改良多抗原特异性细胞疗法方法技术

本专利申请提供通过将T细胞与载有多种肿瘤抗原肽的树突细胞共培养来制备活化T细胞群的方法。还提供的是使用此类活化T细胞治疗个体中癌症的方法、用于基于细胞的癌症免疫疗法的药物组合物以及试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改良多抗原特异性细胞疗法方法相关专利申请的交叉引用本专利申请要求于2018年3月30日提交的国际专利申请号PCT/CN2018/081338的优先权权益，其公开内容全文以引用方式并入本文。
本专利申请涉及癌症免疫疗法的领域。更具体而言，本专利申请提供方法、组合物、和试剂盒以用于使用活化T细胞治疗个体中癌症。
技术介绍
人体具有精密的免疫系统，以保护自身来抵御疾病。发动身体自身的抗癌免疫力已是肿瘤学上长久以来的理想。肿瘤抗原会引发对肿瘤的天然免疫反应。抗原呈递细胞(antigenpresentingcell,APC)，尤其是树突细胞(dendriticcell,DC)，可处理并在其细胞表面上呈递肿瘤抗原。成熟之后，载有肿瘤抗原的DC可触发T细胞反应，该T细胞反应涉及细胞毒性T细胞、辅助T细胞、和功能上不同的效应T细胞及记忆T细胞，其对抗表现肿瘤抗原的癌细胞。一种特别强大的T细胞反应类型涉及生产细胞毒性T细胞，其可通过释放细胞因子、酶、和细胞毒素，或通过经由细胞间相互作用诱导促进细胞凋亡的传讯级联反应，来杀死癌细胞。基于细胞的癌症免疫疗法寻求通过向患者施用免疫媒介细胞来治疗癌症，此类免疫媒介细胞经制备以靶向肿瘤抗原。FDA所批准的(sipuleucel-T)是一种基于DC的疗法，其包括使患者的周边血液单核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)暴露于融合蛋白，该融合蛋白包括耦合至细胞因子的肿瘤衍生抗原；然后向该患者输注此类PBMC，推测此类PBMC含有可向T细胞呈递该肿瘤衍生抗原的活化DC。参见美国专利号6,210,662。过继性T细胞疗法涉及自患者的肿瘤分离的肿瘤浸润淋巴球(tumor-infiltratinglymphocyte,TIL)，体外扩增此类TIL，且在耗尽患者的天然非骨髓性淋巴球后将此类TIL输注回该患者。参见RestifoNPetal.(2012)Nat.Rev.Immunol.12:269-81。具有经工程改造的T细胞受体的T细胞(TCR-T)或具有嵌合抗原受体的T细胞(CAR-T)是通过修饰T细胞-肿瘤相互作用的微环境，来进一步扩增过继性T细胞疗法方法的能力。最近，多抗原特异性细胞疗法(MultipleAntigenSpecificCellTherapy,“MASCT”)方法已经设计以利用DC及活化T细胞两者的治疗能力，以便为癌症患者提供安全、持久且可定制的治疗。参见国际专利申请公布号WO2016145578A1。在本文中所参照的所有出版物、专利、专利申请和已公开专利申请的公开内容全文特此以引用方式并入本文中。
技术实现思路
本专利申请提供制备活化T细胞的方法、和使用此类活化T细胞治疗个体中癌症的方法。本专利申请的一个方面提供一种制备活化T细胞群的方法，该方法包括：a)使树突细胞群与多种肿瘤抗原肽接触，以获得载有该多种肿瘤抗原肽的树突细胞群；b)在DC成熟培养基中培养载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群，该DC成熟培养基包含MPLA；以及c)将载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群与T细胞群共培养，从而获得该活化T细胞群。在一些实施方案中，步骤c)包括在共培养基中将载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群与T细胞群共培养，该共培养基包含介白素混合物、免疫检查点抑制剂、和抗CD3抗体。在一些实施方案中，步骤c)包括：在初始共培养基中将载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群与T细胞群共培养，以提供共培养物，该初始共培养基包含多种细胞因子和免疫检查点抑制剂；以及将抗CD3抗体添加至该共培养物，从而获得该活化T细胞群。在一些实施方案中，在该共培养开始后约3至7天(诸如约5天)，将该抗CD3抗体添加至该共培养物。在一些实施方案中，将载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群与该T细胞群在该抗CD3抗体存在下共培养至少约10天。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该DC成熟培养基包含INFγ和MPLA。在一些实施方案中，DC成熟培养基进一步包含PGE2。在一些实施方案中，INFγ以至少约100IU/mL的浓度存在于DC成熟培养基中。在一些实施方案中，MPLA以至少约0.5μg/mL的浓度存在于DC成熟培养基中。在一些实施方案中，PGE2以至少约0.1μg/mL的浓度存在于DC成熟培养基中。本专利申请的一个方面提供一种制备活化T细胞群的方法，该方法包括：a)使树突细胞群与多种肿瘤抗原肽接触，以获得载有该多种肿瘤抗原肽的树突细胞群；b)在初始共培养基中将载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群与T细胞群共培养，以提供共培养物，该初始共培养基包含多种细胞因子和免疫检查点抑制剂；以及c)在该共培养开始后约3至7天(诸如约5天)，将抗CD3抗体添加至该共培养物，从而获得该活化T细胞群。在一些实施方案中，将载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群与该T细胞群在该抗CD3抗体存在下共培养至少约10天。在一些实施方案中，步骤a)进一步包括在DC成熟培养基中培养载有该多种肿瘤抗原肽的该树突细胞群，该DC成熟培养基包含toll样受体(toll-likereceptor,TLR)激动剂。在一些实施方案中，该TLR激动剂选自MPLA、聚肌胞苷酸、雷西莫特(resquimod)、嘎德莫特(gardiquimod)和CL075。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该多种细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-15、和IL-21。在一些实施方案中，IL-2以至少约500IU/mL的浓度存在于初始共培养基中。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体以至少约10μg/mL的浓度存在于初始共培养基中。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该T细胞群存在于PBMC群中。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，通过诱导来自PBMC的单核细胞群分化来获得该树突细胞群。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该树突细胞群和该T细胞群从相同个体获得。在一些实施方案中，该树突细胞群和该T细胞群衍生自相同个体的PBMC。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该多种肿瘤抗原肽是多种合成肿瘤抗原肽。在一些实施方案中，该多种肿瘤抗原肽不是获自细胞样本。在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该多种肿瘤抗原肽包括(多种)一般肿瘤抗原肽、(多种)癌症类型特异性抗原肽、和/或新抗原肽。在一些实施方案中，多种肿瘤抗原肽包括一或多种新抗原肽。在一些实施方案中，该多种肿瘤抗原肽包括新抗原肽(例如，由新抗原肽组成)。在一些实施方案中，该多种肿瘤抗原肽包括至少约5种(例如，至少约10、20、30、40、或更多种)不同肿瘤抗原肽。还提供的是一种分离的活化T细胞群，其是使用上述方法中任一者制备。进一步提供的是一种治疗个体中癌症的方法，其包括向该个体施用有效量的此类活化T细胞，此类活化T细胞是使用上述方法中任一者制备。在一些实施方案中，该方法进一步包括向该个体施用有效量的载有该多种肿瘤抗原肽的树本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备活化T细胞群的方法，所述方法包括：/na)使树突细胞群与多种肿瘤抗原肽接触以获得载有所述多种肿瘤抗原肽的树突细胞群；/nb)在包含多种细胞因子和免疫检查点抑制剂的初始共培养基中共培养载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群和T细胞群以提供共培养物；以及/nc)在所述共培养开始后约3至7天，将抗CD3抗体添加至所述共培养物，从而获得所述活化T细胞群。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180330 CN PCT/CN2018/0813381.一种制备活化T细胞群的方法，所述方法包括：
a)使树突细胞群与多种肿瘤抗原肽接触以获得载有所述多种肿瘤抗原肽的树突细胞群；
b)在包含多种细胞因子和免疫检查点抑制剂的初始共培养基中共培养载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群和T细胞群以提供共培养物；以及
c)在所述共培养开始后约3至7天，将抗CD3抗体添加至所述共培养物，从而获得所述活化T细胞群。


2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)还包括在包含toll样受体(TLR)激动剂的DC成熟培养基中培养载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群。


3.根据权利要求2所述的方法，其中所述TLR激动剂选自MPLA、聚肌胞苷酸、雷西莫特、嘎德莫特和CL075。


4.一种制备活化T细胞群的方法，所述方法包括：
a)使树突细胞群与多种肿瘤抗原肽接触以获得载有所述多种肿瘤抗原肽的树突细胞群；
b)在包含MPLA的DC成熟培养基中培养载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群；以及
c)共培养载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群和T细胞群，从而获得所述活化T细胞群。


5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述DC成熟培养基包含INFγ和MPLA。


6.根据权利要求5所述的方法，其中所述DC成熟培养基还包含PGE2。


7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述INFγ以至少约100IU/mL的浓度存在于所述DC成熟培养基中。


8.根据权利要求3-7中任一项所述的方法，其中所述MPLA以至少约0.5μg/mL的浓度存在于所述DC成熟培养基中。


9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述PGE2以至少约0.1μg/mL的浓度存在于所述DC成熟培养基中。


10.根据权利要求4-9中任一项所述的方法，其中步骤c)包括：在包含多种细胞因子和免疫检查点抑制剂的初始共培养基中共培养载有所述多种肿瘤抗原肽的所述树突细胞群和T细胞群以提供共培养物；并且将抗CD3抗体添加至所述共培养物，从而获得所述活化T细胞群。


11.根据权利要求1-3和5-10中任一项所述的方法，其中所述多种细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-15和IL-21。


12.根据权利要求11所述的方法，其中所述IL-2以至少约500IU/mL的浓度存在于所述初始共培养基中。


13.根据权利要求1-3和5-12中任一项所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：周向军，马轶凡，韩研妍，李进，唐龙清，刘俊云，邬冬云，
申请(专利权)人：深圳源正细胞医疗技术有限公司，恒瑞源正深圳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44