使用活化T细胞治疗癌的方法技术

本发明专利技术提供了一种使用由负载有多种肿瘤抗原肽的抗原递呈细胞(诸如树突细胞)诱导的活化T细胞或PBMC治疗个体中的癌的方法。所述方法还可包括向所述个体施用负载有所述多种肿瘤抗原肽的所述抗原递呈细胞。所述方法可单独地使用，或与免疫检查点抑制剂联合使用。本发明专利技术提供了使用新抗原肽或基于所述个体的所述肿瘤中的突变负荷来为所述个体定制的精确治疗方法。本发明专利技术还公开了制备所述活化T细胞的方法、监测所述治疗的方法以及克隆肿瘤特异性T细胞受体的方法。本发明专利技术还提供了包含所述活化T细胞的分离的细胞群，以及可用于癌免疫疗法的组合物和试剂盒。疗法的组合物和试剂盒。疗法的组合物和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
使用活化T细胞治疗癌的方法
[0001]本申请是申请日为2016年3月11日、申请号为201680015221.3、发 明名称为“使用活化T细胞治疗癌的方法”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2015年3月13日提交的国际申请PCT/CN2015/074227的 优先权权益，该国际申请的全部内容以引用方式并入本文。
[0004]ASCII文本文件上的序列表的提交
[0005]以下有关ASCII文本文件的提交的全部内容以引用方式并入本文：计 算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：744852000141SEQLIST.TXT，记录 日期：2016年3月11日，大小：7.83KB)。


[0006]本专利技术涉及癌免疫疗法的领域。更具体地，本专利技术提供了使用活化T 细胞治疗个体中的癌的方法、组合物和试剂盒。

技术介绍

[0007]人体拥有复杂的免疫系统保护自身免遭疾病，包括体内恶性肿瘤。因 此，激发机体自身免疫力来治疗和预防癌是肿瘤学领域由来已久的理想。 对肿瘤的天然免疫应答通常由肿瘤抗原引发，所述肿瘤抗原包括在癌细胞 中专一表达的突变蛋白，以及在癌起源组织中过表达但却不能完全被识别 为“自身”的肿瘤相关抗原(TAA)。遇到肿瘤抗原的抗原递呈细胞(APC)(尤 其是树突细胞(DC))可加工肿瘤抗原并将肿瘤抗原递呈到其细胞表面上。 在成熟后，负载有肿瘤抗原的DC可引起对寄宿肿瘤抗原的癌细胞的T细 胞应答，该T细胞应答涉及细胞毒性T细胞、辅助T细胞及功能上不同的 效应T细胞和记忆T细胞。特别强烈的T细胞应答类型涉及产生细胞毒性 T细胞，这些细胞毒性T细胞通过释放细胞因子、酶和细胞毒素或者通过 经由细胞
‑
细胞相互作用引发促凋亡信号级联反应来杀灭癌细胞。
[0008]癌免疫疗法旨在利用上述过程来治疗癌，但到目前为止成效相当有 限。最初的尝试集中于基于特殊抗原肽、全长抗原蛋白或编码肿瘤抗原的 病毒载体来开发癌疫苗。进入临床阶段的癌疫苗很少，产生任何引人瞩目 的临床结果的癌疫苗更是少之又少。与传统癌疗法诸如化学疗法、放射疗 法和手术切除不同，通常，机体对癌免疫疗法治疗(尤其是癌疫苗)的应 答大大延迟，因为APC需要时间加工抗原并将抗原递呈到T细胞，并且T 细胞也需要时间成熟和引发免疫应答。当患者体内存在肿瘤时，肿瘤中的 癌细胞已经有逃脱免疫系统监视的机制。因此，有效的肿瘤疫苗必须能够 绕开免疫监视的缺陷以引发强免疫应答。另外，癌疫苗中存在若干瓶颈问 题，这些问题防止该方法产生特异且持久的临床疗效。首先，在不同患者 间及在同一患者的不同病灶间，癌细胞，即使具有相同组织学类型，在其 遗传组成和表达谱方面也是相当异质的
‑‑
在文献和公共数据库中可找到由近 期对癌细胞的新一代测序实验得出的大量遗传数据来充分佐证该现象。因 此，特殊癌疫苗治疗中有限数量的一种或多种肿瘤抗原不太可能代表所有 患者中的独立肿瘤所特有的抗原谱。其次，
由于血清半衰期和生物利用度 问题，癌疫苗中的许多抗原部分不能有效负载于APC上。第三，即使当 APC被癌疫苗中所含的抗原适当致敏，缺少合适的活化信号和微环境也会 导致产生T细胞的错误亚群，尤其是免疫抑制调节性T细胞(T
REG
)，它们会 抑制而非刺激对肿瘤的免疫应答。最后两个问题的起因与以下情况有关： 在施用任何癌疫苗后，临床医生完全无法掌控患者对任何癌疫苗的实际应 答。
[0009]基于细胞的癌免疫治疗方法通过向患者施用在相对限定且受控的条件 下制备的免疫介导的细胞或细胞产物，减轻了癌疫苗的上述挑战中的一部 分。特别是，基于DC的方法已倍受关注，尤其在2010年4月FDA批准 (sipuleucel
‑
T)用于晚期前列腺癌之后。典型的基于DC的免疫 治疗方法涉及从癌患者分离DC，使DC离体负载一种肿瘤抗原(或多种肿 瘤抗原，包括肿瘤细胞裂解物和总mRNA)，然后将DC施用回患者以引 发癌杀伤性T细胞应答。例如包括使患者的外周血单核细胞(PBMC)暴露于融合蛋白(包括偶联到细胞因子(诸如GM
‑
CSF)的肿瘤来 源抗原)，然后向患者输注PBMC(可假定含有可将肿瘤来源抗原递呈到 T细胞的活化DC)(参见美国专利5,976,546、6,080,409和6,210,662)。 在关键的III期试验中(Kantoff PW,Higano CS et al.(2010)“Sipuleucel
‑
Timmunotherapy for castration
‑
resistant prostate cancer.”N J Med 363:411
‑
22 (Kantoff PW、Higano CS等人，2010年，“去势难治性前列腺癌的 Sipuleucel
‑
T免疫疗法”，《新英格兰医学杂志》，第363卷，第411
‑
422 页))，使用融合到GM
‑
CSF(已知会吸引并诱导DC的细胞因子)的前 列腺酸性磷酸酶(PAP)(一种前列腺癌相关抗原)的重组蛋白来制备 的特定实施方案。虽然与对照组中患者的中值生存期(21.7个 月)相比，能够延长实验组中患者的中值生存期(25.8个 月)，但临床试验结果并未显示出统计上显著的肿瘤进展延迟或肿瘤尺寸 缩小的迹象。更为棘手的是这样的事实：在治疗中，个体患 者的生存期似乎不与对融合蛋白或PAP的特异性T细胞应答相关联 (Cheever MA,Higano CS(2011)“PROVENGE(Sipuleucel
‑
T)in prostatecancer:the first FDA
‑
approved therapeutic cancer vaccine.”Clin.Cancer Res. 17:3520
‑
6(Cheever MA、Higano CS，2011年，“用于前列腺癌的 PROVENGE(Sipuleucel
‑
T)：FDA批准的首个治疗性癌疫苗”，《临床癌研 究》，第17卷，第3520
‑
3526页)。
[0010]基于细胞的免疫治疗方法中的第二种方法称为过继淋巴细胞疗法，其 涉及从患者的肿瘤分离肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)，离体扩增TIL，并且在 去除患者的天然非骨髓性淋巴细胞之后，将TIL输注回患者。显著的临床 应答(包括肿瘤完全消退和较长无病生存期)在过继淋巴细胞疗法对黑素 瘤患者的临床应用中已有报道(Restifo NP,Dudley ME,and Rosenberg SA. (2012)“Adoptive immunotherapy for cancer:harnessing the T cell response.”Nat. Rev.Immunol.12:269
‑
81(Restifo 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗个体中的癌的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的活化T细胞，其中通过将T细胞群与负载有多种肿瘤抗原肽的树突细胞群共培养来制备所述活化T细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述个体此前曾施用有效量的负载有所述多种肿瘤抗原肽的树突细胞。3.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括向所述个体施用有效量的负载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述树突细胞在所述活化T细胞的所述施用之前施用。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述树突细胞在所述活化T细胞的所述施用之前约7天至约21天施用。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述方法还包括通过将所述T细胞群与负载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群共培养来制备所述活化T细胞。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：X，
申请(专利权)人：深圳源正细胞医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：