的抗体或其抗原结合片段特异性结合至由细胞或其组织的疾病或病症表达的抗原。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中依次给予所述中间表位激活的抗体或其抗原结合片段和所述中间表位。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述中间表位激活的抗体或其抗原结合片段中的至少一种与选自下组的抗体或其抗原结合片段竞争结合抗原或与其结合相同的表位：阿巴莫单抗、阿昔单抗、阿达木单抗、阿德木单抗、阿仑单抗、阿妥莫单抗、阿妥莫单抗喷替酸盐、马安那莫单抗、马安那莫单抗、阿西莫单抗、阿替珠单抗、巴利昔单抗、贝妥莫单抗、艾妥莫单抗、贝伐单抗、贝那珠单抗、贝伐珠单抗、贝他单抗、卡尼卡单抗、卡波米单抗、卡波米单抗喷地肽、卡他莫单抗、塞妥珠单抗、替坦司可利妥珠单抗、达珠单抗、地诺单抗、依库珠单抗、依决洛单抗、依法利珠单抗、伊塔木单...
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