一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定方法技术

本发明专利技术涉及一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定方法

【技术实现步骤摘要】
一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定方法


[0001]本专利技术涉及食品检验
，尤其涉及一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定方法。

技术介绍

[0002]蜂蜜是一种味道甜蜜的天然食品，其除含有葡萄糖、果糖外还有各种维生素、矿物质、氨基酸、生物酶等，因而具有保护肝脏、增强免疫力、杀菌、促进睡眠及胃肠蠕动的保健作用。目前，蜂蜜已被广泛应用于食品行业，作为养生产品越来越受欢迎，因而其质量安全直接影响消费者的身体健康。
[0003]蜜蜂在养殖过程中易受到微生物和螨虫的污染而引起病害，通常蜂农会直接饲喂或者在蜂巢中喷洒硝基呋喃类药物，以预防蜜蜂的虫病灾害，这就会造成蜂蜜中硝基呋喃类代谢物的残留。
[0004]硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗菌药物，主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因4种。硝基呋喃类药物对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体具有低浓度抑制、高浓度杀灭的作用。硝基呋喃类药物不稳定，摄入后在动物机体内快速分解代谢，半衰期为7
‑
63分钟，代谢产物分别为3
‑
氨基
‑2‑
唑烷基酮(AOZ)、5
‑
甲基吗啉
‑3‑
氨基
‑2‑
唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1
‑
氨基乙内酰脲(AHD)，它们的代谢物可以与组织蛋白结合，并在体内停留数周或更长时间。这些代谢物具有致癌、致突变以及损害肺部和心脏肌肉等危害作用，严重威胁着消费者的身体健康。r/>[0005]在这种情况下，开发一种快速、高效、灵敏的蜂蜜中硝基呋喃代谢物的测定方法用于保障蜂蜜的质量安全具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]针对上述问题，现提供一种快速、高效、灵敏的蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留测定方法。
[0007]具体技术方案如下：
[0008]一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定方法，具有这样的特征，包括如下步骤：
[0009]1)混合外标标准储备液和混合外标工作液的配制：称取硝基呋喃代谢物混合外标标准品，用乙腈溶解并定容成浓度为100μg/mL的外标标准储备液，于
‑
20℃避光保存；移取适量外标标准储备液，用乙腈稀释成浓度为100ng/mL的混合外标工作液；
[0010]2)混合内标工作液的配制：将100μg/mL的AOZ
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D4、AMOZ
‑
D5、SEM
‑
13
C
15
N2、AHD
‑
13
C3混合内标标准品溶解在10mL乙腈中，配制成浓度为10μg/mL的硝基呋喃代谢物的混合内标储备液；移取适量混合内标储备液，用乙腈稀释成浓度为100ng/mL的混合内标工作液；
[0011]3)基质匹配工作液的配制：向不含待测物的蜂蜜样品中添加适量混合外标工作液和混合内标工作液，经过前处理步骤，得到浓度分别为0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、
2.0ng/mL、4.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的系列基质匹配工作液；
[0012]4)样品前处理、净化：称取蜂蜜，加入邻硝基苯甲醛、盐酸溶液，涡旋使其充分混匀，于超声波清洗仪中衍生，衍生完全后再加入提取液，涡旋提取、离心，取全部上清液用200mg PSA+100mg C18进行QuEChERS净化，涡旋提取、离心后经0.22μm聚四氟乙烯滤膜过滤，取上清液；
[0013]5)样品分析检测：采用高效液相色谱
‑
串联谱法对系列基质匹配标准工作液进行测定，绘制标准曲线；以相同参数对步骤4)中上清液进行检测，获得试样中硝基呋喃代谢物的质量色谱图，以保留时间和离子比率对目标物进行定性分析，以内标法定量计算得到待测物的浓度；
[0014]其中，高效液相色谱
‑
串联谱法中流动相A为甲酸
‑
乙酸铵的水溶液，水溶液中甲酸浓度为0.1％(v/v)，乙酸铵浓度为5mmol/L，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液；线性梯度洗脱中流动相A+流动相B＝100％，线性梯度洗脱条件为：0
‑
2min，10.0％B；2
‑
5.5min，10.0
‑
90.0％B；5.5
‑
8min，90.0％B；8
‑
8.1min，90.0
‑
10.0％；8.1
‑
10min，10.0％B。
[0015]上述的快速测定方法，还具有这样的特征，步骤4)中样品前处理、净化方法为：称取蜂蜜试样4g，置于50mL离心管中，添加适量混合内标工作液，再添加0.2mL、0.1mol/L邻硝基苯甲醛及5mL、0.2mol/L盐酸，涡旋混合至完全溶解，在53Hz、60℃条件下水浴超声波中衍生60min，用3.0mL、0.3mol/L K3PO4溶液调pH至7.0
±
0.2后添加8.0mL乙腈和4.0g氯化钠，在剧烈旋转10min后以3900rpm的转速离心3min，取全部上清液转移到含有200mg PSA+100mg C18的10mL离心管中，旋转混合物3min，再在3900rpm下离心3min后经0.22μm聚四氟乙烯滤膜过滤，待分析。
[0016]上述的快速测定方法，还具有这样的特征，步骤5)中标准曲线绘制方法为：以高效液相色谱
‑
串联谱法对浓度分别为0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的系列基质匹配工作液进行检测，获得基质匹配工作液的质量色谱图，以内、外标的峰面积比为纵坐标，以内、外标标准液的浓度比为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程。
[0017]上述的快速测定方法，还具有这样的特征，质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；检测方式为多反应监测；扫描方式为正离子模式扫描；幕气气压为10psi；离子源气体为GS1、50psi；离子源气体为GS2、50psi；离子喷射电压为5500V；源温度为500℃；碰撞气体为氮气。
[0018]上述的快速测定方法，还具有这样的特征，色谱条件为：色谱柱为Waters XBridge C18柱；进样体积为5μL；柱温为40℃；流速为0.3mL/min。
[0019]上述方案的有益效果是：
[0020]1)硝基呋喃代谢物由于分子量较小，且易溶于水，不便直接测定，常需加入邻硝基苯甲醛与目标物发生衍生反应后再经固相萃取小柱净化，而传统恒温振荡衍生技术需要大于16h衍生时间，且蜂蜜基质含糖量高、粘稠度大，大大增加了过净化柱时间；而本专利技术首次采用超声波辅助衍生技术应用于蜂蜜中硝基呋喃代谢物的衍生，以有效降低衍生时间，从而为蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定提供一定技术支持；
[0021]2)蜂蜜中高糖含量以及色素和酚类物质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留的快速测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)混合外标标准储备液和混合外标工作液的配制：称取硝基呋喃代谢物混合外标标准品，用乙腈溶解并定容成浓度为100μg/mL的外标标准储备液，于
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20℃避光保存；移取适量混合外标标准储备液，用乙腈稀释成浓度为100ng/mL的混合外标工作液；2)混合内标工作液的配制：将100μg/mL的AOZ
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D4、AMOZ
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D5、SEM
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13
C
15
N2、AHD
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13
C3混合内标标准品溶解在10mL乙腈中，配制成浓度为10μg/mL的硝基呋喃代谢物的混合内标储备液；移取适量混合内标储备液，用乙腈稀释成浓度为100ng/mL的混合内标工作液；3)基质匹配工作液的配制：向不含待测物的蜂蜜样品中添加适量混合外标工作液和混合内标工作液，经过前处理步骤，得到浓度分别为0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的系列基质匹配工作液；4)样品前处理、净化：称取蜂蜜，加入邻硝基苯甲醛、盐酸溶液，涡旋使其充分混匀，于超声波清洗仪中衍生，衍生完全后再加入提取液，涡旋提取、离心，取全部上清液用200mg PSA+100mgC18进行QuEChERS净化，涡旋提取、离心后经0.22μm聚四氟乙烯滤膜过滤，待分析；5)样品分析检测：采用高效液相色谱
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串联谱法对系列基质匹配标准工作液进行测定，绘制标准曲线；以相同参数对步骤4)中上清液进行检测，获得试样中硝基呋喃代谢物的质量色谱图，以保留时间和离子比率对目标物进行定性分析，以内标法定量计算得到待测物的浓度；其中，高效液相色谱
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串联谱法中流动相A为甲酸
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乙酸铵的水溶液，水溶液中甲酸浓度为0.1％(v/v)，乙酸铵浓度为5mmol/L，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液；线性梯度洗脱中流动相A+流动相B＝100％，线性梯度洗脱条件为：0
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2min，10.0％B；2

【专利技术属性】
技术研发人员：杨明，江小明，杨永，涂凤琴，伊鋆，卢跃鹏，
申请(专利权)人：武汉食品化妆品检验所，
类型：发明
国别省市：