磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法，属于水产品检测技术领域，所述方法为以碳酸钠溶液和丙酮溶液提取磷虾粉样品中的乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉，用正己烷液液萃取目标化合物，在40℃下氮气吹干。用乙腈复溶后，过固相萃取柱净化，再经净化剂净化后，进高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法


[0001]本专利技术属于水产品检测
，是一种用高效液相色谱荧光检测器(HPLC
‑
FLD)检测磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的方法。

技术介绍

[0002]南极磷虾是目前已知的最大单种可捕捞利用的海洋生物资源，资源储量约6.5
‑
10亿吨，是人类巨大的潜在蛋白质储库。南极磷虾富含磷脂、多不饱和脂肪酸和虾青素等多种营养物质，由于磷虾产品具有清洁血管、抗氧化等多种功效，近几年备受消费者欢迎。
[0003]乙氧喹啉作为一种的抗氧化剂，因其具有防霉保鲜、延长保存期作用，且效果好又经济，因此在饲料中广泛使用。然而食品级磷虾粉是不允许添加抗氧化剂乙氧喹啉的，以食品级磷虾粉为原料，经提取加工制备的磷虾油，不得检出乙氧喹啉。但通过对市场上磷虾油中抗氧化剂乙氧喹啉检测发现，部分产品检出乙氧喹啉残留，检出量从0.5mg/kg～2.5mg/kg不等，使得磷虾油出口受到极大影响。由于管理的不规范等原因，使用饲料级磷虾粉生产制备磷虾油产品，可能会导致磷虾油中乙氧喹啉残留。
[0004]乙氧喹啉已成为影响磷虾产品质量安全问题的重要因素之一。目前已发布的有关乙氧喹啉检测技术标准，并不适用于磷虾产品中乙氧喹啉残留量的分析测定。磷虾产品多以磷虾粉为原料进行提取加工，磷虾产品中乙氧喹啉残留主要来源于磷虾粉中乙氧喹啉残留。通过对磷虾粉进行乙氧喹啉残留量监控，可有效保障磷虾产品质量安全。乙氧喹啉的主要代谢产物为二聚乙氧喹啉。因此建立磷虾粉中乙氧喹啉及其代谢产物的检测技术方法，可为我国加强磷虾粉中乙氧喹啉残留监控工作提供技术支持，对于保护消费者的身体健康，维持磷虾产业的健康持续发展都具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是提供一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法。本专利技术以碳酸钠溶液和丙酮溶液提取磷虾粉样品中的乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉，用正己烷液液萃取目标化合物，在40℃下氮气吹干。用乙腈复溶后，过中性氧化铝或C
18
固相萃取柱净化，再经PSA((N
‑
丙基乙二胺)或Florisil(弗罗里硅土)净化后，进高效液相色谱
‑
荧光检测器测定。本方法乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉的检出限分别为3μg/kg和30μg/kg，定量限分别为10μg/kg和100μg/kg。乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉在10.0～1.00
×
103,100～1.00
×
104μg/kg添加浓度范围内，回收率为70～120％，相对标准偏差≤15％。
[0006]本专利技术是按照以下操作方法完成的：
[0007]一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法，用碳酸钠溶液和丙酮溶液提取磷虾粉中的乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉，提取液用正己烷液液萃取，然后经中性氧化铝或C
18
固相萃取柱净化后，再经PSA或Florisil净化，净化液用高效液相色谱
‑
荧光检测器测定，外标法定量。
[0008]一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法，它包括样品的提取和
净化、标准曲线的绘制、实验所用的仪器条件和定性与定量；具体步骤如下：
[0009](1)提取
[0010]称取磷虾粉样品，加入碳酸钠溶液和丙酮，涡旋震荡，使其分散均匀；加入正己烷，涡旋混合，离心，取正己烷和丙酮层，再加入正己烷重复提取一次，合并提取液，于40℃氮吹至干，用乙腈复溶，待净化；
[0011](2)净化
[0012]将步骤(1)待净化液转移至已活化的中性氧化铝或C
18
固相萃取柱中，用乙腈洗脱，收集所有流出液，并在40℃下氮气吹干，用乙腈定容；加入PSA或Florisil净化剂进一步净化，充分涡旋混合均匀，高速离心取上清液，过有机相滤膜后供高效液相色谱仪测定；
[0013](3)标准曲线的绘制
[0014]分别配制乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉梯度系列混合标准溶液，并按照设定的液相色谱条件进样分析；
[0015](4)仪器条件
[0016]色谱条件如下：
[0017]a)色谱柱：C
18
反相色谱柱，4.6mm
×
250mm，5μm；
[0018]b)柱温：30℃；
[0019]c)流速：1.2mL/min；
[0020]d)进样量：20μL；
[0021]e)荧光检测器：激发波长360nm，发射波长435nm；
[0022]f)流动相：A为水，B为乙腈，梯度洗脱程序见表1；
[0023]表1流动相梯度洗脱条件
[0024]时间/(min)A/(％)B/(％)0.0030704.0059511.0059511.50307015.003070
[0025](5)定性与定量
[0026]①
定性测定
[0027]在同样测试条件下，试样液中目标化合物的保留时间与标准工作液中目标化合物的保留时间之比，偏差在
±
5％以内；
[0028]②
定量测定
[0029]取试样溶液和相应的标准工作液，作多点校准，按外标法定量，标准溶液及试样溶液中目标化合物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。
[0030]进一步，所述步骤(1)中磷虾粉与碳酸钠溶液的质量体积比为1g/2.5mL，碳酸钠溶液的浓度为100g/L。
[0031]进一步，丙酮的加入量与碳酸钠溶液体积相等。
[0032]进一步，正己烷的用量为待萃取溶液体积的1
‑
2倍。
[0033]进一步，乙腈复溶至1.0mL。
[0034]进一步，所述的步骤(1)中涡旋混合2min，4000r/min离心5min。
[0035]进一步，所述步骤(2)中的固相萃取柱为中性氧化铝固相萃取柱(1g/6mL)或C
18
固相萃取柱(1g/6mL)；中性氧化铝固相萃取柱的乙腈洗脱体积为3mL，C
18
固相萃取柱的乙腈洗脱体积为5mL。
[0036]进一步，所述步骤(2)中的净化剂为PSA或Florisil净化剂。
[0037]进一下，称取磷虾粉的质量为2g，碳酸钠溶液的体积为5mL。
[0038]本专利技术与现有技术相比的有益效果：
[0039]1.目前有关乙氧喹啉检测技术方法，研究的基质主要有禽肉、畜肉、水果、蔬菜和水产品等，磷虾粉样品基质成分非常复杂，已有的检测方法中样品缺少必要的净化步骤，并不适用于磷虾粉中乙氧喹啉残留量的分析测定。
[0040]2.本方法建立了同时分析磷虾粉中乙氧喹啉及其代谢物二聚乙氧喹啉的高效液相色谱分析方法，一次前处理、一次进样，即可同时检测原型药物乙氧喹啉，以及其代谢产物二聚乙氧喹啉，弥补了现有高效液相色谱检测方法只分析乙氧喹啉，缺少分析其代本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法，其特征在于所述方法为以碳酸钠溶液和丙酮溶液提取磷虾粉样品中的乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉，提取液用正己烷液液萃取，然后经中性氧化铝或C
18
固相萃取柱净化后，再经PSA或Florisil净化，净化液用高效液相色谱
‑
荧光检测器测定，外标法定量。2.根据权利要求1所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法，其特征在于，所述方法包括样品提取、净化、标准曲线的绘制、实验所用的仪器条件和定性与定量；具体步骤如下：(1)样品提取称取磷虾粉样品，加入碳酸钠溶液和丙酮，涡旋震荡，使其分散均匀；加入正己烷，涡旋混合，离心，取正己烷和丙酮层，再加入正己烷重复提取一次，合并提取液，于40℃氮吹至干；用乙腈复溶，待净化；(2)样品净化将步骤(1)待净化液转移至已活化的中性氧化铝或C
18
固相萃取柱中，用乙腈洗脱，收集所有流出液，并在40℃下氮气吹干，用乙腈定容至1mL；加入PSA或Florisil进一步净化，充分涡旋混合均匀，高速离心取上清液，过有机相滤膜后供高效液相色谱仪测定；(3)标准曲线的绘制分别配制乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉的系列混合标准溶液，并按照设定的液相色谱条件进样分析；(4)实验所用的仪器条件色谱条件如下：a)色谱柱：C
18
反相色谱柱，4.6mm
×
250mm，5μm；b)柱温：30℃；c)流速：1.2mL/min；d)进样量：20μL；e)荧光检测器：激发波长360nm，发射波长435nm；f)流动相：A：水，B：乙腈，采用梯度洗脱程序，见下表时间/(min)A/(％)B/(％)0.0030704.0059511.0059511.50307015.003070(5)定性与定量
①
定性测定在同样测试条件下，试样液中目标化合物的保留时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢丽红，孙伟红，谭志军，李兆新，冷凯良，苗钧魁，刘小芳，孙晓杰，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：